制劑的質(zhì)量控制培訓(xùn)教材

1、目錄TOC o 1-3 h z u HYPERLINK l _Toc11401 3.2.P.5 制劑的質(zhì)量操縱 PAGEREF _Toc11401 3 HYPERLINK l _Toc28482 3.2.P.5.1 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) PAGEREF _Toc28482 3 HYPERLINK l _Toc18506 3.2.P.5.2 分析方法 PAGEREF _Toc18506 4 HYPERLINK l _Toc27982 3.2.P.5.2.1 性狀 PAGEREF _Toc27982 4 HYPERLINK l _Toc29403 3.2.P.5.2.2 鑒不 PAGEREF _Toc2940

2、3 4 HYPERLINK l _Toc13716 3.2.P.5.2.3 檢查 PAGEREF _Toc13716 4 HYPERLINK l _Toc8121 3.2.P.5.2.4 含量測(cè)定 PAGEREF _Toc8121 10 HYPERLINK l _Toc1293 3.2.P.5.3 分析方法的驗(yàn)證 PAGEREF _Toc1293 11 HYPERLINK l _Toc31161 3.2.P.5.3.1 分析方法學(xué)驗(yàn)證用樣品 PAGEREF _Toc31161 11 HYPERLINK l _Toc15858 3.2.P.5.3.2 有關(guān)物質(zhì)方法學(xué)驗(yàn)證 PAGEREF _Toc

3、15858 11 HYPERLINK l _Toc6654 3.2.P.5.3.3 吡啶-3-磺酸方法學(xué)驗(yàn)證 PAGEREF _Toc6654 21 HYPERLINK l _Toc7520 3.2.P.5.3.4 含量測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證 PAGEREF _Toc7520 28 HYPERLINK l _Toc22423 3.2.P.5.3.5 溶出度測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證 PAGEREF _Toc22423 32 HYPERLINK l _Toc31497 3.2.P.5.3.6 微生物限度檢查方法學(xué)驗(yàn)證 PAGEREF _Toc31497 44 HYPERLINK l _Toc31968 3.2.P.

4、5.4 批檢驗(yàn)報(bào)告 PAGEREF _Toc31968 44 HYPERLINK l _Toc19328 3.2.P.5.5 雜質(zhì) PAGEREF _Toc19328 45 HYPERLINK l _Toc22818 3.2.P.5.5.1 雜質(zhì)情況分析 PAGEREF _Toc22818 45 HYPERLINK l _Toc8679 3.2.P.5.5.2 雜質(zhì)制定依據(jù) PAGEREF _Toc8679 46 HYPERLINK l _Toc6152 3.2.P.5.6 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定依據(jù) PAGEREF _Toc6152 46 HYPERLINK l _Toc5125 3.2.P.5.6.

5、1 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) PAGEREF _Toc5125 46 HYPERLINK l _Toc21983 3.2.P.5.6.2質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定依據(jù)及產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果 PAGEREF _Toc21983 503.2.P.5 制劑的質(zhì)量操縱3.2.P.5.1 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)項(xiàng)目方法放行標(biāo)準(zhǔn)限度貨架期標(biāo)準(zhǔn)限度性狀感觀本品為薄膜衣片，除去包衣后顯白色或類(lèi)白色本品為薄膜衣片，除去包衣后顯白色或類(lèi)白色鑒不HPLC法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄 D)供試品溶液中沃諾拉贊峰保留時(shí)刻應(yīng)與對(duì)比品溶液中沃諾拉贊峰保留時(shí)刻一致供試品溶液中沃諾拉贊峰保留時(shí)刻應(yīng)與對(duì)比品溶液中沃諾拉贊峰保留時(shí)刻一致有關(guān)物質(zhì)HPLC法（中國(guó)藥典2010年

6、版二部附錄 D)雜質(zhì)：不得過(guò)0.4%、雜質(zhì)：不得過(guò)0.4%、雜質(zhì)：不得過(guò)0.4%、雜質(zhì)：不得過(guò)0.4%、雜質(zhì)：不得過(guò)0.4%、雜質(zhì)：不得過(guò)0.4%、其他單雜：不得過(guò)0.4%、其他總雜：不得過(guò)1.5%雜質(zhì)：不得過(guò)0.5%、雜質(zhì)：不得過(guò)0.5%、雜質(zhì)：不得過(guò)0.5%、雜質(zhì)：不得過(guò)0.5%、雜質(zhì)：不得過(guò)0.5%、雜質(zhì)：不得過(guò)0.5%、其他單雜：不得過(guò)0.5%、其他總雜：不得過(guò)2.0%吡啶-3-磺酸HPLC法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄 D)不得過(guò)0.4%不得過(guò)0.5%含量均勻度含量均勻度檢查法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄X E）應(yīng)符合規(guī)定應(yīng)符合規(guī)定溶出度溶出度測(cè)定法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄

7、 C第二法）90%85%微生物限度微生物限度檢查法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄 J）細(xì)菌數(shù)不得過(guò)1000cfu/g；霉菌和酵母菌數(shù)不得過(guò)100cfu/g；大腸埃希菌不得檢出/g細(xì)菌數(shù)不得過(guò)1000cfu/g；霉菌和酵母菌數(shù)不得過(guò)100cfu/g；大腸埃希菌不得檢出/g含量HPLC法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄V D)含（C17H16FN3SO2）應(yīng)為標(biāo)示量的93.0%107.0%含（C17H16FN3SO2）應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%110.0%3.2.P.5.2 分析方法 3.2.P.5.2.1 性狀 檢查方法：感觀具體試驗(yàn)操作：取本品，觀看其外觀性狀。限度：本品應(yīng)為薄膜衣片，除去包衣后顯白

