淡豆豉防治早期動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血管損傷的機(jī)制研究

1、淡豆豉防治早期動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血管損傷的機(jī)制研究 白霞牛麗穎劉嬌李清崔力劍竇玉紅曹秀蓮【摘要】目的研究淡豆豉防治早期動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血管損傷的機(jī)制。方法采用高脂飼料喂養(yǎng)法建立大鼠早期動(dòng)脈粥樣硬化模型，同時(shí)灌胃給予淡豆豉提取物，連續(xù)10周，末次給藥后取血、別離血清全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)T，TG，LDL，HDL程度，透射電鏡下觀察主動(dòng)脈損傷的形態(tài)學(xué)變化，流式細(xì)胞儀檢測(cè)主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡率、aspase-3的蛋白表達(dá)和增殖指數(shù)。結(jié)果淡豆豉組20，40g生藥/kg大鼠血清T，TG，LDL程度均較模型對(duì)照組大鼠降低P0.01，主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)明顯較模型對(duì)照組改善，內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡率、aspase-3的

2、蛋白表達(dá)均顯著降低P0.01，而增殖指數(shù)顯著增高(P0.01)。結(jié)論淡豆豉對(duì)早期動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血管損傷有明顯的保護(hù)作用，其機(jī)制可能通過(guò)下調(diào)aspase-3的蛋白表達(dá)，調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡與增殖的平衡來(lái)實(shí)現(xiàn)?！娟P(guān)鍵詞】淡豆豉早期動(dòng)脈粥樣硬化血管損傷aspase-3蛋白淡豆豉SeenSjaePreparatu(SSP)是由豆科植物大豆GlyineaxL.err.的成熟種子和青蒿、桑葉等中藥經(jīng)發(fā)酵加工而成，其中的主要成分大豆異黃酮具有廣泛的生物學(xué)活性，研究資料顯示大豆異黃酮的植物雌激素作用，可以降低人體多種雌激素依賴型疾病的發(fā)病率。據(jù)此思路,我們?cè)缙诘难芯堪l(fā)現(xiàn)淡豆豉對(duì)去卵巢大鼠脂代謝紊亂有明顯的調(diào)

3、整作用，對(duì)心血管系統(tǒng)具有保護(hù)作用13。本實(shí)驗(yàn)采用高脂飼料喂養(yǎng)法建立大鼠早期動(dòng)脈粥樣硬化模型，造成血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，討論淡豆豉對(duì)血管內(nèi)皮損傷的保護(hù)作用及其作用機(jī)制。1.1藥物與試劑淡豆豉，均購(gòu)自石家莊市樂(lè)仁堂藥店，實(shí)驗(yàn)前淡豆豉提取物80%乙醇提取兩次，2h/次，減壓濃縮至4g生藥/l備用。吉非羅齊，保定市古城藥廠，批號(hào)040625，實(shí)驗(yàn)前用溶解，配制濃度為0.016g/l溶液備用；T，TG，LDL，HDL試劑盒，日本協(xié)和株式會(huì)社提供。1.2動(dòng)物SD大鼠二級(jí)，體重180200g，雄性，由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，容許證號(hào)為SXK冀20221003，動(dòng)物飼料亦由該中心提供。1.3儀器全自動(dòng)生化分析儀瑞

4、士；透射式電子顯微鏡日立H-7500型；Epis-XL型流式細(xì)胞儀，美國(guó)Bekanulter公司。1.4方法1.5檢測(cè)方法1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所得數(shù)據(jù)用SPSS軟件包Versin11.5采用方差齊性檢驗(yàn)及t檢驗(yàn)。2結(jié)果表1淡豆豉提取物對(duì)早期動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血脂及脂蛋白的影響略與模型對(duì)照組比較，*P0.05，*P0.01；n=102.2對(duì)早期動(dòng)脈粥樣硬化大鼠主動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué)的影響圖1正常對(duì)照組10000略圖2模型對(duì)照組10000略圖3淡豆豉高劑量組8000略圖4淡豆豉低劑量組8000略圖5陽(yáng)性對(duì)照組20000略3討論本實(shí)驗(yàn)采用高脂食飼法造成大鼠早期動(dòng)脈粥樣硬化模型。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)模型對(duì)照組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮

