【基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)】第十七章 流式細(xì)胞術(shù)

1、第十七章 流式細(xì)胞術(shù) 流式細(xì)胞術(shù)flow cytometry，F(xiàn)CM是對細(xì)胞或細(xì)胞顆粒進行定量分析和細(xì)胞分類研究的技術(shù)。流式細(xì)胞儀flow cytometer又稱為熒光激活細(xì)胞分類器fluorescent activated cell sorter，F(xiàn)ACS，是流體噴射術(shù)、激光光學(xué)技術(shù)、電子計算機技術(shù)和顯微熒光光度術(shù)相結(jié)合的高科技產(chǎn)品。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)可對單細(xì)胞逐個地進行高速準(zhǔn)確的定量分析和分類，每秒測定達數(shù)千到數(shù)萬個細(xì)胞，且有高度的重復(fù)性。這種高速信息的測量分析和高純度分類的新技術(shù)，為細(xì)胞生物學(xué)提供了一種強有力的研究手段。 第一節(jié) 基本原理 一、流式細(xì)胞儀的主要組件 1液流系統(tǒng) 包括各種管道、

2、壓力調(diào)節(jié)開關(guān)、液體流動室和超聲振蕩器噴嘴。單個細(xì)胞懸液在狹窄的管道中流動，由于細(xì)胞受流體力學(xué)的作用，極易形成貼邊、堆積,從而造成阻塞。為克服此種現(xiàn)象，利用流體聚焦的原理，在不同的壓力作用下使鞘液通常用PBS和細(xì)胞懸液在噴嘴內(nèi)形成層流液束，通過細(xì)胞測量區(qū)。 2光學(xué)系統(tǒng) 光學(xué)系統(tǒng)包括激發(fā)光源、各種光學(xué)濾片和各種光信號探測器。激光光源通常是采用激光器或汞燈等。激發(fā)光束激發(fā)細(xì)胞所攜帶的熒光物質(zhì)產(chǎn)生熒光，通過光電轉(zhuǎn)換器和光電倍增管把微弱的信號變成電的信號，光信號通過不同的濾片把不同波長的光信號分開，把干擾光濾掉。 3電子系統(tǒng) 電子系統(tǒng)包括各種放大器、模數(shù)轉(zhuǎn)換電路、高壓電源和各種分析處理輔助系統(tǒng)，還包括把

3、不同細(xì)胞分離開來的邏輯控制系統(tǒng)。 4計算機系統(tǒng) 把從細(xì)胞獲取的數(shù)據(jù)記錄儲存起來，利用各種不同的軟件對數(shù)據(jù)進行分析加工處理，把結(jié)果以圖、表的形式輸出。 二、流式細(xì)胞儀的工作原理 流式細(xì)胞儀要求被檢細(xì)胞用熒光染料染色，呈懸浮狀態(tài)。經(jīng)染色的細(xì)胞通過樣品進入管被壓進超聲波振蕩器噴嘴的中央部，同時將無細(xì)胞的液體經(jīng)過另一進入管壓入噴嘴，使之形成包圍細(xì)胞懸液的鞘液圖17-1。在鞘液和細(xì)胞懸液存在一定壓力差的情況下，中央的細(xì)胞懸液和周圍鞘液的分層液流快速通過50m的噴嘴圓孔，被噴射出來。當(dāng)同軸流動的細(xì)胞懸液和鞘液通過激光器發(fā)出的氬離子激光束照射小區(qū)時，單行流動的細(xì)胞發(fā)射出熒光，熒光檢測器接受聚焦后的熒光信號。

4、 多數(shù)流式細(xì)胞儀可以同時收集兩種以上不同波長的熒光信號，檢測細(xì)胞膜表面或細(xì)胞內(nèi)熒光分子的數(shù)量。散射光檢測器那么接受細(xì)胞散射偏轉(zhuǎn)后的激光束信號，此信號可反映細(xì)胞的物理化學(xué)特性、大小、數(shù)量和類型。 前向角散射強度信號與細(xì)胞的大小有關(guān)。散射光強度信號那么反映細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，即流式細(xì)胞儀可以同時收集兩個方向散射光的信號。兩種光檢測器所產(chǎn)生的信號，經(jīng)過電子系統(tǒng)的處理，產(chǎn)生脈沖，并使測量過的細(xì)胞在形成微滴時，帶上不同的電荷充電。 當(dāng)充電微滴通過帶有恒定靜電壓的偏轉(zhuǎn)板時，帶正電荷的細(xì)胞微滴在靜電場作用下落入左方的細(xì)胞收集器，而帶負(fù)電荷的細(xì)胞微滴落入右方的細(xì)胞收集器，不帶電荷的細(xì)胞微滴落入中央的容器中，從而實現(xiàn)

