益智方對阿爾茨海默病大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響

1、益智方對阿爾茨海默病大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響【摘要】目的討論益智方對阿爾茨海默病AD大鼠學(xué)習(xí)記憶才能的影響。方法在根底飼料中添加三氯化鋁，Al3+劑量為111.9g/kg體重，連續(xù)染毒3個月復(fù)制大鼠AD模型。采用Y-電迷宮儀檢測正常對照組、模型組、低劑量中藥組、中劑量中藥組、高劑量中藥組大鼠學(xué)習(xí)記憶才能，觀察腦區(qū)病理形態(tài)學(xué)改變。結(jié)果益智方能明顯增加大鼠逃避正確率、縮短逃避埋伏期，明顯減輕大鼠腦神經(jīng)元損傷。結(jié)論益智方是防治AD模型大鼠學(xué)習(xí)記憶才能減退的有效藥物?！娟P(guān)鍵詞】鋁阿爾茨海默病大鼠學(xué)習(xí)記憶益智方老年性癡呆是一種多病因參與的神經(jīng)退行性疾病,伴隨著老年人口的增加，老年性癡呆的發(fā)病率也在增加，其中以

2、阿爾茨海默病AlzhEierAD)較為多見。本病病因復(fù)雜，目前尚缺乏有效的防治藥物與手段。根據(jù)中醫(yī)腎藏精、通腦、主智理論，本研究采用氯化鋁制作大鼠AD模型，討論了自擬益智方對大鼠學(xué)習(xí)記憶才能的影響。1材料與儀器All36H2，分析純，天津雙船化學(xué)試劑廠產(chǎn)品；水合氯醛分析純，天津市華東試劑廠產(chǎn)品；多聚甲醛，化學(xué)純，中國醫(yī)藥集團(tuán)上海試劑化學(xué)公司產(chǎn)品。中藥復(fù)方組份：淫羊藿、熟地、黃芪等組成，由河北省石家莊醫(yī)藥公司提供，生藥經(jīng)河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室鑒定均為純品。按傳統(tǒng)方法將中藥浸浴1h，文火煎兩次，去渣，合并、濃縮，每毫升生藥含量為2.7g，4冰箱保存，用前巴氏消毒。G-2型Y-電迷宮儀，張家港

3、市生物醫(yī)學(xué)儀器廠消費；A切片機Lukar-2135;全自動纖維攝像系統(tǒng)NeVanx。2方法2.1動物分組與處理選用北京醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供的體重35020g安康3月齡SD大鼠60只(清潔級，合格證號-00-0004)，采用普通飼料適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按體重隨機分為5組，每組12只，其中正常對照組喂普通飼料，模型組及低、中、高劑量3個中藥組在普通飼料的根底上，按體重8%的進(jìn)食量添加All36H2，劑量為：111.9g/kg體重，飼喂添加All36H2飼料當(dāng)天起，3個中藥組用中藥煎劑灌胃，用量為：低劑量中藥組10.8gkg-1d-1、中劑量中藥組21.6gkg-1d-1，高劑量中藥組30.4g/

4、kg/天，模型組、對照組大鼠每日灌服等量溫開水。動物自由飲水，動物房溫度202，第90天，采用Y-電迷宮儀訓(xùn)練和測定大鼠學(xué)習(xí)記憶才能。2.2學(xué)習(xí)記憶才能測試參照郭宗君方法1，在夜晚安靜和避光的條件下，用型電迷宮儀訓(xùn)練和測試大鼠的學(xué)習(xí)記憶才能。大鼠首先在型電迷宮儀的平安臂燈源處停留適應(yīng)1in，然后給予電刺激電壓90V，持續(xù)1s，當(dāng)大鼠逃避到新的平安臂燈源處時，讓大鼠在該處休息適應(yīng)1in,順時針依次將通電臂換為平安臂，連續(xù)訓(xùn)練和測定4d，每天10次/只，記錄每只大鼠逃避正確率，受電刺激后，大鼠從通電臂燈源處直接逃至平安臂燈源處為正確逃避，所用時間為逃避埋伏期，假如電刺激后，大鼠不出現(xiàn)逃避或逃避到平