8、色或類(lèi)白色。3.2.P.5.2.2 鑒不 檢查方法：高效液相色譜法(中國(guó)藥典2010年版二部附錄 D)儀器與用具：高效液相色譜儀、十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）、電子分析天平、容量瓶、移液管、燒杯，PH計(jì)。試藥與試劑：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。色譜條件：流淌相：0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液（三乙胺調(diào)pH值至7.2）-甲醇（52:48）流速：1.0ml/min 溶劑：流淌相 檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器 波長(zhǎng)：230nm 色譜柱：十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）具體試驗(yàn)操作：在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，比較供試品溶液中沃諾拉贊峰與對(duì)比品溶液中沃諾拉贊峰的保留時(shí)刻

9、。限度：供試品溶液中沃諾拉贊峰與對(duì)比品溶液中沃諾拉贊峰保留時(shí)刻應(yīng)一致。3.2.P.5.2.3 檢查 3.2.P.5.2.3.1 有關(guān)物質(zhì) 檢查方法：高效液相色譜法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄 D)儀器與用具：高效液相色譜儀、十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）、電子分析天平、容量瓶、移液管、燒杯，PH計(jì)。試液與試藥：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。試驗(yàn)條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）； 紫外檢測(cè)器（檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm）； 流淌相：0.05mol/L的磷酸二氫鉀緩沖液（用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.2）-甲醇（52：48）為流淌相A，甲醇為流淌相B，按下表梯度進(jìn)行洗

10、脫； 溶劑：流淌相A； 流速：1.0ml/min。 梯度如下表：時(shí)刻（分鐘）流淌相A（%）流淌相B（%）01000231000452080501000601000 具體試驗(yàn)操作：取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊25mg），周密稱(chēng)定，置50ml量瓶中，加流淌相A適量，振搖，使充分溶解，加流淌相A稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；周密量取適量，加流淌相A定量稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊2.5g的溶液，作為對(duì)比溶液。分不取雜質(zhì)、工作對(duì)比品各適量，周密稱(chēng)定，加流淌相A溶解并稀釋制成每1ml中含各雜質(zhì)均約為2.5g的溶液，作為雜質(zhì)對(duì)比品溶液。取富馬酸沃諾拉贊工作對(duì)比品及雜質(zhì)工作對(duì)比品各適

11、量，加流淌相A溶解并稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊0.5mg及各雜質(zhì)均為2.5g的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。照高效液相色譜法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄 D）試驗(yàn)，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以0.05mol/L的磷酸二氫鉀緩沖液（用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.2）-甲醇（52：48）為流淌相A，甲醇為流淌相B，按上表梯度進(jìn)行洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm。取系統(tǒng)適用性溶液20l注入液相色譜儀，記錄色譜圖，雜質(zhì)、沃諾拉贊、依次出峰，理論板數(shù)按沃諾拉贊峰計(jì)算應(yīng)不低于5000，且沃諾拉贊峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。周密量取供試品溶液、對(duì)比溶液與雜質(zhì)對(duì)比品溶液各20l，分不注入液相色譜儀，記錄色譜

12、圖。 計(jì)算公式：已知雜質(zhì)、： （Ax為供試品溶液中已知雜質(zhì)的峰面積，AS為對(duì)比品溶液中已知雜質(zhì)的峰面積，Wx為已知雜質(zhì)工作對(duì)比品的稱(chēng)樣量，Px為已知雜質(zhì)工作對(duì)比品含量，Vx為已知雜質(zhì)對(duì)比品溶液的稀釋體積，V為供試品溶液的稀釋體積，W為供試品的稱(chēng)樣量） （Ai為供試品溶液中其他單個(gè)未知雜質(zhì)的峰面積，At為對(duì)比溶液主峰面積） （A總為供試品溶液中所有峰的峰面積和，A主為供試品溶液中沃諾拉贊的峰面積，為供試品溶液中已知雜質(zhì)的峰面積之和，At為對(duì)比溶液中沃諾拉贊的峰面積）限度：供試品溶液色譜圖中如顯雜質(zhì)峰（溶劑峰及富馬酸峰除外），雜質(zhì)、按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，不得大于標(biāo)示量的0.5%；其他單個(gè)未知雜質(zhì)峰

13、面積不得大于對(duì)比溶液的主峰面積（0.5%）；其他雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)比溶液的主峰面積的4倍（2.0%）。3.2.P.5.2.3.2 吡啶-3-磺酸 檢查方法：高效液相色譜法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄 D)儀器與用具：高效液相色譜儀、十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）、電子分析天平、容量瓶、移液管、燒杯，PH計(jì)。試液與試藥：磷酸二氫鉀、磷酸、甲醇、水。試驗(yàn)條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）； 紫外檢測(cè)器（檢測(cè)波長(zhǎng)為261nm）； 流淌相：0.01mol/L的磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）為流淌相A，甲醇為流淌相B，按下表梯度進(jìn)行洗脫； 溶劑：

14、流淌相A； 流速：1.0ml/min。梯度如下表：時(shí)刻（分鐘）流淌相A（%）流淌相B（%）01000710007.11090910909.11000201000 具體試驗(yàn)操作：取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊25mg），周密稱(chēng)定，置50ml量瓶中，加流淌相A適量，振搖，使充分溶解，加流淌相A稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取雜質(zhì)工作對(duì)比品適量，周密稱(chēng)定，加流淌相A溶解并稀釋制成每1ml中約含吡啶-3-磺酸2.5g的溶液，作為對(duì)比品溶液。照高效液相色譜法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄 D）試驗(yàn)，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以0.05mol/L的磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至