5、細(xì)胞分選的目的。這種分類技術(shù)能以每秒高達500010000個細(xì)胞的速度分類細(xì)胞，純度在90%99%之間，細(xì)胞活性在通過儀器過程中不受影響。流式細(xì)胞儀僅對懸浮細(xì)胞進行分析和測量，并進行統(tǒng)計學(xué)分析，但無法得到細(xì)胞的形態(tài)學(xué)以及多種動力學(xué)功能參數(shù)，尤其不能滿足細(xì)胞的解剖定位研究。第二節(jié) 常用熒光染科 在流式細(xì)胞術(shù)中使用的熒光染料可分兩大類：一類是染料生物大分子基團，如免疫球蛋白，再與細(xì)胞發(fā)生免疫反應(yīng)，使染料分子間接地連接到細(xì)胞上表17-1；另一類是直接與細(xì)胞內(nèi)特異成分相結(jié)合的染料，它們之間有非常好的線性關(guān)系表17-2。在實驗過程中，應(yīng)根據(jù)儀器的實際情況，例如激發(fā)光源的種類、濾光片的配置以及本實驗室所具

6、有的條件，來選擇適合于自己使用的熒光染料。第三節(jié) 單細(xì)胞懸液的制備 流式細(xì)胞術(shù)所得結(jié)果好壞首先取決于細(xì)胞樣品處理制備方法的優(yōu)劣。所以，要保證細(xì)胞在制備過程中和儲存期間細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)部的成分不被破壞和去失，特別是要分析的那些成分。 一、單層細(xì)胞培養(yǎng) 使用標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)技術(shù)，單層生長的細(xì)胞容易分離。包括使用胰蛋白酶trypsin。單層細(xì)胞用PBS或Hanks平衡液加0.25% Trypsin洗，當(dāng)細(xì)胞變圓時在倒置顯微鏡下觀察，倒出Trypsin液體后用手拍打振動培養(yǎng)瓶使細(xì)胞脫落，然后加入緩沖液搖動培養(yǎng)瓶并用細(xì)管取出含有細(xì)胞的上清液。再用緩沖液離心洗滌細(xì)胞即可。要注意的是酶消化時間不能過長，以免破壞細(xì)胞

7、參見細(xì)胞培養(yǎng)。 二、組織 從新鮮組織制備單個細(xì)胞懸液，有的比較容易，例如淋巴結(jié)組織用注射器反復(fù)抽吸幾次即可得到足夠量的細(xì)胞；有的就比較困難，常要用機械分散和酶消化相結(jié)合的方法處理，如肝、睪丸用酶消化處理很容易得到單個細(xì)胞。但睪丸生殖細(xì)胞胞質(zhì)之間橋接引起相鄰細(xì)胞溶解，形成人為的稱為合胞體的多核假象。很難與DNA含量和體積上相似的單個細(xì)胞區(qū)分開。神經(jīng)細(xì)胞的處理參見細(xì)胞培養(yǎng)。 三、血細(xì)胞制備方法 一全血溶解技術(shù) 通過選擇性的溶解紅細(xì)胞，獲得外周血中單個核細(xì)胞和多形核細(xì)胞。 1試劑 氯化銨溶解緩沖液。細(xì)胞洗滌緩沖液：不含鈣鎂的Hanks平衡鹽液或1PBS緩沖液。 2方法 1取0.51ml用肝素或EDT

