中文cba實(shí)驗(yàn)步驟

1、CBATM(多重液相蛋白定量技術(shù))操作流程以Th1/Th2/Th17 細(xì)胞因子檢測試劑盒(貨號:560484)為例試劑盒組分試驗(yàn)流程總覽配套試劑除 BD CBA 人 Th1/Th2/Th17 細(xì)胞因子檢測試劑盒提供的試劑外，還需要以下 CBATM(多重液相蛋白定量技術(shù))操作流程以Th1/Th2/Th17 細(xì)胞因子檢測試劑盒(貨號:560484)為例試劑盒組分試驗(yàn)流程總覽配套試劑除 BD CBA 人 Th1/Th2/Th17 細(xì)胞因子檢測試劑盒提供的試劑外，還需要以下 步描所需時1Th1/Th2/Th17 細(xì)胞因子標(biāo)15分2混合 Th1/Th2/Th17 細(xì)胞因子捕10分3捕獲微球、樣本、檢測抗

2、體混合后共3小4明詳見15分5捕獲微球/樣本/檢測抗體復(fù)合15分630s/樣7數(shù)據(jù)分析（FCAP 10分標(biāo)試容1瓶0.81瓶0.81瓶0.8 1瓶0.8HumanTNFCapture1瓶0.81瓶0.81瓶0.8BHuman Th1/Th2/Th17 PE Detection 1瓶4.0C標(biāo)準(zhǔn)Human Th1/Th2/Th17 Cytokine 2 瓶, 0.2 mL 凍D儀器調(diào)校微Cytometer Setup 1瓶1.5itiveControl1管0.51管0.5F洗Wash1G稀釋Assay1H增強(qiáng)Serum Enhancement 1及大于 680 nm 發(fā)射光的流式細(xì)胞儀。下表列舉

3、了部分可用于 CBA 檢測的流式1275 mm BD FalconTM流式上樣管或同類產(chǎn)15 及大于 680 nm 發(fā)射光的流式細(xì)胞儀。下表列舉了部分可用于 CBA 檢測的流式1275 mm BD FalconTM流式上樣管或同類產(chǎn)15 ml：FCAP (PC機(jī)版本：641488 / MacBD CalibriteTM 3色微球（BD CalibriteTM APC 微球（貨號：340487）（雙激光BD FACSCalibur 機(jī)器使用實(shí)驗(yàn)操作細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)將一瓶凍干的細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品小球轉(zhuǎn)移至15ml錐形離心管中， 標(biāo)記為最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品（5000pg/ml；用2ml Assay Diluent

4、 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，室溫平衡至少15分鐘取9支12x75mm流式管，分別標(biāo)記梯度稀釋倍數(shù)每管加入300l Assay 從最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品開始逐個加入300l倍比稀釋液，梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，如下圖所示：（從最高度標(biāo)準(zhǔn)品管取300l溶液至1：2管，吹打混勻，隨后從1：2管取300l溶液至1：4管吹打混儀器型參分群參BDFACSVerseflowCBABDAccuriC6flowBD FACSArrayTM BDFACSCantoIIflowBDLSRFortessaflowBDFACSAriaIIIcellBD FACSCalibur flow cytometer（單激光BD FACSCalibur flow

5、 cytometer（雙激光此類推，直至1：256管最后取1支12x75mm流式上樣管中加入300l Assay Diluent指控管（0pg此類推，直至1：256管最后取1支12x75mm流式上樣管中加入300l Assay Diluent指控管（0pg/ml2. 混合細(xì)胞因子捕獲混合微確定實(shí)驗(yàn)樣本數(shù)（含所有標(biāo)準(zhǔn)品對照，共計18管對照及檢測樣本，如8個待測樣本，9個標(biāo)準(zhǔn)品，1混合前每種捕獲微球需vertex充分渦旋5-15秒（足，建議每吸取一種微球之前充分混勻此微球溶液按照10l/樣本吸取適量的捕獲微球，如樣本數(shù)為18，則每種細(xì)胞因子捕獲微球的量為將所有微球混合于一支流式管中，標(biāo)記為“混合微

6、球”充分渦旋混勻重懸微或血漿，必須做此步驟。其他類型樣本，此步驟可選將混合好的捕獲微球室溫200g，離心5分鐘吸取上清，加入與步驟1）中“混合微球”相同增強(qiáng)液，渦旋混勻室溫避光孵育30分鐘（隨后直接作為“混合微球”與樣本共孵育3. 樣本孵充分渦旋重懸好的“混合微球”，每個實(shí)驗(yàn)管加入標(biāo)準(zhǔn)品管中每管加入50l樣本管中每管加入50l待測樣所有實(shí)驗(yàn)管中加入50l PE室溫避光孵育3小時4. 上機(jī)檢每管加入1ml3. 樣本孵充分渦旋重懸好的“混合微球”，每個實(shí)驗(yàn)管加入標(biāo)準(zhǔn)品管中每管加入50l樣本管中每管加入50l待測樣所有實(shí)驗(yàn)管中加入50l PE室溫避光孵育3小時4. 上機(jī)檢每管加入1ml 吸去或輕柔倒掉上清液，每管加入300