5、安臂的非燈源處停留，且對敲擊聲沒有做出正確反響的為逃避錯誤，其埋伏期記為10s,逃避正確率越高，逃避埋伏期越短，說明學(xué)習(xí)記憶才能越好。2.3腦區(qū)病理形態(tài)學(xué)檢查行為實驗測試完畢后，從每組隨機抓取4只大鼠，采用4%水合氯醛按1l/100g體重腹腔注射，麻醉后固定大鼠，從大鼠胸骨劍突處開胸，經(jīng)左心室插管至主動脈，快速灌注0.01l/L的冷生理鹽水100l沖洗血液，之后用4%多聚甲醛500l灌注，取腦組織后立即固定于4%多聚甲醛中，常規(guī)石蠟切片，HE染色，觀察腦組織形態(tài)改變。2.4數(shù)據(jù)處理實驗結(jié)果采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)展統(tǒng)計分析。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3結(jié)果3.1大鼠一般狀況模型組大鼠精

6、神萎靡，常聚堆靜臥，被毛蓬松，反響遲鈍。各中藥組大鼠上述病癥明顯減輕，且隨劑量增加效果愈加明顯。3.2益智方對大鼠Y-迷宮逃避正確率的影響由表1可見，在連續(xù)前3天的測試中，模型組、各中藥組大鼠逃避正確率與對照組無顯著性差異P0.05，至第4天，模型組大鼠的逃避正確率沒有再升高，而明顯低于正常對照組P0.05，中劑量與高劑量中藥組大鼠逃避正確率明顯高于模型組P0.05或P0.01，各中藥組之間大鼠逃避正確率無顯著性差異P0.05。表1各組大鼠Y-迷宮逃避正確率比擬略與正常對照組比擬，*P0.05；與模型組比擬，#P0.05#P0.013.3益智方對大鼠逃避埋伏期影響連續(xù)訓(xùn)練3d后，第4天測定各組

7、大鼠逃避埋伏期。由圖1可見，與正常對照組比擬，模型組大鼠逃避埋伏期明顯延長P0.05；與模型組比擬，中劑量組與高劑量組大鼠逃避埋伏期明顯縮短P0.05或P0.01，各模型組大鼠之間逃避埋伏期無顯著性差異。3.4大鼠腦組織學(xué)形態(tài)學(xué)觀察在光鏡下觀察，對照組大鼠皮層、海馬細(xì)胞排列規(guī)那么。模型組大鼠皮層錐體神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，排列紊亂，層數(shù)減少，胞核染色體加深；海馬A1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞排列紊亂，層數(shù)減少，神經(jīng)元數(shù)目減少，錐體細(xì)胞顆粒空泡變性，膠質(zhì)細(xì)胞增多，深染，并可見許多固縮細(xì)胞，A3區(qū)發(fā)現(xiàn)許多細(xì)胞內(nèi)有神經(jīng)纖維纏結(jié)NFT樣改變。低劑量中藥組大鼠腦組織神經(jīng)細(xì)胞也呈現(xiàn)同上病變。中劑量組與高劑量中藥組大鼠上述病變

8、明顯減輕。4討論鋁是一種神經(jīng)毒素，易沉積于腦內(nèi)而對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有毒性作用，到目前為止，鋁對學(xué)習(xí)記憶的抑制作用已在多數(shù)動物和人身上實驗得到證實25。國外有人報道鋁作業(yè)工人的短期記憶才能、學(xué)習(xí)才能、視空間感知才能、心理運動才能均受到一定程度的損害。也有調(diào)查顯示鋁廠附近的兒童其智力要明顯低于同年齡的其他兒童。國內(nèi)有研究說明,鋁熔鑄工人的視覺感知記憶力、注意力、手的運動協(xié)調(diào)才能均下降、反響時標(biāo)準(zhǔn)差和最慢反響時間延長、數(shù)字譯碼和視覺保存時間延長,提示鋁對神經(jīng)行為功能有影響。動物實驗發(fā)現(xiàn),給貓、家兔、大鼠和小鼠等染鋁,均可引起一系列行為異常,而且動物出現(xiàn)認(rèn)知和記憶障礙的時間也早于其它指標(biāo)。以往利用鋁制備