8、A抗疑的外周血，加入15ml離心管內(nèi)，加20倍于血體積的氯化銨溶液混勻，室溫下溶解8l0min紅細(xì)胞完全溶解應(yīng)為透明紅色。 2180g離心5min，小心吸出上清，然后把沉淀的白細(xì)胞用細(xì)胞洗滌緩沖液洗兩次，80g離心5min。吸出上清，再把細(xì)胞懸浮在冷的緩沖介質(zhì)中備用。 二梯度-密度離心分離法 該方法可離出單個核細(xì)胞淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。 1材料 淋巴細(xì)胞分離液；PBS緩沖液。2方法 1所用試劑預(yù)熱到25以獲得正確的密度。 2取5ml外周血用肝素或EDTA抗凝，并加等體積的PBS稀釋混勻。加2ml淋巴細(xì)胞分離液到圓錐形離心管的底部，用吸管取5ml用PBS稀釋的抗凝血小心地放到淋巴細(xì)胞分離液液面上，

9、注意不要使之混合。 3室溫下400g離心20min，使離心管自行緩慢停下，不要用力強迫離心停車。丟棄血漿，用細(xì)尖長吸管吸出含有單個核細(xì)胞的淡黃色層，置另一個離心管內(nèi)。 4加10ml PBS 600g離心10min，洗兩次。把細(xì)胞在懸浮在2ml的PBS中備用。 四、石蠟標(biāo)本制備單細(xì)胞懸液 1修塊：切去多余的壞死組織和基質(zhì)組織。切5片50m厚蠟片標(biāo)本放在一個10ml的試管里。 2脫蠟：加入5ml二甲苯，10min3次。 3水化：100%乙醇510min2次；95%乙醇5l0min2次；70%乙醇510min2次；50%乙醇510min2次；蒸流水洗5min3次，丟棄蒸流水。 6消化：加入5ml 0

10、.5%胃蛋白酶消化液生理鹽水配制37保溫3050min，每隔10min振蕩一次。用鑷子或玻璃棒取出未消化完的組織，并加等量生理鹽水終止酶的作用。經(jīng)50m尼龍網(wǎng)過濾。 五、細(xì)胞固定 固定的目的是使細(xì)胞或組織硬化足以承受包埋和切片的處理。固定也使得細(xì)胞膜變得通透，使染料能夠進入，獲得最正確染色效果、并通過抑制微生物作用和自溶保護細(xì)胞樣品。作為流式細(xì)胞術(shù)，細(xì)胞以懸浮狀態(tài)使用，常用的固定劑有乙醇、甲醇、甲醛和戊二醛等。DNA定量分析細(xì)胞多用乙醇固定，免疫表型分析常用甲醛和多聚甲醛等固定以保護細(xì)胞膜表面的特異標(biāo)志物。 1乙醇固定 常用75%乙醇。用無鈣鎂的PBS配制，4冰箱中保存。將洗過的細(xì)胞用ml P

11、BS懸浮起來，用加樣器或吸管把細(xì)胞懸液噴射入5ml 75%冷乙醇中。將容器口密封，4冰箱貯存，時間不少30min。 2免疫染色后的固定 對細(xì)胞表面抗原進行免疫標(biāo)記染色后，如果不能立即進行FCM分析，可用以下方法固定保存： 1在細(xì)胞免疫標(biāo)記染色完成細(xì)胞洗滌后，加入3%的甲醛，細(xì)胞搖勻后4冰箱保存。24h之內(nèi)分析，其熒光強度不變。 2用0.5%的多聚甲醛搖勻固定，4冰箱保存，一周內(nèi)熒光強度基本不變。第四節(jié) 細(xì)胞的熒光標(biāo)記 流式細(xì)胞術(shù)對細(xì)胞的分析一是分析細(xì)胞產(chǎn)生的散射光信號；二是分析細(xì)胞所產(chǎn)生的熒光信號。細(xì)胞的熒光是由一些能夠定量的熒光染料與細(xì)胞內(nèi)的特有成分結(jié)合，或經(jīng)抗原抗體反應(yīng)使熒光染料與細(xì)胞間接

12、結(jié)合，經(jīng)激光照射產(chǎn)生的。本節(jié)主要介紹熒光染料直接與細(xì)胞內(nèi)部特有成分結(jié)合定量分析的熒光標(biāo)記方法，如DNA、RNA、蛋白等。 一、DNA染色方法 1碘化丙啶PI染色法 主要用于不固定的細(xì)胞核或固定細(xì)胞核的DNA分析。其特點是可用488nm波長光激發(fā)，G0/G1峰的CV值較低。優(yōu)點是操作簡單，可得到較低的CV值。缺點是需經(jīng)RNA酶消化處理。 1RNA酶：用1.12%枸櫞酸鈉溶液稀釋成5000U/ml，并在75下熱處理30min，使其中的DNA酶失活。然后等分成假設(shè)干份并冷凍貯存。 2染液配制：5mg PI溶于100ml PBS中，裝在棕色瓶中，4冰箱保存。 3細(xì)胞染色：取乙醇固定的11062106/