5、細(xì)胞凋亡率明顯較正常對(duì)照組大鼠升高，增殖指數(shù)明顯降低，aspase-3的蛋白表達(dá)也明顯高于對(duì)照組；光鏡及電鏡觀察也都發(fā)現(xiàn)其血管內(nèi)皮細(xì)胞有明顯的受損。血管內(nèi)皮細(xì)胞(VE)是介于血液與血管壁之間的屏障，其形態(tài)構(gòu)造受損和功能改變，會(huì)導(dǎo)致血管屏障功能的損害，使血液中的脂質(zhì)和單核細(xì)胞等更易沉積在內(nèi)皮下間隙，進(jìn)一步形成泡沫細(xì)胞，而導(dǎo)致高脂血癥(AS)。目前被普遍承受的Rss“損傷反響學(xué)說(shuō)認(rèn)為，內(nèi)皮細(xì)胞功能性的損傷是AS形成早期的始動(dòng)環(huán)節(jié)，也說(shuō)明了AS與血管內(nèi)皮細(xì)胞之間關(guān)系親密。表2淡豆豉提取物對(duì)高脂血癥大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞AP、PI、aspase-3的影響略與模型對(duì)照組比較*P0.05，*P0.01細(xì)胞凋亡是

6、機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育，細(xì)胞分化和病理狀態(tài)中細(xì)胞自主性死亡的過(guò)程。近幾年發(fā)現(xiàn)細(xì)胞異常凋亡在多種心血管疾病的發(fā)生與開(kāi)展中起重要的作用，特別是在高脂血癥斑塊中發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞都經(jīng)歷著凋亡與壞死，而凋亡占主導(dǎo)地位，參與AS的形成過(guò)程4，5。細(xì)胞凋亡是正常血管壁根本細(xì)胞學(xué)事件，通常情況下即有發(fā)生，在AS斑塊中明顯加劇，出現(xiàn)大量細(xì)胞凋亡與細(xì)胞增殖，組成AS斑塊的病理基矗大量研究也證實(shí)了人類AS斑塊中存在細(xì)胞凋亡。由于凋亡細(xì)胞在體內(nèi)存在時(shí)間極短，低比例的凋亡發(fā)生即意味著大量的細(xì)胞凋亡已經(jīng)發(fā)生6。aspase-3屬于半胱氨酸蛋白酶，相當(dāng)于線蟲(chóng)中的ed-3，在破壞細(xì)胞骨架結(jié)果方面有重要作用，這些蛋白酶

7、是引起細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵酶，一旦被信號(hào)途徑激活，能將細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)降解，使細(xì)胞不可逆地走向死亡。因此，假設(shè)能控制該酶的活性對(duì)凋亡的結(jié)局可產(chǎn)生重要影響。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)對(duì)早期動(dòng)脈粥樣硬化大鼠應(yīng)用淡豆豉提取物后，內(nèi)皮細(xì)胞aspase-3的蛋白表達(dá)下調(diào)，凋亡率較模型對(duì)照組降低，增殖指數(shù)增加。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，淡豆豉提取物對(duì)早期動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血管內(nèi)皮損傷有明顯的防治作用，其機(jī)制可能通過(guò)下調(diào)aspase-3的蛋白表達(dá)，調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡與增殖的平衡有關(guān)，其他機(jī)制途徑將另文發(fā)表?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1王鑫國(guó)，葛喜珍，白霞，等.淡豆豉對(duì)去卵巢大鼠脂代謝的影響J.中藥材，2022，269：652.2高淑麗，牛麗穎，曹秀蓮，等.淡豆豉提取物抗心肌缺血作用的研究J.河北醫(yī)藥，2022，299：923.3牛麗穎，劉嬌，崔力劍，等.淡豆豉對(duì)早期動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血管內(nèi)皮損傷的保護(hù)作用J.中藥藥理與臨床，2022，235：923.4Kkx,Knaapen.TherlefapptsisinvasulardiseaseJ.JPathl,2000,190(3):267.5HanDK,Haudenshild,HngK,etal.Evidenefrapptsisinhuan