高效液相色譜法分離測定駱駝刺根狀莖中的內(nèi)源激素

1、高效液相色譜法分離測定駱駝 刺根狀莖中的內(nèi)源激素 答辯人：生科08-1班 趙曼麗1 報 告 內(nèi) 容 一、研究意義二、研究內(nèi)容 三、研究方法和技術(shù)路線四、研究成果五、前景與展望2研究意義 駱駝刺（Alhagi sparsifolia）屬于豆科駱駝刺屬植物，為多年生草本或半灌木，是重要的固沙植物。駱駝刺的幼嫩枝葉可作為家畜的飼料，同時也是一類具有開發(fā)潛力的蜜源植物和藥用植物資源。駱駝刺是一種根莖型的克隆植物，借以其發(fā)達(dá)的根狀莖上分布的休眠芽產(chǎn)生新個體而不斷擴(kuò)大種群。3研究對象 本實(shí)驗(yàn)通過在新疆古爾班通古特沙漠南緣以一個間隔子為單位進(jìn)行駱駝刺根狀莖野外采樣的工作，再采用高效液相色譜法(HPLC)對樣

2、品進(jìn)行激素的分離和測定。駱駝刺駱駝刺根狀莖4研究內(nèi)容建立駱駝刺根狀莖樣品提取和純化的方法使用高效液相色(HPLC) 對駱駝刺根狀莖中的內(nèi)源激素進(jìn)行分離和測定5三.研究方法駱駝刺的采集和保存：2010年秋季在古爾班通古特沙漠南緣進(jìn)行采樣樣品儲存在液氮罐中并編號2011年春季及夏季在古爾班通古特沙漠南緣進(jìn)行采樣6 樣品處理研磨醇提抽濾減壓蒸發(fā)石油醚萃取水相醚相棄去水相pH調(diào)至6.4加PVP超聲30 min ,抽濾濾液pH調(diào)至2.9稱取樣品乙酸乙酯萃取減壓蒸發(fā)定容待測7樣品的測定篩選色譜條件： 流動相的選擇： 本實(shí)驗(yàn)選用甲醇水醋酸混合液為流動相，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：加入一定量的醋酸可使分離得到改善；適當(dāng)增加醋

3、酸含量可使內(nèi)源激素在與其它成分分離的前提下峰形尖銳，減少拖尾； 柱溫的選擇： 柱溫對色譜分析影響不顯著，當(dāng)柱溫為25和30時，樣品均能得到較好的分離效果。因此選擇柱溫25。 8研究結(jié)果色譜條件色譜柱：Shim-ParkC18VP- ODS；流動相：V(甲醇):V(0.75冰乙酸溶液)=45:55 檢測波長：254nm流速：0.7ml/min進(jìn)樣量：20L 柱溫：25分離測定結(jié)果如下：9標(biāo)準(zhǔn)品的圖譜圖1 HPLC法測定赤霉素標(biāo)品圖圖2 HPLC法測定玉米素標(biāo)品圖10標(biāo)準(zhǔn)品的圖譜圖3 HPLC法測定生長素標(biāo)品圖11混標(biāo)的圖譜圖4 HPLC法測定混合標(biāo)準(zhǔn)品圖12春季樣品的圖譜圖5 HPLC法測定春季

4、樣品圖13夏季樣品的圖譜圖6 HPLC法測定夏季樣品圖14秋季樣品的圖譜圖7 HPLC法測定秋季樣品圖15樣品的圖譜圖8 HPLC法測定樣品圖16回歸方程、相關(guān)系數(shù)及精密度 表1 回歸方程、相關(guān)系數(shù)及精密度激素Hormones 回歸方程 Regression equation相關(guān)系數(shù) r2保留時間精密度RSD of retention time (%)峰面積精密度RSD of peak area (%)GA3y=1754990.76x-65055.490.990.051.1 ZRy=44822951.30 x-26001.06 0.990.10 2.2IAAy=8303173.69x-5163

5、8.32 0.990.45 13.0Table 1 Regression equation ,coefficient and relative standard deviation17回收率 表2 加標(biāo)回收率 Table 2 Result of standard addition recovery test of hormones*Recovery=( Added -Background)/ Found100%18取得的成果1. 建立駱駝刺根狀莖樣品處理的方法 。2. 通過大量實(shí)驗(yàn)得出了駱駝刺根狀莖 內(nèi)源激素分離和測定的色譜條件。 3. 發(fā)表論文一篇。19參考文獻(xiàn)：許智宏,李家洋.中國植物激素

6、研究:過去、現(xiàn)在和未來.植物學(xué)通報.2006,23(5):433-442李雨薇,肖浪濤.植物激素檢測技術(shù)的現(xiàn)狀和發(fā)展.生命科學(xué)儀器.2007,5(12):10-14趙錦,劉孟軍,代麗,等.棗瘋病病樹中內(nèi)源激素的變化研究.中國農(nóng)業(yè)科學(xué).2006,39(11) :2255-2260潘根生,錢利生.茶樹內(nèi)源激素的分離純化與檢測.檢測分析.2006,(1):44-46閆師杰,郭李維,吳彩娥,等.高效液相色譜法同時測定鴨梨種子中3種內(nèi)源激素.分析化學(xué)研究簡報.2010,38(6):843-847楊途熙,魏安智,鄭元,等.高效液相色譜法同時分離測定仁用杏花芽中8種植物激素.分析化學(xué)研究簡報.2007,35

7、(9):1359-1361郭敏敏,王清連,胡根海.利用高效液相色譜法分離和測定棉花組織培養(yǎng)過程中4種內(nèi)源激素.生物技術(shù)通訊.2009,20(2):213-216Yi Tang, Li Wang, Chao Ma. The use of HPLC in determination of endogenous hormones in anthers of Bitter melon. Journal of Life Science. 2011,139-142Ana, E.V., J.O. Richard, F.Belen. Relationships between hormonal content

8、s and the organogenic response in Pinus pinea cotyledonsJ. Plant Physiol Biochem. 2011,(39):377-384Imtiaz,A.H., U.D.Muhammad, S.Nighat,Y.Shafqat,et al.,Direct regeneration of sugarcane plantlets: a tool to unravel genetic heterogeneityJ, Pakistan Journal of Botany.2009,41(2):498-500李甜江,李根前,賀斌,等.克隆植物中國沙棘生長對外源植物激素的響應(yīng).生態(tài)學(xué)報.2010,30(3):659-66720 據(jù)目前，針對駱駝刺的研究主要集中生物生態(tài)適應(yīng)性的研究，而關(guān)于內(nèi)源激素的研究尚屬空白，我們目前正在展開以下研究：駱駝刺根狀莖中植物內(nèi)源激素的分離和測定的最適條件；在不同因素（溫度、流動相極性）影響下的變化規(guī)律，最終確定出駱駝刺根狀莖中植物內(nèi)源激素測定的最適色譜條件；初步