9、AD動物模型多以灌胃方式、腹腔注射及腦室注射為造模途徑，與人體實際情況下經(jīng)水或食物的慢性攝鋁方式不符。本次研究我們以食物中添加All3的方式對大鼠進(jìn)展亞慢性染毒,采用電迷宮測定大鼠學(xué)習(xí)記憶才能，結(jié)果顯示，對照組大鼠在電刺激后逃避啟動迅速，目的明確，方向正確，逃避過程中表現(xiàn)很慎重。模型組大鼠在電刺激后，多數(shù)表現(xiàn)為驚、恐、呆、慢的特點，逃避過程中表現(xiàn)各異，或在起始點轉(zhuǎn)圈不向前跑、或中途停滯不前，且所選擇的逃避終點也各不一樣。模型組大鼠逃避埋伏期較正常組出現(xiàn)不同程度的延長，逃避正常率出現(xiàn)不同程度的下降，海馬神經(jīng)細(xì)胞排列紊亂，層數(shù)減少，神經(jīng)元數(shù)目減少，錐體細(xì)胞顆粒空泡變性，膠質(zhì)細(xì)胞增多，海馬與學(xué)習(xí)記憶

10、關(guān)系親密,AD患者病理改變最明顯的部位也是海馬,提示鋁造成的海馬損傷可能是模型組大鼠對燈光信號、空間定位的學(xué)習(xí)及記憶才能明顯下降的重要原因之一。從慢性鋁中毒大鼠學(xué)習(xí)記憶過程與效果來看，模型組大鼠的病癥有多數(shù)似記憶減退期和混亂期AD患者的表現(xiàn)，少數(shù)與癡呆期AD患者相似，說明111.9g/kg體重All3飼喂動物建立了較為理想的AD模型。從AD的病癥和中醫(yī)角度看，AD多屬本虛標(biāo)實，本虛多屬于神經(jīng)虧虛、氣血缺乏、陰虛陽懦，腦髓空虛，標(biāo)實多屬內(nèi)風(fēng)上旋、痰火上擾、血瘀阻于腦脈、飲邪上蒙輕竅等。中醫(yī)強調(diào)“治病必求于本，腦為神主，腎為神根，精化氣，氣生神，神御精，腎通過督脈上通于腦，腦腎一體，精氣神統(tǒng)一，因

11、此，補腎即補腦，補腦即可補腎強精。本研究根據(jù)補腎添精、豁痰去瘀、益氣養(yǎng)血、平肝清腦治那么，研究了自擬益智方對大鼠學(xué)習(xí)記憶才能的影響，結(jié)果說明益智方干預(yù)后，中劑量和高劑量中藥組大鼠的學(xué)習(xí)記憶才能明顯好轉(zhuǎn)，各種異常的神經(jīng)精神病癥明顯減輕或消失。同時，高劑量中藥組大鼠逃避啟動和逃避速度比正常組大鼠還快，逃避是臨難不恐，轉(zhuǎn)移不移。各組大鼠腦形態(tài)學(xué)檢查顯示，中劑量中藥和高劑量中藥組大鼠腦神經(jīng)元損傷脫落比模型組大鼠明顯減輕，高劑量中藥組大鼠的作用更為明顯，實驗結(jié)果說明，益智方可明顯預(yù)防AD模型大鼠學(xué)習(xí)記憶才能的減退，益智方是防治AD的有效藥物。【參考文獻(xiàn)】1郭宗君，郭云良，許貞峰，等.藥物誘導(dǎo)癡呆模型的初步研究J.中國老年學(xué)雜志，1999，195：295.2Girgianni,Faranda,BreiarliR,etal.gnitivedisrdersangeldersexpsedtaluinuJ.GItaledLavErgn,2022,25Suppl:102.3Buhta,KiessetterE,ttA,etal.LngitudinalstudyexainingtheneurtxiityfupatinalexpsuretaluiniuntainingeldingfuesJ.IntArhupEnvirnHealth,2022,76:539.4邢偉,王彪,文濤,等.鋁暴露對大鼠