實驗七微生物大小和數(shù)量的測定課件

1、實驗七 微生物大小和數(shù)量的測定編輯ppt實驗七 微生物大小和數(shù)量的測定編輯ppt目的要求1、掌握用顯微鏡測微尺測量微生物大小的基本原理及方法。2、利用血球計數(shù)器，進(jìn)行微生物數(shù)量的直接測定，并掌握其原理和傳統(tǒng)方法。 編輯ppt目的要求1、掌握用顯微鏡測微尺測量微生物大小的基本原理及方法實驗內(nèi)容一利用顯微鏡測微尺測量微生物大小編輯ppt實驗內(nèi)容一利用顯微鏡測微尺測量微生物大小編輯ppt顯微鏡成像原理經(jīng)過顯微鏡物鏡和目鏡的二級放大，形成肉眼可見的放大的物像（虛像）。編輯ppt顯微鏡成像原理經(jīng)過顯微鏡物鏡和目鏡的二級放大，形成肉眼可見的構(gòu)造及原理目鏡測微尺安裝于顯微鏡的目鏡部位；鏡臺測微尺校正時放置于

2、顯微鏡的載物臺上（樣品處），測量時不需要；利用鏡臺測微尺（已知刻度長度）校正目鏡測微尺在不同物鏡下代表的實際長度（m）。編輯ppt構(gòu)造及原理目鏡測微尺安裝于顯微鏡的目鏡部位；編輯ppt利用鏡臺測微尺校正目鏡測微尺顯微鏡測微尺的組成 目鏡測微尺肉眼可見物像為一級放大（7種，根據(jù)測定的材料不同進(jìn)行選擇）。 鏡臺測微尺肉眼可見物像為二級放大，和觀察樣品處于同一焦面。不可能利用真正的尺子來進(jìn)行測量（微?。?不可能制成（或制作成本過高） 不可能和所觀察樣品同時使用只能用虛擬的尺子進(jìn)行測量（物像）。標(biāo)定。編輯ppt利用鏡臺測微尺校正目鏡測微尺顯微鏡測微尺的組成編輯ppt鏡臺測微尺在4物鏡下的情況編輯pp

3、t鏡臺測微尺在4物鏡下的情況編輯ppt鏡臺測微尺在10物鏡下的情況編輯ppt鏡臺測微尺在10物鏡下的情況編輯ppt鏡臺測微尺在40物鏡下的情況編輯ppt鏡臺測微尺在40物鏡下的情況編輯ppt目鏡測微尺鏡臺測微尺4物鏡下校正示意圖編輯ppt目鏡測微尺鏡臺測微尺4物鏡下校正示意圖編輯ppt目鏡測微尺鏡臺測微尺10物鏡下校正示意圖編輯ppt目鏡測微尺鏡臺測微尺10物鏡下校正示意圖編輯ppt目鏡測微尺鏡臺測微尺40物鏡下校正示意圖編輯ppt目鏡測微尺鏡臺測微尺40物鏡下校正示意圖編輯ppt目鏡測微尺鏡臺測微尺100物鏡下校正示意圖編輯ppt目鏡測微尺鏡臺測微尺100物鏡下校正示意圖編輯ppt編輯ppt

4、編輯ppt說明：鏡臺測微尺刻度距離的物像隨物鏡的變化而變化（由小變大）；目鏡測微尺刻度距離的物像在目鏡不變換的情況下，是不隨物鏡的變化而變化。目鏡測微尺校正（代表）尺寸隨物鏡放大倍數(shù)增大成反比例減小。編輯ppt說明：鏡臺測微尺刻度距離的物像隨物鏡的變化而變化（由小變大）注意：刻度的刻線會隨物鏡的放大倍數(shù)而變粗（物像）；校正的目鏡測微尺在不同物鏡下代表的長度是和物鏡的放大倍數(shù)成反比的；實際校正過程中，會因加工精度和刻度的放大出現(xiàn)微小誤差。編輯ppt注意：刻度的刻線會隨物鏡的放大倍數(shù)而變粗（物像）；編輯ppt實驗步驟菌種： 釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ）1、放置目鏡

5、測微尺（已放好，或直接使用測微目鏡）2、放置鏡臺測微尺（1毫米被100等分，放于載物臺上）3、校正目鏡測微尺（不同物鏡倍數(shù)）4、用校好的目鏡微尺測定酵母菌大?。?0個細(xì)胞，同時觀察酵母菌形態(tài)），計算平均值5、微生物的大小表述：寬長（m）說明： 微生物（其它生物也有類似的情況）的大小是有一定范圍的，實際表述為0.51.04.0 7.0m（舉例） 編輯ppt實驗步驟菌種：編輯ppt目鏡測微尺校正結(jié)果接物鏡接物鏡倍數(shù)目鏡測微尺格數(shù)鏡臺測微尺格數(shù)目鏡測微尺每格代表的長度（m）搜索物鏡低倍鏡高倍鏡油鏡接目鏡放大倍數(shù)： 編輯ppt目鏡測微尺校正結(jié)果接物鏡接物鏡倍數(shù)目鏡測微尺格數(shù)鏡臺測微尺格微生物大小測定結(jié)

