環(huán)境樣品前處理

1、PAGE PAGE 18硅膠的活化：DCM（CH2CL2清洗硅膠）(進(jìn)口的不需要清洗，國產(chǎn)的要清洗)：將硅膠裝于玻璃柱中3倍于硅膠體積的甲醇清洗（大約8001000mL的甲醇）同體積的DCM清洗（大約500ML的DCM）將硅膠置于鋁箔紙上，通風(fēng)廚過夜讓溶劑揮發(fā)干凈（或者N2吹干）馬福爐中550烘烤至少12hrs,然后降溫到180停留至少1hr取出在干燥器中降溫后，轉(zhuǎn)制燒瓶中加塞密閉，于干燥器中備用。Note: 在玻璃柱中清洗時防止硅膠有斷層出現(xiàn)酸性硅膠的配制30酸性硅膠的配制于燒瓶中稱取100g活化硅膠于硅膠上逐滴滴入濃H2SO4共40g(硫酸密度為1.84g/mL)計算公式為 x/(x+10

2、0)=30， x=42.86g, 42.86/1.84=23.3mLNote 邊加邊搖，以防結(jié)塊，或置于搖床上至硅膠為均勻流動狀態(tài)置于干燥器中保存若配制時用50g硅膠，那么H2SO4取11.65mL(大約為21.4g)22%酸性硅膠：8mL濃H2SO4加50g活化硅膠44%酸性硅膠：43mL濃H2SO4加100g活化硅膠44%酸性硅膠：21.5mL濃H2SO4加50g活化硅膠431.84/(100+431.84)=44%Note: 樓上的方法不能用于樓下，因為所用的硅膠不同，色譜行為就不同，即使柱形一樣。因為樓上用的硅膠與樓下的不同，所以不能方法混用。樓上硅膠是國產(chǎn)，樓下的是進(jìn)口的。堿性硅膠的

3、配制（1.2%）100g活化硅膠滴入30g 1 N的NaOH(1N NaOH: 1.2gNaOH溶于30mL水)注意：不要使硅膠沾到燒瓶的內(nèi)磨口上，否則蓋子關(guān)上后容易粘住打不開樓上用的是33%的堿性硅膠 （水NaOH）/(水NaOH+硅膠)33%1g NaOH 加到25mL水里，即配制成了1mol/L的溶液，然后加入到50g活化硅膠中。氧化鋁：酸性氧化鋁的活化酸性氧化鋁裝于燒瓶中（體積不超過一半）用鋁箔紙疏松的蓋住瓶口在干燥烘箱中130過夜（至少12hrs）干燥器中加塞密閉干燥器中備用堿性氧化鋁：（最好在兩周內(nèi)使用，后者最好在5天內(nèi)用完，否則易失活，可能需要重新活化）堿性氧化鋁盛于蒸發(fā)皿中馬福

4、爐中600烘至少24hrs降溫到130停留至少3hrs干燥器中降溫后轉(zhuǎn)至燒瓶中，于干燥器中備用弗羅里土：Florisil(硅酸鎂)150mm5mmID小柱底部用玻璃棉輕輕塞住取1g 弗羅里土裝于柱子中，并且輕輕拍動柱子讓填料均勻沉降上層再裝約1cm的無水Na2SO450mL DCM清洗小柱卸去四氟閥，放于通風(fēng)櫥中過夜，讓溶劑揮發(fā)干整個柱子置于干燥烘箱中，140至少24hrs如不使用則在140下存放Note：使用時將柱取出降至室溫，90分鐘內(nèi)使用，否則重新活化。AgNO3 硅膠（10%）的配制5.6g AgNO3溶于21mL超純水中逐滴加入到50g活化硅膠中（或者11.2g AgNO3+35mL

5、水+100g硅膠）用鋁箔紙將裝AgNO3硅膠的燒瓶全部包裹住，燒瓶口用鋁箔紙疏松地蓋住，置于干燥烘箱中烘箱中30烘5hrs(至少5hrs)升溫到60停留3hrs中間慢點升溫升溫到180至少12hrs干燥器中降溫后加塞密閉（保存在棕色干燥器中備用）Note:如果在制作過程中發(fā)現(xiàn)AgNO3硅膠顏色加深或者局部變?yōu)榛液谏?，?yīng)該棄去此次配制。變色原因：升溫過快。Note:裝AgNO3的小燒杯要盡快用超純水洗凈，否則AgNO3會粘到燒杯上，不容易洗干凈。Na2SO4： 660下馬福爐中烘至少6 hrs（優(yōu)級純）注意：提取筒洗過后要在馬福爐里420烘一段時間純化注意事項：1 所有純化柱均采用干法裝制；2