15、3.0）為流淌相A，甲醇為流淌相B，按上表梯度進(jìn)行洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為261nm。取對(duì)比品溶液、供試品溶液各20l注入液相色譜儀，記錄色譜圖， 計(jì)算公式： （Ax為供試品溶液中吡啶-3-磺酸的峰面積，AS為對(duì)比品溶液中吡啶-3-磺酸的峰面積，Wx為雜質(zhì)工作對(duì)比品的稱(chēng)樣量，Px為雜質(zhì)工作對(duì)比品含量，Vx為吡啶-3-磺酸對(duì)比品溶液的稀釋體積，V為供試品溶液的稀釋體積，W為供試品的稱(chēng)樣量）限度：供試品溶液色譜圖中如顯與對(duì)比品溶液相對(duì)應(yīng)的雜質(zhì)峰，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算不得大于標(biāo)示量的0.5%。3.2.P.5.2.3.3 溶出度檢查方法：溶出度測(cè)定法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄 C第二法） 高效液相色譜法（

16、中國(guó)藥典2010年版二部附錄 D)儀器與用具：溶出儀、溫度計(jì)、高效液相色譜儀、電子分析天平、十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）、容量瓶、移液管、燒杯，PH計(jì)。試液與試藥：鹽酸、磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。試驗(yàn)條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）； 紫外檢測(cè)器（檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm）； 流淌相：0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液（三乙胺調(diào)pH值至7.2）-甲醇（52:48）； 溶劑：pH1.0鹽酸溶液； 流速：1.0ml/min。具體試驗(yàn)操作：取本品，照溶出度測(cè)定法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄X C第二法），以pH1.0鹽酸溶液900ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘

17、50轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)30分鐘時(shí)，取溶液適量濾過(guò)，周密量取續(xù)濾液適量，用溶出介質(zhì)定量稀釋成每1ml中約含沃諾拉贊11g的溶液，作為供試品溶液；另取富馬酸沃諾拉贊工作對(duì)比品適量，用溶出介質(zhì)溶解并定量稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊11g的溶液，作為對(duì)比品溶液，周密量取供試品溶液與對(duì)比品溶液各20l，照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，計(jì)算每片的溶出量。 計(jì)算公式：（A供為供試品溶液的主峰面積；A對(duì)為對(duì)比品溶液主峰面積；M對(duì)為對(duì)比品的稱(chēng)樣量，mg；T對(duì)為對(duì)比品的含量；V對(duì)為對(duì)比品溶液的稀釋體積；V供為供試品溶液的稀釋體積；X為標(biāo)示量，10mg或20mg）限度：不得低于標(biāo)示量的85%。3.2.P.5.2.3.

18、4 含量均勻度檢查方法：含量均勻度檢查法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄 E） 高效液相色譜法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄 D)儀器與用具：高效液相色譜儀、電子分析天平、十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）、容量瓶、移液管、燒杯，PH計(jì)。試液與試藥：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。試驗(yàn)條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）； 紫外檢測(cè)器（檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm）； 流淌相：0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液（三乙胺調(diào)pH值至7.2）-甲醇（52:48）； 溶劑：流淌相； 流速：1.0ml/min。 具體試驗(yàn)操作： 供試品溶液：取本品1片，置100ml量瓶（10mg規(guī)格）或

19、200ml量瓶（20mg規(guī)格）中，加流淌相適量，振搖，使充分溶解，用流淌相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，周密量取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，用流淌相稀釋至刻度，搖勻，即得。 對(duì)比品溶液：取富馬酸沃諾拉贊工作對(duì)比品適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊10mg），周密稱(chēng)定，置100ml量瓶中，加流淌相溶解并稀釋至刻度，搖勻，周密量取5ml，置50ml量瓶中，用流淌相稀釋至刻度，搖勻，即得。 周密量取供試品溶液和對(duì)比品溶液各20l，分不注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積分不計(jì)算每片中沃諾拉贊的含量。依法測(cè)定10片中沃諾拉贊的含量。 計(jì)算公式：含量（%）=（W對(duì)分不為對(duì)比品的稱(chēng)樣量，mg；P對(duì)為對(duì)比品的含量

20、；A樣、A對(duì)分不為供試品、對(duì)比品溶液中沃諾拉贊的峰面積；V樣、V對(duì)分不為供試品溶液、對(duì)比品溶液的稀釋體積） 分不測(cè)定每片以標(biāo)示量為100的相對(duì)含量，求其均值和標(biāo)準(zhǔn)差以及標(biāo)示量與均值之差的絕對(duì)值：如，則供試品的含量均勻度符合規(guī)定；若，則不符合規(guī)定；若，且，則應(yīng)另取20支復(fù)試，依照初、復(fù)試結(jié)果，計(jì)算30支的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和標(biāo)示量與均值之差的絕對(duì)值：如，則供試品的含量均勻度符合規(guī)定；若，則不符合規(guī)定。其中： ，限度：應(yīng)符合規(guī)定。3.2.P.5.2.3.5 微生物限度1.試液及培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基、MUG培養(yǎng)基、pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液、0.9

21、%氯化鈉溶液。2.儀器與用具：智能生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、電動(dòng)吸引器、薄膜過(guò)濾器等。3.具體試驗(yàn)操作：用平皿法，依法檢查（中國(guó)藥典2010年版二部附錄 J）。（1）細(xì)菌、霉菌及酵母菌：供試品配制：按中國(guó)藥典（2010年版二部）微生物限度檢查法（附錄XI J）的規(guī)定，稱(chēng)取供試品10g，加pH 7.0的無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，混勻，靜置10min，取上部澄清液體作為1：10供試液，備用。直接接種法：取1:10供試品每皿1.0ml，分不加入1ml約含50100cfu/m15株試驗(yàn)菌。立即傾注瓊脂培養(yǎng)基1520ml，每株菌平行制備2個(gè)平皿，待凝固后置規(guī)定溫度培養(yǎng)35天觀看結(jié)果，測(cè)定其菌數(shù)

