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文檔簡介

1、實驗四 細胞器的分離 實驗?zāi)康?實驗原理 實驗步驟 作業(yè) 返回大綱1實驗?zāi)康牧私庥貌钏匐x心的方法分級分離細胞 組分的原理和過程。熟悉離心機、勻漿器的使用方法。 返回2實驗原理為了研究某種細胞器的結(jié)構(gòu)、功能或制備某種生物大分子，常需要大量采集細胞的某些亞組分，因此，有必要分離細胞器。細胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)的密度、形狀、大小各不相同，因此它們在同一離心場內(nèi)的沉降速率就不相同。而且在進行沉降時各自要求的離心力也不相同。差速離心的方法就是根據(jù)這一原理，利用不同的離心速度所產(chǎn)生的離心力，將各種亞細胞組分和顆粒分別分離開。當(dāng)離心力低，離心時間短時，細胞核即可沉到管底；加大離心力后，又可分離出線粒體：離心力再加大，

2、又能分離出微體和核糖體。3實驗原理除了差速離心法，還可也使用在差速離心法基礎(chǔ)上改進產(chǎn)生的密度梯度離心法來進行細胞亞組分的分離。這一方法是使離心溶液含有密度逐步增加的（密度梯度）極易溶解的惰性物質(zhì)，例如蔗糖，利用這一密度梯度來維持重力的穩(wěn)定性和抑制對流。操作時，將細胞勻漿液置于離心管的最上層，隨后離心，這樣，不同大小、形狀、密度的細胞結(jié)構(gòu)，由于它們的沉降系數(shù)不同，就會以不同的速率向下移動，分別集中到相應(yīng)的密度區(qū)帶而得以分離。需要注意的是，在離心分級分離前，必須先進行細胞勻漿，使細胞破碎，釋放出各種亞細胞組分。 返回4實驗步驟: 蛙肝 冷生理鹽水10ml洗，吸干水分,放在小燒杯中, 加入預(yù)冷蔗糖液

3、(少于9ml),剪碎 勻漿 紗布過濾 濾液做涂片 2000 rpm離心10 min 沉淀 上清液 作涂片 加預(yù)冷蔗糖液至8ml，吹打均勻 11000 rpm離心20 min，棄上清液 混合液 沉淀 2000 rpm離心10 min，棄上清液 加預(yù)冷蔗糖液，吹打均勻 沉淀 混合液 加0.30.5ml蔗糖液，混勻 11000 rpm離心20 min 作涂片 沉淀 上清液 作涂片 作涂片 返回5實驗步驟、片，自然干燥后，滴加12滴Giemsa染液染色1520min，用蒸餾水洗，鏡檢。片先滴12滴健那綠B于玻片上，挑少許沉淀在染液中混勻，染5min，加蓋片鏡檢。片先滴12滴健那綠B于玻片上，滴一滴上清液在染液中混勻，染5min，加蓋片鏡檢。 返回6作業(yè)：

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