6、裝好填料后輕拍柱子至填料表層平整；3 一旦加上洗脫液后，則不要再拍動柱子；4 一定量的hexane預(yù)淋洗進(jìn)行穩(wěn)定，并且除去部分污染雜質(zhì)；5 預(yù)淋洗時流速控制在2滴/S;6 填料若出現(xiàn)斷層則不能再使用；7上柱樣品后，用1mL正己烷清洗燒瓶；8 要等上一組分液面約1mm時再上樣；9 若是做流出曲線，對體積要求就會嚴(yán)格一些，接流出物的量筒用鋁箔包上，防止溶劑揮發(fā)。酸洗or酸性硅膠柱：1.5cm內(nèi)徑（15mmID）結(jié)構(gòu)式 SiO玻璃毛填充5g 44%酸性硅膠5g 22%酸性硅膠（這個是為了防止44%硅膠發(fā)生炭化）2g活化硅膠2 cm無水Na2SO450mL70mL的Hexane淋洗樣品上樣70mL10

7、0mLHexane洗脫旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至23mL2 cm無水Na2SO42g活化硅膠5g 22%酸性硅膠5g 44%酸性硅膠淋洗用的Hexane量由所加的硅膠量決定，若酸性硅膠（22%+44%）一共才10克，就不用100mLHexane洗脫，70mL足夠，太多反而將雜質(zhì)洗脫下來了。預(yù)淋洗用溶劑量也不一定要50mL70mL,由硅膠量決定。酸洗前一定要記?。阂欢ㄒ獙⑷軇┲脫Q為Hexane再酸洗。硫酸硅膠柱凈化容量不足，雜質(zhì)易與dioxin 及PCBs競爭氧化鋁及florisil的活性基位（Active sites），使dioxin 及PCBs在流洗過程中損失，降低了回收率。故acid silica要不能被

8、穿透為止（由管柱的顏色外觀可以判定是否被穿透）Note：酸洗前，若樣品溶劑為DCM，要將DCM置換成Hexane，CH2CL2不能與H2SO4混合，過酸性柱前將甲苯溶劑也要置換為Hexane,甲苯剩下的越少越好。酸洗：（注意酸洗最多次數(shù)不要超過3次，否則影響回收率）在溶液中加入15g酸性硅膠和攪拌磁子，在磁力攪拌器上攪拌30mins取上清液過無水Na2SO4小柱剩下的硫酸硅膠用1020 ML的Hexane清洗兩次（于磁力攪拌器上攪拌各10分鐘）每次清洗后過無水Na2SO4小柱，一并收集合并后收集濃縮酸性硅膠柱可以吸附許多離子或者非離子性官能基化合物，包括生物堿，糖脂，配糖物（醣），染料，堿金屬

9、離子，脂質(zhì)，甘油，類固醇，可塑劑，多環(huán)芳香族化合物及酚類衍生物等。酸堿硅膠柱純化（復(fù)合硅膠柱）30cm15mmID底部有200目玻璃砂芯和四氟磨口閥1g活化硅膠1g活化硅膠4g堿性硅膠 4g堿性硅膠1g活化硅膠 1g活化硅膠8g酸性硅膠 8g酸性硅膠2g活化硅膠 1g活化硅膠1cm無水Na2SO4 2gAgNO3硅膠100mLHexane預(yù)淋洗2cm無水Na2SO475mLHexane洗脫100mLHexane預(yù)淋洗上樣后用150mL (DCM/Hexane=5/95)洗脫2 cm無水Na2SO42cm無水Na2SO41g活化硅膠2 g AgNO3硅膠8g 44%酸性硅膠1g活化硅膠8g酸性硅

10、膠1g活化硅膠3g堿性硅膠1g活化硅膠1g活化硅膠4g堿性硅膠1.5g2 g AgNO3硅膠1g活化硅膠1g活化硅膠樓下的方法 ：先用100mLHexane預(yù)淋洗，上樣后用150mL洗脫。DCM/Hexane5/95樓上的方法 ：先用70mL90mLHexane預(yù)淋洗，上樣后，用100mLHexane洗脫。注意：AgNO3硅膠不要加得太多，它對PCBs有吸附作用，AgNO3硅膠盡量稱得準(zhǔn)確些，它對流出曲線影響較大些（AgNO3有一定的極性）分析PBDE時，要用鋁箔紙將層析柱包上，防光（PBDE與AgNO3都要防光）分析PBDE時是一樣的柱子，一樣的填料，洗脫是先100mLHexane預(yù)淋洗，上

11、樣后先用70mLHexane洗，棄去，再用70mL 1：1（DCM/Hexane）洗，這時洗下的就是含有PBDE的成分。1cm無水Na2SO46 g 酸性or 堿性氧化鋁氧化鋁純化柱： 30cm15mmID玻璃柱6 g 酸性or 堿性氧化鋁1cm無水Na2SO4100mL Hexane 預(yù)淋洗酸性氧化鋁 堿性氧化鋁DCM : Hexane (1:1,V:V)DCM:Hexane(1:1, V:V)40mL洗脫 30mL40mL洗脫旋蒸時留1mL左右，因為弗羅里土純化柱太細(xì)，要減小上樣的高度，洗脫時注意控制流速，不能太快，塞子不要垂直，傾斜既可弗羅里土純化柱： 柱型 150mm5mmID玻璃棉1