22、。菌液組測(cè)定試驗(yàn)所加入試驗(yàn)菌的菌數(shù)。供試品對(duì)比組：取1:10供試液1ml，按試驗(yàn)組供試液制備方法和菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定其菌數(shù)。（2）操縱菌的檢查法大腸埃希菌：試驗(yàn)組取1：10供試液10ml，分不加入100ml、200ml的膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，加入10100cfu/ml試驗(yàn)菌，35-37培養(yǎng)18-24h；取培養(yǎng)液0.2ml，接種至5mlMUG培養(yǎng)管內(nèi)，培養(yǎng)5h與24h時(shí)，置紫外燈366nm處觀看，然后沿培養(yǎng)基管壁加入數(shù)滴靛基質(zhì)試液。陰性菌對(duì)比組：取1：10供試液10ml，分不加入100ml、200ml的膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，加入10100cfu/ml的金黃色葡萄球菌，同試驗(yàn)組方法進(jìn)行試驗(yàn)。于5、24h在3

23、66nm紫外光下觀看，同時(shí)用未接種的MUG培養(yǎng)基作本底對(duì)比。在紫外光下若管內(nèi)培養(yǎng)物呈現(xiàn)藍(lán)白色熒光，為MUG陽(yáng)性；不呈現(xiàn)熒光，為MUG陰性。觀看后，沿培養(yǎng)管的管壁加人數(shù)滴靛基質(zhì)試液，液面呈玫瑰紅色，為靛基質(zhì)陽(yáng)性；呈試劑本色，為靛基質(zhì)陰性。本底對(duì)比的MUG和靛基質(zhì)試驗(yàn)應(yīng)為陰性。如MUG陽(yáng)性、靛基質(zhì)陽(yáng)性，判檢出大腸埃希菌；如MUG陰性、靛基質(zhì)陰性，判未檢出大腸埃希菌。限度：細(xì)菌數(shù)不得過(guò)1000cfu/g；霉菌和酵母菌數(shù)不得過(guò)100cfu/g；大腸埃希菌不得檢出/g3.2.P.5.2.4 含量測(cè)定檢查方法：高效液相色譜法(中國(guó)藥典2010年版二部附錄 D)儀器與用具：高效液相色譜儀、電子分析天平、十八

24、烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）、容量瓶、移液管、燒杯、PH計(jì)。試藥與試劑：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。色譜條件：流淌相：0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液（三乙胺調(diào)pH值至7.2）-甲醇（52:48）流速：1.0ml/min 檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器 波長(zhǎng)：230nm 溶劑：流淌相 色譜柱：十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm） 具體試驗(yàn)操作：取本品20片，周密稱(chēng)定，研細(xì)，周密稱(chēng)取適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊10mg），置100ml量瓶中，加流淌相適量，振搖，使充分溶解，用流淌相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，周密量取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，用流淌相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液

25、。周密量取20l，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取富馬酸沃諾拉贊工作對(duì)比品適量，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。計(jì)算公式：含量(%)=（A樣為供試品溶液中主峰的面積；A對(duì)為對(duì)比品溶液中主峰的面積；M對(duì)為對(duì)比品的稱(chēng)樣量，mg；M樣為供試品的稱(chēng)樣量，mg；T對(duì)為對(duì)比品的含量；V對(duì)為對(duì)比品溶液的稀釋體積；V樣為供試品溶液的稀釋體積；為平均片重，mg；X為標(biāo)示量，10或20mg）限度：應(yīng)為標(biāo)示量的90%110%。3.2.P.5.3 分析方法的驗(yàn)證 按照化學(xué)藥物質(zhì)量操縱分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則、化學(xué)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的規(guī)范化過(guò)程技術(shù)指導(dǎo)原則、化學(xué)藥物雜質(zhì)研究技術(shù)指導(dǎo)原則等以及中國(guó)藥典2010年版二部

26、附錄中有關(guān)的指導(dǎo)原則提供以下方法學(xué)驗(yàn)證資料。3.2.P.5.3.1 分析方法學(xué)驗(yàn)證用樣品批號(hào)規(guī)格批量（片）試制日期試制地點(diǎn)XA00910mg1552015.1.30山東富創(chuàng)醫(yī)藥科技有限公司XS15030110mg36402015.3.72015030110mg364802015.3.142015.3.152015030210mg361602015.3.162015.3.172015030310mg368402015.3.172015.3.18XB00120mg1452015.2.28XS15030220mg18002015.3.82015.3.92015030420mg184602015.3.

27、182015.3.192015030520mg18520 2015.3.192015.3.202015030620mg185602015.3.202015.3.213.2.P.5.3.2 有關(guān)物質(zhì)方法學(xué)驗(yàn)證3.2.P.5.3.2.1 有關(guān)物質(zhì)檢查方法學(xué)驗(yàn)證總結(jié)試驗(yàn)項(xiàng)目驗(yàn)證結(jié)果條件選擇C18柱，以0.05mol/L的磷酸二氫鉀緩沖液（用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.2）-甲醇（52:48）為流淌相A，甲醇為流淌相B，進(jìn)行梯度洗脫；紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm。系統(tǒng)適用性主峰及各已知雜質(zhì)與相鄰雜質(zhì)分離良好，理論板數(shù)符合要求。專(zhuān)屬性酸、堿、高溫、氧化、光照降解雜質(zhì)均與主峰分離良好，各已知雜質(zhì)與相鄰峰分離

28、良好，主峰及各已知雜質(zhì)峰純度均合格；輔料及其降解產(chǎn)物和梯度峰不干擾本品有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定。檢測(cè)限沃諾拉贊?rùn)z測(cè)限為0.18ng；雜質(zhì)的檢測(cè)限為0.18ng；雜質(zhì)的檢測(cè)限為0.18ng；雜質(zhì)的檢測(cè)限為0.17ng；雜質(zhì)的檢測(cè)限為0.18ng；雜質(zhì)的檢測(cè)限為0.17ng；雜質(zhì)的檢測(cè)限為60ng。定量限沃諾拉贊定量限為0.60ng；雜質(zhì)的定量限為0.59ng；雜質(zhì)的定量限為0.59ng；雜質(zhì)的定量限為0.57ng；雜質(zhì)的定量限為0.61ng；雜質(zhì)的定量限為0.55ng；雜質(zhì)的定量限為2.00ng。線性富馬酸沃諾拉贊在0.0992.962g/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999雜質(zhì)在0.0992.962