6、果微生物細(xì)胞編號目鏡測微尺每格代表的長度（m）寬長目鏡測微尺格數(shù)計算實際寬度（m）目鏡測微尺格數(shù)計算實際寬度（m）12345678910平均寬、長（m）菌體大小范圍（m）實驗用微生物名稱：編輯ppt微生物大小測定結(jié)果微生物細(xì)胞編號目鏡測微尺每格代表的長度（實驗內(nèi)容二利用血球計數(shù)板測定酵母細(xì)胞數(shù)編輯ppt實驗內(nèi)容二利用血球計數(shù)板測定酵母細(xì)胞數(shù)編輯ppt顯微鏡直接計數(shù)法是將待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上（又稱計數(shù)器），于顯微鏡下直接計數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。國內(nèi)常用的計數(shù)器有血球（血細(xì)胞）計數(shù)板、 Petroff-Hausser計菌器及Hawksley計菌器。血

7、球（血細(xì)胞）計數(shù)板是一塊特制的載玻片，由四條槽構(gòu)成三個平臺；中間較寬的平臺又被一短槽隔成兩半，每一邊的平臺各刻有一個方格網(wǎng)，每個方格網(wǎng)共分為九個大方格，中間的大方格即為計數(shù)室。編輯ppt顯微鏡直接計數(shù)法是將待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面血球計數(shù)板俯視圖血球計數(shù)板剖面圖編輯ppt血球計數(shù)板俯視圖血球計數(shù)板剖面圖編輯ppt不同規(guī)格血球計數(shù)板的計數(shù)室（a）麥?zhǔn)涎蛴嫈?shù)板；（b）希里格氏血球計數(shù)板編輯ppt不同規(guī)格血球計數(shù)板的計數(shù)室（a）麥?zhǔn)涎蛴嫈?shù)板；（b）希里格血球計數(shù)板的大方格顯微照片編輯ppt血球計數(shù)板的大方格顯微照片編輯ppt血球計數(shù)板的中方格及小方格顯微照片編輯ppt血球計數(shù)板的

8、中方格及小方格顯微照片編輯ppt實驗步驟菌種： 釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ）稀釋鏡檢計數(shù)室（熟悉計數(shù)室結(jié)構(gòu)） 蓋上蓋玻片加樣品（不能有氣泡）靜止5分鐘左右顯微鏡計數(shù)（5個中方格）清洗血球計數(shù)板利用吸水紙擦拭干凈。注意觀察出芽情況，計算總菌數(shù)、出芽率。計算公式：（B=100）編輯ppt實驗步驟菌種：編輯ppt將結(jié)果記錄于下表中A表示五個中方格中的總菌數(shù)；B表示菌液稀釋倍數(shù)。計數(shù)室各中方格中菌數(shù)AB二室平均值菌數(shù)/ml12345第一室第二室編輯ppt將結(jié)果記錄于下表中A表示五個中方格中的總菌數(shù)；B表示菌液注意：位于格線上的菌體一般只計入上方和右邊線上的細(xì)胞；對于酵

9、母菌來說，出芽生殖的芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半時，即作為兩個菌體（細(xì)胞）計數(shù)，反之，計為一個；血球計數(shù)板只適用于計數(shù)單細(xì)胞生物；細(xì)菌等原核生物因需要在油鏡下觀察，一般血球計數(shù)板不能使用，而采用Petroff-Hausser計數(shù)板（進(jìn)口購買，其計數(shù)室有效空間高度為0.02mm）。編輯ppt注意：位于格線上的菌體一般只計入上方和右邊線上的細(xì)胞；編輯p附：活菌染色美蘭法在顯微鏡下區(qū)分死活菌觀察活菌的方法？注意死活菌的區(qū)分，分別計數(shù)，計算成活率。原理：活菌細(xì)胞新陳代謝中有大量脫氫作用，具有較強(qiáng)的還原性，可以使美蘭褪色變成無色，活細(xì)胞不能染上顏色，死細(xì)胞被染上藍(lán)色。編輯ppt附：活菌染色美蘭法在顯微鏡下區(qū)

10、分死活菌觀察活菌的方法？注實驗步驟菌種： 釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ）操作步驟：取1mL細(xì)胞懸液放入一支小試管中，加入1mL 0.5%美蘭溶液，混勻后立即制片觀察（水封片），或利用血球計數(shù)板制片計數(shù)（可以區(qū)分死活細(xì)胞，計算出細(xì)胞的成活率）。操作要求：動作要快，否則活細(xì)胞接觸美蘭染料過長也會死，一般要求在510分鐘內(nèi)完成計數(shù)。編輯ppt實驗步驟菌種：編輯ppt思考題1、記錄實驗結(jié)果 ，計算出菌懸液中酵母菌的大小、數(shù)量、出芽率和存活率。2、試比較平板菌落計數(shù)法和顯微鏡下直接計數(shù)法的優(yōu)缺點及應(yīng)用？3、在不改變目鏡和目鏡測微尺，而改用不同放大倍數(shù)的物鏡來測定同一菌體的大小時，其測定結(jié)果