13、ml細(xì)胞，經(jīng)離心去除固定液，再經(jīng)無鈣鎂的PBS洗一次。 4RNA酶消化：每106細(xì)胞/ml加入500活性單位RNA酶，37保溫30min。洗去RNA酶，再經(jīng)PBS洗一次，去上清。 5細(xì)胞染色：106細(xì)胞加PI染液5g/ml，避光染色至少20min。 6流式細(xì)胞術(shù)分析。 2應(yīng)用抗生素染色法 常用的抗生素有普卡霉素mithramycin, MI；色霉素chromomycin A3，CH；橄欖霉素olivomycin，OL，三者結(jié)構(gòu)相似，均為DNA螺旋結(jié)構(gòu)高特異結(jié)合熒光染料，不與RNA結(jié)合，三者都優(yōu)先與G-C鍵結(jié)合，其中MI的應(yīng)用最廣泛。 1染液：25g/ml MI，25% ethanol，20mm

14、ol/L MgC12。 2細(xì)胞固定：每個試管106細(xì)胞，離心，在試管底部使細(xì)胞沉淀形成小球狀，并去掉上清，再將沉淀細(xì)胞分散懸浮起來。加入80%的乙醇42ml，一滴一滴的加入并搖動與細(xì)胞混勻，在冰浴中保溫30min。 3染色：離心10min去掉固定液，并再懸浮細(xì)胞，加入ml染液，室溫下染30min，上機分析。 注意：使用激發(fā)波長457nm，發(fā)射波長約大于515nm，使用515 Long Pass濾片。該方法優(yōu)點是不需RNA酶處理。 3雙間二氮茚Hoechst類染色法 Hoechst33258及Hoechst33342均為此類染料，特異性與核酸的A-T鍵結(jié)合，但在的環(huán)境條件下優(yōu)先與RNA結(jié)合。測定

15、DNA的染液配制，需先以蒸餾水溶解后再以PBS稀釋成1mmo1/L的濃度，原液可在冰箱中避光保存，這種染液對乙醇固定的細(xì)胞或死細(xì)胞可立即著色，對活細(xì)胞需經(jīng)20min左右才能達到飽和性著色。 16g/ml的Hoechst33342直接加到培養(yǎng)的細(xì)胞中。在37保溫2h。 2收獲細(xì)胞并計數(shù)細(xì)胞的總數(shù)。400g離心5min，去上清。 3調(diào)整細(xì)胞濃度為2106/ml，上機分析細(xì)胞。 該方法的優(yōu)點是可以做活細(xì)胞的DNA分析，缺點是需經(jīng)紫外345nm光激發(fā)。 注意：Hoechst 33342的濃度與細(xì)胞類型很有關(guān)系，不同類型的細(xì)胞其濃度可在16g /ml之間調(diào)整。 二、DNA與RNA同時染色法 丫啶橙acr

16、idine orange，AO可與雙鏈和單鏈的核酸結(jié)合。與雙鏈核酸結(jié)合方式是嵌入到雙鏈之間，發(fā)射綠色熒光峰值為530nm。與單鏈的核酸凝聚變?yōu)閺?fù)合物，這種復(fù)合物發(fā)射紅色熒光，最大波長為640nm。 為了分別染DNA和RNA，首先將RNA的雙鏈變性為單鏈，而DNA仍保持原雙鏈結(jié)構(gòu)。因此染色前，細(xì)胞經(jīng)螯合劑EDTA處理。螯合劑能夠破壞RNA與核蛋白之間的互相作用，使mRNA的穩(wěn)定性丟失，雙鏈全部變?yōu)閱捂湣?普通細(xì)胞中rRNA和tRNA分別約占總RNA的75%和15%，測量完整細(xì)胞的紅色熒光，它與細(xì)胞總RNA成正比，也主要是由這兩種RNA所代表。 1試劑 1將AO 1mg溶解于100ml蒸餾水中，避