29、g/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9995雜質(zhì)在0.0982.943g/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999雜質(zhì)在0.0942.831g/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999雜質(zhì)在0.1023.061g/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999雜質(zhì)在0.0922.752g/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9994雜質(zhì)在0.13.0g/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9997準(zhǔn)確度雜質(zhì)回收率在98.16%100.46%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度良好，RSD=0.72%雜質(zhì)回收率在98.46%100.69%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度良好，RSD=0.73%雜質(zhì)回收率在98.22%99.62%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度良好，

30、RSD=0.44%雜質(zhì)回收率在98.49%100.98%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度良好，RSD=0.82%雜質(zhì)回收率在98.26%100.17%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度良好，RSD=0.70%雜質(zhì)回收率在98.07%100.24%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度良好，RSD=0.79%周密度重復(fù)性試驗(yàn)：測(cè)得雜質(zhì)含量RSD=1.74%，雜質(zhì)含量RSD=2.08%，雜質(zhì)含量RSD=1.91%，雜質(zhì)含量RSD=1.86%，測(cè)得雜質(zhì)含量RSD=2.19%，雜質(zhì)含量RSD=1.61%，其他單雜含量RSD=5.83%，其他總雜含量RSD=5.19%。中間周密度試驗(yàn)：測(cè)得雜質(zhì)含量RSD=1.42%，雜質(zhì)含量RSD=1.49%，雜質(zhì)含量RSD=2.

31、23%，雜質(zhì)含量RSD=1.40%，測(cè)得雜質(zhì)含量RSD=1.63%，雜質(zhì)含量RSD=1.32%，其他單雜含量RSD=5.18%，其他總雜含量RSD=5.40%。溶液穩(wěn)定性供試品溶液、對(duì)比溶液、雜質(zhì)對(duì)比品溶液室溫放置12小時(shí)內(nèi)溶液穩(wěn)定性良好。耐用性采納不同色譜柱，不同的流淌相比例、pH、鹽濃度等檢查本品的有關(guān)物質(zhì)，各已知雜質(zhì)的分離度均符合要求。各已知雜質(zhì)測(cè)的含量的RSD均小于10%。3.2.P.5.3.2.2 有關(guān)物質(zhì)檢查方法學(xué)驗(yàn)證內(nèi)容1、儀器設(shè)備島津LC-20AT高效液相色譜儀、島津SPD-M20A二極管陣列檢測(cè)器島津LC-20AT高效液相色譜儀、島津SPD-M20A紫外檢測(cè)器2、色譜條件選擇

32、及溶液配制2.1色譜條件選擇 同原料藥采納十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以0.05mol/L的磷酸二氫鉀溶液（用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.2）-甲醇（52:48）為流淌相A，甲醇為流淌相B，進(jìn)行梯度洗脫；紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm；流速為1.0ml/min。梯度表如下：時(shí)刻（分鐘） 流淌相A（%） 流淌相B（%）010002310004520805010006010002.2 溶液配制 供試品溶液：取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊25mg），周密稱(chēng)定，置50ml量瓶中，加流淌相A適量，振搖，使充分溶解，加流淌相A稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。對(duì)比溶液：周密量取供試品溶液適量，加

33、流淌相A定量稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊2.5g的溶液，作為對(duì)比溶液。分不取雜質(zhì)、工作對(duì)比品各適量，周密稱(chēng)定，加流淌相A溶解并稀釋制成每1ml中含各雜質(zhì)均約為2.5g的溶液，作為雜質(zhì)對(duì)比品溶液。系統(tǒng)適用性溶液：取富馬酸沃諾拉贊工作對(duì)比品及雜質(zhì)工作對(duì)比品各適量，加流淌相A溶解并稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊0.5mg及各雜質(zhì)均為2.5g的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。3、破壞性試驗(yàn) 破壞試驗(yàn)溶液的配制與處理：溶液稀釋步驟處理方法溶劑輔料空白輔料101.23mg20ml無(wú)降解處理未破壞原料13.43mg+輔料103.61mg20ml無(wú)降解處理高溫破壞原料13.51mg+輔料101.77mg20m

34、l水浴100加熱13小時(shí)高溫空白輔料101.82mg20ml水浴100加熱13小時(shí)光照破壞原料13.44mg+輔料105.01mg20ml光照箱4500LX照耀45小時(shí)光照空白輔料103.66mg20ml光照箱4500LX照耀45小時(shí)酸破壞原料13.39mg+輔料102.57mg20ml1mol/L鹽酸2ml，室溫放置42小時(shí)酸空白輔料100.94mg20ml1mol/L鹽酸2ml，室溫放置42小時(shí)堿破壞原料13.42mg+輔料100.85mg20ml1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，室溫放置42小時(shí)堿空白輔料104.05mg20ml1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，室溫放置42小時(shí)氧化破壞原料1

35、3.25mg+輔料104.44mg20ml高氯酸1ml，室溫放置17小時(shí)氧化空白輔料103.38mg20ml高氯酸1ml，室溫放置17小時(shí)取上述溶液各20l，分不注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)表3.2.P.5.3.2-1。（圖3.2.P.5.3.2-113，制劑的質(zhì)量操縱一第6577頁(yè)）表3.2.P.5.3.2-1 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查破壞試驗(yàn)結(jié)果名稱(chēng)沃諾拉贊總峰面積主峰面積/%物料平衡/%分離度峰純度未 破 壞4.770合格2246747099.924100高溫破壞1.652合格2234047196.52098.85光照破壞1.678合格2234663197.64699.39酸

