玉米赤霉烯酮毒素標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)規(guī)程

1、生效日期：2015年12月30日發(fā)放號(hào):北京華aW主18技JE関眼公司+HuaanMagnechBin-TechGgLtd-*版本號(hào)：1.0生效日期：2015年12月30日發(fā)放號(hào): 文件編號(hào)：HAMK-OI-2015玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1、目的為了規(guī)范親和柱凈化樣本中玉米赤霉烯酮的操作流程，特制訂本操作規(guī)程。2、范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于糧食、飼料、食品中玉米赤霉烯酮的檢測(cè)。3、檢出限和定量限項(xiàng)目島津安捷倫樣本檢出限（Pg/kg）樣本定量限（Pg/kg）樣本檢出限（Pg/kg）樣本定量限（pg/kg）ZEN2.968.9675.9253.24、職責(zé)部門名稱部門職責(zé)質(zhì)量管理部1、負(fù)責(zé)本制度的實(shí)施。2、

2、負(fù)責(zé)本制度的監(jiān)督執(zhí)行。5、程序5.1原理測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原、抗體反應(yīng)，抗體連接在柱體內(nèi)，樣品經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾后，緩慢的通過(guò)玉米赤霉烯酮免疫親和柱，在免疫親和柱內(nèi)毒素與抗體結(jié)合，之后洗滌免疫親和柱除去沒(méi)有被結(jié)合的其他無(wú)關(guān)物質(zhì)。用甲醇洗脫玉米赤霉烯酮，然后注入到高效液相色譜儀中用于檢測(cè)。5.2溶液配制521提取液：80%乙腈用量筒移取800mL乙腈，加入超純水定容至至1L。522稀釋液：0.01MPBST溶液稱取8gNaCl、0.2gKC1、0.2gKH2PO4和1.16gNa2HPO4.12H2O，加入800mL超純水溶解，加入2mLTween-20,定容至1L。5.2.3玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)工作液：用

3、色譜級(jí)甲醇將儲(chǔ)備工作液分別稀釋到1000ng/ml、500ng/ml、200ng/ml、100ng/ml、50ng/ml。HuaanMagnechSo-TechGgLtd-*II：京華aW主狷技JK育眼公司”文件編號(hào)：HAMK-OI-2015版本號(hào)：1.05.3樣品前處理20g0.01g樣品（固體樣品需粉碎，并過(guò)2mm分樣篩）加入100mL提取液（80%乙腈-水溶液）混勻；高速均質(zhì)（N10,000r/min）1min，或搖床（200r/min300r/min）劇烈振蕩20min,用快速定性濾紙過(guò)濾，收集濾液；取10mL濾液加入40mL稀釋液稀釋，再用微纖維濾紙過(guò)濾，并收集濾液作為上樣液;取25

4、mL上樣液過(guò)免疫親和柱凈化。稀釋倍數(shù)：15.4凈化取出免疫親和柱，將上方塞子取出斜剪斷，再插回親和柱上；（3mL的免疫親和柱去掉上方塞子，安裝上轉(zhuǎn)接頭，將轉(zhuǎn)接頭另一端與注射器固定后使用）將柱子與氣控操作架上的注射器連接固定，取適量處理后的溶液上樣；去掉親和柱下方堵頭，調(diào)節(jié)開關(guān)，使液體以12滴/秒速度流出；待液體排干后，用10mL去離子水洗滌2次，流速23滴/秒；待液體排干后，上樣1mL甲醇，流速1滴/秒，收集洗脫液并定容至1mL；洗脫液用0.22pm微孔濾器過(guò)濾后轉(zhuǎn)移至樣品瓶用于HPLC分析。*每次上樣前都要將上次液體完全排干。*谷物樣本也適用于GB/T5009.209-20085.5液相測(cè)定

5、5.5.1液相色譜條件C18柱：250mm（長(zhǎng)）x4.6mm（直徑），填料粒徑5pm；流動(dòng)相：60%乙腈流速：1.0mL/min；柱溫：40C；進(jìn)樣體積：20pL熒光檢測(cè)器：激發(fā)波長(zhǎng)：274nm發(fā)射波長(zhǎng)：440nm5.5.2色譜定量分別取相同體積樣液和標(biāo)準(zhǔn)工作液注入高效液相色譜儀，在上述色譜條件下測(cè)定試II：京華aW主狷技it讒IB公司+HuaanMagnechSn-TechCo.,Ltd.文件編號(hào)：HAMK-OI-2015版本號(hào)：1.0生效日期：2015年12月30日發(fā)放號(hào):II：京華安豈科主ngiK有眼公司+HuaanMagnechESn-TechCoLtd.文件編號(hào)：HAMK-OI-20

6、15版本號(hào)：1.0生效日期：2015年12月30日發(fā)放號(hào)： 樣的響應(yīng)值（峰高或峰面積），以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,將未知樣本中玉米赤霉烯酮的峰面積帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到試樣中玉米赤霉烯酮的濃度,標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖參考下圖：數(shù)據(jù)文件名EN-500ppb.lcd樣品笹EN-500ppb25201510IIIIIIIIIIIIIIII0.01.2.3.4.05.06.07.08.09.010.011.012.0min附圖：ZEN-500ppb標(biāo)準(zhǔn)品液相圖譜5.6注意事項(xiàng)使用前，免疫親和柱需回至室溫（2225C）。一親和柱28C儲(chǔ)存，不得凍存。不要使用過(guò)了有效日期的免疫親和柱。取樣量：根據(jù)需要可以適當(dāng)增加或減少取樣量，注意提取液量要相應(yīng)改變。柱容量：2000ng，當(dāng)樣本中待檢毒素的含量除以稀釋倍數(shù)高于柱容量時(shí)，需要適當(dāng)降低上樣液的體積，重新檢測(cè)。pH：親和柱的上樣溶液pH需在68之間，若偏離此范圍需要用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH。玉米赤霉烯酮可致癌，應(yīng)戴手套操作。使用過(guò)的容器及標(biāo)準(zhǔn)品溶液最好用次氯酸鈉溶液（5%V/V）浸泡過(guò)夜。上機(jī)檢測(cè)時(shí)的溶劑與流動(dòng)相保持一致，可以消除溶劑效應(yīng)的影響。6、相關(guān)文件免疫親和柱檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)免疫親和柱檢驗(yàn)操