17、光4下保存，可使用幾個月。 2溶液A：Triton X-100 0.l%vo1/vol，NaCI 0.15 mol/L。 3溶液B：AO 6g/ml20mol/L；磷酸鈉枸櫞酸緩沖液，在4下避光保存可使用幾周。 2染色方法 1取ml細(xì)胞懸液原細(xì)胞懸液濃度106/ml即2105細(xì)胞不易多于此數(shù)在冰浴中制冷。 2加ml冰冷的A液輕輕混合不要渦旋。3加ml冰冷的B液，輕輕混勻，在冰浴中保持520min，樣品在測量過程中也應(yīng)在冰浴中保持。 3本卷須知 1為了確保細(xì)胞膜通透而細(xì)胞又不破碎，血清的存在是第一步的關(guān)鍵。血清可由原來的細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)中含有l(wèi)0%20%的血清替代，或在緩沖液里加10%的血清。于是，

18、染色的細(xì)胞可直接從培養(yǎng)瓶取出而不用另外離心洗滌。在染色過程中不要用力吹打搖動或渦旋細(xì)胞。 2分別染DNA及RNA，需要適當(dāng)?shù)腁O濃度在最終的染液中及測量過程中46g/ml。當(dāng)原始細(xì)胞密度超過2106ml，AO染料標(biāo)記的細(xì)胞成比例增高，而染液中自由染料濃度也相對的減少。因RNA變性不完全，從而部分RNA染成綠色熒光。解決辦法：稀釋原始細(xì)胞懸液，或在B液里增加AO的濃度。 3儀器方面：有些儀器測量細(xì)胞是在噴嘴外部的空氣中。細(xì)胞樣品流束和鞘液流束形成分層束離開噴嘴，再被測量。這一過程破壞了原有AO的平衡狀態(tài)，事實上降低了AO測量時在樣品中的濃度。解決辦法：增加AO在B液中的濃度和增加流速以平衡擴散的

19、影響。 三、RNA染色方法 碘化丙啶PI是一種碘化合物，可以與雙鏈核酸相結(jié)合，為準(zhǔn)確測量雙鏈RNA，細(xì)胞需先經(jīng)DNase處理，去除DNA，確保PI結(jié)合的完全是RNA。 1用PBS洗乙醇固定的細(xì)胞，再懸浮在ml PBS中。 211062106加入DNase 1mg/m1用mol/L蔗糖，5mmol/L MgCI2，20mmol/L Tris-HCI液體配制，在36保溫40min。 3洗去DNase，加入冷的50g/ml PI染液PBS配制，避光染色至少30min，然后FCM分析。注意：為了確保PI染色的是雙鏈RNA，需有經(jīng)DNA酶和RNA酶同時消化處理的同樣細(xì)胞做陰性對照。 四、雙指標(biāo)分析 本方

20、法應(yīng)用PI染細(xì)胞的DNA，用異硫氰基熒光素FITC染細(xì)胞總蛋白。PI嵌入到DNA雙鏈的堿基之間。FITC是以共鍵價方式結(jié)合到蛋白帶有正電荷的基團上。它們經(jīng)488nm的光激發(fā)后分別發(fā)射紅色和綠色熒光。 1試劑配制 1FITC貯備液：1mg/ml丙酮配制，0貯存。 2FITC工作液：g /ml，用貯備液加PBS緩沖液稀釋而成。用前配制。 3PI染液：PI 50g/ml，RNA酶A 30U/m1，PBS配制，。 2細(xì)胞染色 乙醇固定的細(xì)胞，經(jīng)離心去掉乙醇，再用PBS洗一次。106細(xì)胞/ml加PI染液1m1，37保溫15min。離心去上清，再加1ml FITC工作液，4避光染45min，即可分析。 3