36、破 壞2.189合格2161695791.01296.50堿 破 壞2.236合格2119482394.78794.41氧化破壞4.642合格2164593189.30997.65計(jì)算公式：物料平衡%=（破壞后總峰面積/濃度）/（破壞前總峰面積/濃度）結(jié)論：溶劑及輔料均不干擾本品的測(cè)定，各破壞條件下主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度符合要求，主峰未檢出不純物，樣品破壞前后物料守恒，故該方法測(cè)定本品有關(guān)物質(zhì)的專(zhuān)屬性良好。4、定量限試驗(yàn) 同原料藥，詳見(jiàn)3.2.S.4.3.2。表3.2.P.5.3.2-2 富馬酸沃諾拉贊及已知相關(guān)雜質(zhì)定量限試驗(yàn)結(jié)果名稱(chēng)峰面積平均RSD%定量限/ng123456雜質(zhì)159014

37、62154616621653179016176.940.57雜質(zhì)24262707269527072996235926488.660.59沃諾拉贊30593252310030473340320331673.710.60雜質(zhì)4510510851094607468256914951.178.950.59雜質(zhì)2579284424362198258523442497.678.980.61雜質(zhì)4012471144094307407944604329.675.960.55雜質(zhì)6520646367526003668764966486.834.062.00 結(jié)論：此法靈敏度較高，在限度范圍內(nèi)可用于富馬酸沃諾拉贊

38、及已知雜質(zhì)定量檢查。5、檢測(cè)限試驗(yàn) 同原料藥，詳見(jiàn)3.2.S.4.3.2。表3.2.P.5.3.2-3 富馬酸沃諾拉贊及已知相關(guān)雜質(zhì)檢測(cè)限試驗(yàn)結(jié)果名稱(chēng)雜質(zhì)雜質(zhì)沃諾拉贊雜質(zhì)雜質(zhì)雜質(zhì)雜質(zhì)C檢測(cè)限ng/ml8.498.898.958.839.188.2630.00檢測(cè)限/ng0.170.180.180.180.180.170.60結(jié)論：此法靈敏度較高，可有效檢出富馬酸沃諾拉贊及已知雜質(zhì)。6、線性關(guān)系試驗(yàn) 同原料藥，詳見(jiàn)3.2.S.4.3.2。表3.2.P.5.3.2-4 富馬酸沃諾拉贊及已知相關(guān)雜質(zhì)線性試驗(yàn)結(jié)果名稱(chēng)濃度范圍（g/ml）線性方程R2沃諾拉贊0.0992.962A=93720C-842.

39、280.9999雜質(zhì)0.0992.962A=94476C-11530.9995雜質(zhì)0.0982.943A=115542C-2715.90.9999雜質(zhì)0.0942.831A=63504C-14470.9999雜質(zhì)0.1023.061A=90488C-1954.70.9999雜質(zhì)0.0922.752A=70947C-3387.40.9994雜質(zhì)0.13.0A=100700C-5469.80.99977、周密度試驗(yàn) 7.1 重復(fù)性試驗(yàn)取本品（批號(hào)：XS150301，規(guī)格：10mg）100片，周密稱(chēng)定其重量，求得平均片重為115.23mg。將上述100片樣品置于研缽中研細(xì)，混勻，作為供試品粉末。分不

40、取雜質(zhì)、工作對(duì)比品各適量，周密稱(chēng)定，加流淌相A溶解并稀釋制成每1ml中含各雜質(zhì)均約為2.5g的溶液，作為雜質(zhì)對(duì)比品溶液。取供試品粉末約11.5g，取雜質(zhì)、工作對(duì)比品各約7.0mg，雜質(zhì)工作對(duì)比品約8.0mg，雜質(zhì)工作對(duì)比品各約5.0mg，雜質(zhì)工作對(duì)比品各約5.3mg，雜質(zhì)工作對(duì)比品約6.0mg，混合均勻，作為供試品。取供試品適量，加流淌相A充分溶解，再加流淌相A稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊0.5mg的溶液，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；周密量取供試品溶液適量，加流淌相A稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊2.5g的溶液，作為對(duì)比溶液。分不周密量取20l，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法計(jì)算各已

41、知雜質(zhì)的含量；未知單雜以自身對(duì)比法計(jì)算其含量。重復(fù)測(cè)定6次，考察周密度。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3.2.P.5.3.2-5。（圖3.2.P.5.3.2-1431，制劑的質(zhì)量操縱一第7895頁(yè)）表3.2.P.5.3.2-5 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果序號(hào)123456平均值RSD%雜質(zhì)（%）0.5010.5060.5070.4960.5110.4870.5011.74雜質(zhì)（%）0.5060.4960.4910.5060.5160.4890.5012.08雜質(zhì)（%）0.5070.5040.5190.5110.5140.4910.5081.91雜質(zhì)（%）0.5080.4990.4980.4900.

42、4870.4830.4941.86雜質(zhì)（%）0.5070.4950.4890.4880.5160.5020.5002.19雜質(zhì)（%）0.5030.5060.4900.4850.4970.5000.4971.61其他單雜（%）0.0200.0200.0220.0220.0200.0190.0215.83其他總雜（%）0.0280.0280.0310.0300.0270.0280.0295.19結(jié)論：試驗(yàn)結(jié)果表明，此法重復(fù)性良好。7.2中間周密度試驗(yàn) 取重復(fù)性項(xiàng)下供試品，由不同試驗(yàn)人員分不在不同日期、不同儀器檢查其有關(guān)物質(zhì)，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3.2.P.5.3.2-6。（圖3.2.P.5.3.2-324

43、9，制劑的質(zhì)量操縱一第96113頁(yè)）表3.2.P.5.3.2-6 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查中間周密度試驗(yàn)結(jié)果序號(hào)123456平均值RSD%雜質(zhì)（%）0.5010.5060.5070.4960.5110.4870.5011.420.4910.5040.5080.5030.4980.502雜質(zhì)（%）0.5060.4960.4910.5060.5160.4890.5031.490.5030.5070.5050.5020.5080.503雜質(zhì)（%）0.5070.5040.5190.5110.5140.4910.5002.230.4840.4940.4930.4890.5060.493雜質(zhì)（%）0.

