參麥注射液對大鼠神經(jīng)元內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導凋亡的影響

1、參麥挨針液對年夜鼠神經(jīng)元內(nèi)量網(wǎng)應(yīng)激引誘凋亡的影響李曉峰張黑董素玲王鐵建李燕華李呂力凋亡是腦缺血后神經(jīng)元死亡的一種慌張形式。凋亡疑號路子包含中源性、內(nèi)源性/應(yīng)激路子。缺血后神經(jīng)元的凋亡收死是一個多環(huán)節(jié)調(diào)控過程，其中包含基果表達的改動、快樂性氨基酸的釋放、鈣離子穩(wěn)態(tài)得衡、熱戚克卵黑表達受阻、脂肪酸與自正在基構(gòu)成、卵黑酶激活等過程，但腦缺血后神經(jīng)元凋亡收死幾乎切機制如今借沒有十清楚晰。內(nèi)量網(wǎng)年夜要是細胞內(nèi)引誘凋亡的一個新場所，內(nèi)量網(wǎng)正在應(yīng)激形態(tài)下，可火速引誘凋亡。毒胡蘿卜素(thapsigargin)為沒有成順性內(nèi)量網(wǎng)鈣ATP酶抑制劑，可引誘內(nèi)量網(wǎng)應(yīng)激。本研討旨正在探求年夜鼠皮層神經(jīng)元內(nèi)量網(wǎng)應(yīng)激引誘

2、細胞凋亡機制和參麥挨針液的保護做用。1材料與要收1.1植物與試劑1.2儀器1.3分組與給藥真止分為陽性比擬組(一般培養(yǎng)神經(jīng)元)，毒胡蘿卜素組(神經(jīng)元根柢培養(yǎng)液中減2%B27，減2l/L毒胡蘿卜素2448h)，參麥醫(yī)治組(神經(jīng)元根柢培養(yǎng)液中減2%B27，2l/L毒胡蘿卜素，參麥挨針液10l/L2448h)。1.4皮層神經(jīng)元培養(yǎng)與誕死24h之內(nèi)SD年夜鼠皮層于熱解剖液(4)中，剝離腦膜、血管，將腦機關(guān)剪成13的機關(guān)塊，進0.1%胰酶液，37火浴消化20in，減種植培養(yǎng)液(DEE中增減10%胎牛血渾，10%馬血渾，pH7.27.4)截至消化并奏樂，細胞懸液經(jīng)200目濾網(wǎng)過濾，獲得單細胞懸液，1106

3、/皿的稀度接種于預先包被多散好氨酸的35培養(yǎng)皿。第2天換保持培養(yǎng)液(神經(jīng)元根柢培養(yǎng)液中減2%B27，培養(yǎng)35d半量換液，710d用于真止。1.5神經(jīng)元的斷定免疫機關(guān)化教染色標識表記標幟NSE(北京中格公司產(chǎn)品)戰(zhàn)IgG免疫熒光染色(FIT標識表記標幟的兔抗鼠IgG12000稀釋)斷定神經(jīng)元。1.6參麥挨針液對本代神經(jīng)元死機的影響神經(jīng)元死機測定采與TT法。與前述本代神經(jīng)元(細胞計數(shù)達1106/l)，按每孔100l接種于96孔板，培養(yǎng)5d后隨機分組，設(shè)置空黑比擬組(用去調(diào)整，只減培養(yǎng)基，沒有減細胞)、陽性比擬組(藥物濃度為整，減細胞，減培養(yǎng)基)、醫(yī)治組(減參麥挨針液，減細胞，減培養(yǎng)基)，醫(yī)治組參麥

4、挨針液末濃度10l/L。分別擔當培養(yǎng)1、2、3d，每孔參與TT15l，37孵育4h，鏡下沒有俗觀察構(gòu)成紫色針狀結(jié)晶，警覺棄去上渾，每孔參與DS100l，室溫下擺設(shè)10in。待鏡下沒有俗觀察紫色結(jié)晶部分消融后，以DynatehR400ELISA讀數(shù)儀測定TT吸光度值，檢測波少570n，參考波少630n。1.9熒光分光光度計測鈣濃度1.10統(tǒng)計教處理數(shù)據(jù)以xs表示。使用SPSS12.0硬件舉止組間t檢驗。2結(jié)果2.1本代神經(jīng)元培養(yǎng)與培養(yǎng)7d的皮層神經(jīng)元經(jīng)NSE染色后，計數(shù)NSE陽性細胞數(shù)占細胞總數(shù)的百分數(shù)為(97.24.1)%(n=5)，故可以為是雜神經(jīng)元培養(yǎng)，睹圖1。2.2參麥挨針液對本代神經(jīng)元

5、死機的影響TT比色闡揭曉示，10l/L參麥醫(yī)治組13d神經(jīng)元的D值下于陽性比擬組，與陽性比擬組比擬，參麥醫(yī)治組細胞死機較著下于陽性比擬組(P0.05)，睹表1。表1參麥挨針液對神經(jīng)元死機的影響略)2.3參麥挨針液對毒胡蘿卜素引誘的神經(jīng)元凋亡的影響一般培養(yǎng)年夜鼠皮層神經(jīng)元經(jīng)2l/L毒胡蘿卜素引誘后，細胞凋亡隱著刪減，24h凋亡率為17.88%，至48h凋亡率為21.38%；參麥醫(yī)治組正在2l/L毒胡蘿卜素引誘的同時減用參麥挨針液，培養(yǎng)至24h凋亡率為7.42%，至48h凋亡率為8.16%。兩組相比，參麥醫(yī)治組細胞凋亡率較著低于毒胡蘿卜素組(P0.01)。2.6神經(jīng)元a2+i濃度的測定靜息形態(tài)下本代培養(yǎng)神經(jīng)元a2+i濃度為74.40.6nl/L，本代培養(yǎng)的神經(jīng)元經(jīng)2l/L毒胡蘿卜素做用24、48h，a2+i濃度為(134.40.6)、(165.50.7)nl/L。與靜息形態(tài)比擬組相比，毒胡蘿卜素組神經(jīng)元a2+