21、本卷須知 將正常細(xì)胞分三份，分別用PI，F(xiàn)ITC和PI + FITC染色，用這三種細(xì)胞調(diào)整儀器的紅綠光補償以避免紅、綠熒光信號的重疊，使儀器能分別準(zhǔn)確的記錄DNA及蛋白熒光信號。 五、三指標(biāo)分析 該方法適合于同時分析細(xì)胞表面、細(xì)胞內(nèi)的特異標(biāo)記蛋白和DNA，用于研究細(xì)胞特異標(biāo)志蛋白的表達和細(xì)胞增殖周期的關(guān)系。 1試劑 細(xì)胞表面、細(xì)胞內(nèi)特異標(biāo)志蛋白的相關(guān)抗體，0.5%多聚甲醛，50%的甲醇，PI染液(50g/m1)，RNase l00U/ml，PBS配制。 2染色方法 1使用細(xì)胞表面特異標(biāo)志蛋白的相關(guān)抗體標(biāo)記細(xì)胞表面特異標(biāo)志蛋白。用標(biāo)準(zhǔn)的直接或間接的免疫標(biāo)記雜色方法，細(xì)胞量2l06/ml。 2PB

22、S洗兩次，去上清，再使細(xì)胞懸浮于ml的PBS中。 3加入等體積的0.5%多聚甲醛，4固定15min，中間應(yīng)多次搖動細(xì)胞，以避免細(xì)胞形成結(jié)塊。200g離5min去固定液，再用PBS洗一次。 4加1m1 PBS使細(xì)胞懸浮起來，再加入等體積50%冷甲醇，4作用lh，中間多次搖動細(xì)胞。離心去甲醇后，PBS洗一次。 5用相關(guān)抗體進行細(xì)胞內(nèi)特異標(biāo)志蛋白染色，直接或間接免疫染色方法均可。 6PBS洗兩次去上清。DNA染色，加入PI染液lml，室溫下避光染30min，即可上機分析。 第五節(jié) 流式細(xì)胞術(shù)的數(shù)據(jù)分析 流式細(xì)胞術(shù)的數(shù)據(jù)文件結(jié)構(gòu)特點是多個相關(guān)參數(shù)以列表方式貯存，通稱作list mode。這種數(shù)據(jù)排列便

23、于在多個參數(shù)之間通過Gate的方法相互提取相關(guān)特征數(shù)據(jù)。例如圖17-2a用全血溶解的方法作白細(xì)胞分化抗原的表型分析，可通過在前向角和90雙參數(shù)圖上對淋巴細(xì)胞建立Gate，來分析淋巴細(xì)胞的抗原表達的熒光信號，如果不這樣做，熒光信號除淋巴細(xì)胞的以外，還可能包括其他細(xì)胞的非特異熒光圖17-2b。經(jīng)過Gate處理可清楚看到熒光信號圖17-2c與Gate前大不相同，它才真正反應(yīng)淋巴細(xì)胞的CD4和CD8表達的情況。第六節(jié) 凋亡細(xì)胞的檢測 與流式細(xì)胞術(shù)相關(guān)的方法有細(xì)胞DNA含量測量，細(xì)胞死活熒光探針雙標(biāo)法，以及近年出現(xiàn)的Annexin-V和Caspase-3探測早期凋亡細(xì)胞新方法。Annexin-V和Cas

24、pase-3許多試劑公司都有專用試劑盒出售，本節(jié)只介紹DNA含量分析. 一、基本原理 當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時，一部分核DNA分裂成大小相等的DNA寡核小體。這種DNA用凝膠電泳分析時，可產(chǎn)生有梯形特征的條帶。這種形式的DNA降解已公認(rèn)為是凋亡細(xì)胞的標(biāo)志。細(xì)胞用70%的冷乙醇固定，PC緩沖液提取降解的DNA后，細(xì)胞經(jīng)PI染色，流式細(xì)胞分析，在DNA的直方圖上，G0/G1峰的左邊出現(xiàn)一個峰，這個峰即代表凋亡的細(xì)胞圖17-6. 大學(xué)課件出品 版權(quán)歸原作者所有 聯(lián)系QQ ：910670854 如侵權(quán)，請告知，吾即刪 更多精品文檔請訪問我的個人主頁 附贈人生心語人生太短，聰明太晚人生太短，聰明太晚(1)我們都