44、5080.4990.4980.4900.4870.4830.4951.400.4900.4970.4900.4990.5000.498雜質(zhì)（%）0.5070.4950.4890.4880.5160.5020.5001.630.5020.4930.4960.4960.5050.505雜質(zhì)（%）0.5030.5060.4900.4850.4970.5000.4961.320.4880.5020.4960.4910.5010.496其他單雜（%）0.0200.0200.0220.0220.0200.0190.0215.180.0200.0210.0200.0220.0190.021其他總雜（%）0.

45、0280.0280.0310.0300.0270.0280.0295.400.0260.0290.0280.0310.0270.029結(jié)論：此法檢查本品的有關(guān)物質(zhì)中間周密度良好。溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)供試品溶液：取本品適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊25mg），周密稱(chēng)定，置50ml量瓶中，加流淌相A適量，振搖，使充分溶解，加流淌相A稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。對(duì)比溶液：周密量取供試品溶液適量，加流淌相A定量稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊2.5g的溶液，作為對(duì)比溶液。分不取雜質(zhì)、工作對(duì)比品各適量，周密稱(chēng)定，加流淌相A溶解并稀釋制成每1ml中含各雜質(zhì)均約為2.5g的溶液，作為雜質(zhì)對(duì)比品溶液。將上

46、述各溶液于室溫下放置12小時(shí)，分不于0、3、6、9、12小時(shí)，周密量取20l注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積考察溶液穩(wěn)定性，結(jié)果見(jiàn)表3.2.P.5.3.2-79。（圖3.2.P.5.3.2-5064，制劑的質(zhì)量操縱一第114128頁(yè)）表3.2.P.5.3.2-7 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（供試品溶液）名稱(chēng)/時(shí)刻0h3h6h9h12h平均值RSD%未知雜質(zhì)14059370138863998428239855.39雜質(zhì)100409532987895141047598884.03沃諾拉贊43546651435460494347302643443924434341014348

47、87500.13雜質(zhì)2144421347218122210223923221264.74未知雜質(zhì)28351823676549349957886349.34表3.2.P.5.3.2-8 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（對(duì)比溶液）名稱(chēng)/時(shí)刻0h3h6h9h12h平均值RSD%沃諾拉贊2235192245612241462242572242102241390.17表3.2.P.5.3.2-9 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（雜質(zhì)對(duì)比品溶液）峰面積/時(shí)刻0h3h6h9h12h平均值RSD%雜質(zhì)2323312324032327992325382300542320250.4

48、8雜質(zhì)2505242507642511062512642501232507560.18雜質(zhì)1546791543441533191536441542831540540.36雜質(zhì)2228152220392240302235972224712229900.37雜質(zhì)1943491906411885701852351807211879032.77雜質(zhì)2448022465392502332468582375312451931.92結(jié)論：供試品溶液、對(duì)比溶液、雜質(zhì)對(duì)比品溶液12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。準(zhǔn)確性試驗(yàn)雜質(zhì)對(duì)比品溶液：分不取雜質(zhì)（含量73.14%）、（含量72.46%）、（含量62.67%）、（含量99.4

49、4%）、（含量94.37%）、（含量84.59%）工作對(duì)比品各適量，周密稱(chēng)定，加溶劑溶解并稀釋制成每1ml中含各雜質(zhì)均約為2.5g的溶液，作為雜質(zhì)對(duì)比品溶液。供試品溶液：取20140701批原料適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊25mg），周密稱(chēng)定，置50ml量瓶中，加流淌相A適量，使充分溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；按外標(biāo)法計(jì)算各已知雜質(zhì)的百分含量。表3.2.P.5.3.2-10 富馬酸沃諾拉贊各已知雜質(zhì)的測(cè)定結(jié)果名稱(chēng)雜質(zhì)雜質(zhì)雜質(zhì)雜質(zhì)雜質(zhì)雜質(zhì)測(cè)得含量%0.0150.031未檢出未檢出未檢出未檢出回收率溶液：1）取雜質(zhì)、工作對(duì)比品各約11.0mg，雜質(zhì)工作對(duì)比品約12.8mg，雜質(zhì)工作對(duì)比品各約

50、8.0mg，雜質(zhì)工作對(duì)比品各約8.5mg，雜質(zhì)工作對(duì)比品約9.5mg，周密稱(chēng)定，置200ml量瓶中，加流淌相A溶解并稀釋至刻度，搖勻；周密量取1ml，置20ml量瓶中，取原料約13.36mg，周密稱(chēng)定，置同一20ml量瓶中，按處方比例加入輔料，加流淌相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為回收率（80%濃度）溶液。同法配制3份。2）取雜質(zhì)、工作對(duì)比品各約13.7mg，雜質(zhì)工作對(duì)比品約16.0mg，雜質(zhì)工作對(duì)比品各約10.0mg，雜質(zhì)工作對(duì)比品各約10.6mg，雜質(zhì)工作對(duì)比品約11.8mg，周密稱(chēng)定，置200ml量瓶中，加流淌相A溶解并稀釋至刻度，搖勻；周密量取1ml，置20ml量瓶中，取原料約13.3

51、6mg，周密稱(chēng)定，置同一20ml量瓶中，按處方比例加入輔料，加流淌相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為回收率（100%濃度）溶液。同法配制3份。3）取雜質(zhì)、工作對(duì)比品各約16.5mg，雜質(zhì)工作對(duì)比品約19.1mg，雜質(zhì)工作對(duì)比品各約12.0mg，雜質(zhì)工作對(duì)比品各約12.7mg，雜質(zhì)工作對(duì)比品約14.2mg，周密稱(chēng)定，置200ml量瓶中，加流淌相A溶解并稀釋至刻度，搖勻；周密量取1ml，置20ml量瓶中，取原料約13.36mg，周密稱(chēng)定，置同一20ml量瓶中，按處方比例加入輔料，加流淌相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為回收率（120%濃度）溶液。同法配制3份。分不周密量取上述溶液各20l注入液相色譜儀