12、g弗羅里土1cm無水Na2SO450mLDCM清洗溶劑揮發(fā)（要卸下塞子）140下至少烘24hrs冷卻后90min內(nèi)使用（裝上塞子）50mLHexane預(yù)淋洗35mL收集PCBs（30mL-35mL洗脫）DCM:Hexane(5:95,V:V)DCM（二氯甲烷）40mL-45mL收集dioxins生物組織脂肪含量測定和去除：提取脂肪前燒瓶稱重提取液轉(zhuǎn)移至此燒瓶旋轉(zhuǎn)濃縮近干后移至N2流下將多余溶劑吹走，直至天平稱重?zé)o變化（百分位天平）稱量提取后燒瓶重兩次重量差即為脂肪含量脂肪含量【（提取后燒瓶重提取前燒瓶重）/提取樣】（1組織水分百分含量）稱脂后加50mLHexane溶解提取物15g酸性硅膠，攪拌

13、磁子攪拌30mins過無水Na2SO4小柱5mLHexane清洗兩次合并收集后濃縮樓上氧化鋁0.8 cmID,細(xì)柱，半濕法裝柱若是1.0cmID,則Al2O3用10g柱中加30mLHexane8g Al2O31cm Na2SO4預(yù)淋洗（30mL-40mLHexane洗脫）上樣DCM/Hexane5：95 100mL洗脫P(yáng)CBsDCM/Hexane1:1 50mL洗脫dioxins凝膠滲透色譜 GPC填料： Bio-Beads SX3GPC 柱型 30cm25mmID(柱子下面有砂芯)填料 30g于燒杯中加入DCM:Hexane（1：1，V：V）全部蓋住鋁箔紙蓋住燒杯置于通風(fēng)櫥過夜，至少12hr

14、s,填料充分溶脹攪動填料，并用吸管逐步將填料轉(zhuǎn)移到柱中，中間打開四氟閥放去多余的溶劑全部轉(zhuǎn)移后，上部留有10cm溶劑上端加塞，底部關(guān)閥整個柱子倒置后打開閥門振蕩柱體，使填料逐漸整體均勻倒置關(guān)閉閥門，將柱子緩慢扶正，并且打開上面的磨口塞，可以看到填料均勻沉降直至完全應(yīng)該無斷層，無氣泡，無沉降分界層500mL DCM：Hexane（1:1 ,V:V）淋洗，（注意要將溶劑混合均勻）滴速 23滴/S不用時關(guān)閥加塞密閉，上層留有5CM以上的溶劑，GPC使用溶劑均為DCM：Hexane（1：1，V:V）若長時間沒用，純化前用100mL溶劑預(yù)淋洗GPC洗脫DCM：Hexane(1:1,V:V)100mL 預(yù)

15、淋洗（量筒接）量筒1上樣后，先用50 mL DCM：Hexane(1:1,V:V)去掉大分子（量筒接）量筒2另外量筒接70mL(DCM/Hexane=1/1)為PCB 量筒3另外量筒接50mL,量筒4量筒4與量筒2 50mL合并保存，以防重復(fù)實驗時回收再分析注意：1若GPC柱中物料層有氣泡，則上面用塞子堵上，稍微晃一下柱子可以去除。若溶劑干了會造成斷層。2GPC柱用前由于重心作用，上層發(fā)脹，所以需要釋放一段洗脫溶劑，將發(fā)脹部分壓下去，再上樣。N2吹純化后樣品旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)轉(zhuǎn)移入KD管后N2吹剩下0.2-0.3mL左右進(jìn)樣小瓶瓶芯中加15uL的壬烷Kd管中樣品轉(zhuǎn)移至瓶芯N2吹（溫度不要太高3060，太高有損失）洗KD管用DCM or Hexane至少洗2次，合并到進(jìn)樣小瓶瓶芯中N2吹至瓶芯拐彎處上1mm2mm處加入回收標(biāo)保證進(jìn)樣小瓶中最后溶液約為20L左右渦輪注意 進(jìn)樣小瓶與瓶芯大小要搭配加標(biāo)前標(biāo)準(zhǔn)溶液需要提前從冰箱中拿出來平衡大約10幾分鐘配制標(biāo)準(zhǔn)溶液： 舉例PBB標(biāo)樣轉(zhuǎn)移到棕色小瓶A小瓶A用DCM清洗3次（渦輪）貼標(biāo)簽紙（標(biāo)簽紙不要貼太大，用透明膠貼一下）稱空瓶重量W0將裝標(biāo)樣的安培小瓶B按劃線掰開DCM清洗一下滴管，晾干，用滴管將標(biāo)樣安培瓶里的標(biāo)準(zhǔn)溶液吸出轉(zhuǎn)移入小瓶A稱量裝標(biāo)后的小瓶與標(biāo)的重量W1那么W