25、老得太快卻聰明得太遲把錢省下來，等待退休后再去享受結(jié)果退休后，因為年紀(jì)大，身體差，行動不方便，哪里也去不成。錢存下來等養(yǎng)老，結(jié)果孩子長大了，要出國留學(xué)，要創(chuàng)業(yè)做生意，要花錢娶老婆，自己的退休金都被拗走了。人生太短，聰明太晚(2)當(dāng)自己有足夠的能力善待自己時，就立刻去做，老年人有時候是無法做中年人或是青少年人可以做的事，年紀(jì)和健康就是一大因素。小孩子從小就告訴他，養(yǎng)你到高中，大學(xué)以后就要自立更生，要留學(xué)，創(chuàng)業(yè)，娶老婆，自己想辦法，自己要留多一點錢，不要為了小孩子而活我們都老得太快卻聰明得太遲，我的學(xué)長去年喪妻。這突如其來的事故，實在叫人難以接受，但是死亡的到來不總是如此。學(xué)長說他太太最希望他能送

26、鮮花給他，但是他覺得太浪費，總推說等到下次再買，結(jié)果卻是在她死后，用鮮花布置她的靈堂。這不是太蠢愚了嗎？！等到.、等到.，似乎我們所有的生命，都用在等待。人生太短，聰明太晚(3)等到我大學(xué)畢業(yè)以后，我就會如何如何我們對自己說等到我買房子以后！等我最小的孩子結(jié)婚之后！等我把這筆生意談成之后！等到我死了以后人人都很愿意犧牲當(dāng)下，去換取未知的等待；犧牲今生今世的辛苦錢，去購買后世的安逸在臺灣只要往有山的道路上走一走，就隨處都可看到農(nóng)舍變精舍，山坡地變靈塔，無非也是為了等到死后，能圖個保障，不必再受苦。許多人認(rèn)為必須等到某時或某事完成之后再采取行動。明天我就開始運動，明天我就會對他好一點，下星期我們就

27、找時間出去走走；退休后，我們就要好好享受一下。人生太短，聰明太晚(4)然而，生活總是一直變動，環(huán)境總是不可預(yù)知，現(xiàn)實生活中，各種突發(fā)狀況總是層出不窮。身為一個醫(yī)生，我所見過的死人，比一般人要來得多。這些人早上醒來時，原本預(yù)期過的是另一個平凡無奇的日子，沒想到一個意料之外的事；交通意外、腦溢血、心臟病發(fā)作等等。剎那間生命的巨輪傾覆離軌，突然闖進一片黑暗之中。那么我們要如何面對生命呢？我們毋需等到生活完美無瑕，也毋需等到一切都平穩(wěn)，想做什么，現(xiàn)在就可以開始做起。一個人永遠也無法預(yù)料未來，所以不要延緩想過的生活，不要吝于表達心中的話，因為生命只在一瞬間。人生太短，聰明太晚(5)記??！給活人送一朵鮮花

28、，強過給死人送貴重的花圈，每個人的生命都有盡頭，許多人經(jīng)常在生命即將結(jié)束時，才發(fā)現(xiàn)自己還有很多事沒有做，有許多話來不及說，這實在是人生最大的遺憾。別讓自己徒留為時已晚的空余恨。逝者不可追，來者猶未卜，最珍貴、最需要實時掌握的當(dāng)下，往往在這兩者蹉跎間，轉(zhuǎn)眼錯失。人生太短，聰明太晚(6)人生短暫飄忽，包得有一首小詩這樣寫：高天與原地，悠悠人生路；行行向何方，轉(zhuǎn)眼即長暮。正是道盡了人生如寄，轉(zhuǎn)眼即逝的惶恐。有許多事，在你還不懂得珍惜之前已成舊事；有許多人，在你還來不及用心之前已成舊人。遺憾的事一再發(fā)生，但過后再追悔早知道如何如何是沒有用的，那時候已經(jīng)過去，你追念的人也已走過了你。人生太短，聰明太晚(

29、7)一句瑞典格言說：我們老得太快，卻聰明得太遲。 不管你是否察覺，生命都一直在前進。人生并未售來回票，失去的便永遠不再得到。將希望寄予等到方便的時間才享受人生太短，聰明太晚(8)我們不知失去了多少可能的幸福不要再等待有一天你可以松口氣，或是麻煩都過去了。生命中大部分的美好事物都是短暫易逝的，享受它們、品嘗它們，善待你周圍的每一個人，別把時間浪費在等待所有難題的完滿結(jié)局上。找回迷失的生命死亡也許是免費的 但是，卻要付出生命的代價。勸大家一句話：把握當(dāng)下，莫等待。成功人生的十堂課人生成功第1課 做一個終生學(xué)習(xí)的人，離開學(xué)校并不意味著學(xué)習(xí)就結(jié)束了。學(xué)習(xí)可以成為一種生活方式，幫助你發(fā)揮最大的潛能。我們