52、，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)表3.2.S.4.3.2-10、11。（圖3.2.P.5.3.2-6575，制劑的質(zhì)量操縱一第129139頁(yè)）按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品溶液中各雜質(zhì)的量。再按下式計(jì)算回收率：回收率（%）=式中：M測(cè)得量為回收率溶液中已知雜質(zhì)的測(cè)得量； M供試品中的量為回收率溶液中供試品的已知雜質(zhì)的量； M加入量為回收率溶液中已知雜質(zhì)的加入量；表3.2.S.4.3.2-11 富馬酸沃諾拉贊雜質(zhì)測(cè)定回收率試驗(yàn)結(jié)果編號(hào)M加入量/gM測(cè)得量/gM供試品/mg雜質(zhì)%M供試品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%18.298.3313.420.0150.002100.4699.330.7228.22

53、8.1713.390.00299.3738.358.2513.450.00298.78410.1410.1513.370.002100.08510.2010.0913.410.00298.90610.1510.1313.290.00299.78712.0511.9913.270.00299.49812.1011.9813.250.00298.99912.0911.8713.30.00298.16編號(hào)M加入量/gM測(cè)得量/gM供試品/mg雜質(zhì)%M供試品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%18.358.2413.420.0310.00498.6399.320.7328.588.5513.390

54、.00499.6038.578.5213.450.00499.37410.5210.5013.370.00499.77510.9110.8013.410.00498.96610.6810.5213.290.00498.46712.4512.5413.270.004100.69812.2412.2213.250.00499.80912.5112.3413.300.00498.61編號(hào)M加入量/gM測(cè)得量/gM供試品/mg雜質(zhì)%M供試品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%17.877.8413.42未檢出099.6298.850.4427.917.8213.39098.8637.917.821

55、3.45098.8649.959.8113.37098.5959.989.9013.41099.2069.969.8213.29098.59711.9711.7913.27098.50811.8211.7313.25099.24911.8211.6113.30098.22編號(hào)M加入量/gM測(cè)得量/gM供試品/mg雜質(zhì)%M供試品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%18.138.1713.42未檢出0100.49100.110.8228.058.0213.39099.6338.148.2213.450100.98410.2410.1813.37099.4159.949.7913.41098.4

56、969.849.9113.290100.71711.9511.9413.27099.92811.6711.7713.250100.86912.0912.1513.300100.50編號(hào)M加入量/gM測(cè)得量/gM供試品/mg雜質(zhì)%M供試品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%18.808.8013.42未檢出0100.0099.100.7028.838.7913.39099.5538.648.5013.45098.38410.6310.5113.37098.8759.709.6413.41099.38610.4210.2813.29098.66710.8910.7013.27098.26811

57、.2511.1013.25098.67911.6511.6713.300100.17編號(hào)M加入量/gM測(cè)得量/gM供試品/mg雜質(zhì)%M供試品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%18.057.9513.42未檢出098.7699.320.7928.027.9013.39098.5038.028.0313.450100.12410.4210.3313.37099.14510.3710.3313.41099.61610.0310.0513.290100.20711.8611.7713.27099.24812.2512.2813.250100.24911.9111.6813.30098.07結(jié)論：

58、此方法測(cè)定雜質(zhì)準(zhǔn)確性良好。 10、耐用性試驗(yàn) 為考察色譜系統(tǒng)在輕微變化時(shí)的耐用性情況，通過(guò)改變流淌相比例、流淌相pH值、流淌相鹽濃度、流速等色譜因素進(jìn)行試驗(yàn)，計(jì)算含雜質(zhì)的量。分不取雜質(zhì)、工作對(duì)比品各適量，周密稱(chēng)定，加流淌相A溶解并稀釋制成每1ml中含各雜質(zhì)均約為2.5g的溶液，作為雜質(zhì)對(duì)比品溶液。取重復(fù)性項(xiàng)下供試品。取供試品約115.0mg，周密稱(chēng)定，置20ml量瓶中，加流淌相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。周密量取供試品溶液1ml，置200ml量瓶中，加流淌相A稀釋制成至刻度，搖勻，作為對(duì)比溶液。周密量取上述溶液各20l注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算

59、各雜質(zhì)含量，結(jié)果見(jiàn)表3.2.P.5.3.2-1213。（圖3.2.P.5.3.2-76102，制劑的質(zhì)量操縱一第140166頁(yè)）表3.2.P.5.3.2-12 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查耐用性試驗(yàn)結(jié)果1耐用性研究項(xiàng)目方法及條件耐用范圍沃諾拉贊雜質(zhì)雜質(zhì)雜質(zhì)雜質(zhì)雜質(zhì)雜質(zhì)分離度分離度分離度分離度分離度分離度分離度色譜原條件5.5245.5242.2465.931 2.2462.11263.805流速0.955.6605.6602.0456.0462.0451.98761.9881.055.4955.4951.9145.6661.9141.98068.939流淌相比例54-465.4705.4704

60、.2196.0902.8554.37352.25050-505.3585.3581.4395.1141.4391.47979.057pH值7.15.4315.4313.3245.5743.3243.47662.6977.35.9635.9631.3296.5271.3291.36561.412鹽濃度0.0455.3415.3412.6975.4432.6972.93067.9400.0555.5385.5382.5315.7682.5312.57862.714表3.2.P.5.3.2-13 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查耐用性試驗(yàn)結(jié)果2耐用性研究項(xiàng)目方法及條件耐用范圍雜質(zhì)%雜質(zhì)%雜質(zhì)%雜質(zhì)%雜質(zhì)