30、從未停止學(xué)習(xí)，總會有新的，有趣的東西等待我們?nèi)グl(fā)現(xiàn)。學(xué)習(xí)新的技能可能讓人感到有一點恐懼，但每當(dāng)我們在個人學(xué)習(xí)上停滯不前時，我們都需要去學(xué)習(xí)新的東西。積極地尋求支援和建議，突破停滯期。參加一些培訓(xùn)，進修，夜校任何新的興趣都將會有助于發(fā)展你的優(yōu)勢。多看，多聽，讓你的頭腦保持活躍?；畹嚼?，學(xué)到老。 人生成功第2課 令自己感到沮喪的秘訣就是用空閑時間去煩惱自己是否快樂。所以不要費事去想它！摩拳擦掌干起來吧。你將熱血沸騰，你會頭腦清醒。很快，在你身體中的這種高漲的積極人生觀將把煩惱從你的頭腦中趕出去。行動起來，忙碌起來。這是世界上最便宜的一種藥，也是最好的一種。人生成功第3課 在困境中尋找成功的希望逆境

31、是一所最好的學(xué)校。每一次失敗，每一次打擊，每一次損失，都蘊育著成功的萌芽，都教會我在下一次有更出色的表現(xiàn)。我再也不會逃避現(xiàn)實，也不會拒絕從以往的錯誤中獲取經(jīng)驗，我不再因此而促成自己的失敗。因為我知道，寶玉不經(jīng)磨礪就不能發(fā)光，沒有，我也不能完善自我?，F(xiàn)在我知道，靈魂倍受煎熬的時刻，也正是生命中最多項選擇擇與機會的時刻。任何事情的成敗取決于我在尋求幫助時是抬起頭還是低下頭。無論何時，當(dāng)我被可怕的失敗擊倒，在最初的陣痛過去之后，我都要想方設(shè)法將苦難變成好事。偉大的機遇就在這一刻閃現(xiàn)這苦澀的根必將迎來滿園芬芳！ 我將一直在困境中尋找成功的希望。 人生成功第4課 沒有人可以使你感到自卑我選擇自我感覺良好

32、，這樣我能更加開放地學(xué)習(xí)。如果人們給我負(fù)面的回應(yīng)或是批評我做的事情，我不會認(rèn)為他們所說的就說明我是一個“差勁的人。我堅信自尊由我掌控，這讓我毫無戒心地去聽取別人的反饋，想看看是否有我可以學(xué)習(xí)的東西。我們每天都有兩種選擇。我們可以感到自己很棒，也可以感到自己很差勁。難道有人會選擇后者嗎？人生成功第5課緊緊抓住夢想我們每個人都有夢想。我們每個人都希望能發(fā)自內(nèi)心地相信自已有一種特殊的天賦，相信自己能發(fā)揮重要的作用，相信自己能以一種特殊的方式感動他人，相信自己能夠把世界變得更加美好。在一生中，我們都曾經(jīng)對自己渴望并追求的生活品質(zhì)抱有憧憬。然而，對我們大多數(shù)人來說，這些憧憬在日常生活的成規(guī)和挫敗中已經(jīng)變

33、得如此渺茫，以到于我們甚至不再努力去實現(xiàn)它們。對太多人來說，夢想已經(jīng)遠離，隨之遠離的還有塑造我們命運的意愿。很多人已經(jīng)推動了堅定的信念，而正是堅定的信念為勝利者創(chuàng)造了優(yōu)勢。我們所要做的就是重拴夢想，并實現(xiàn)夢想，讓我們每個人都記住，并去運用深藏在自己身上的無限潛能。人生成功第6課 毅力無法替代世界上沒有任何東西可以替代毅力。才干不可以，無所作為的能人十分普遍；天分不可以，碌碌無為的天才盡人皆知;教育不可以，受過良好教育的沒落者更是隨處可見。只要有毅力和決心，就是無所不能的。毅力并不總是意味著永遠堅持做同一件事。它意味著無論你做任何事情，你都要立刻全心投入，竭盡全力；它意味著先做艱苦的工作，再去期

34、待隨之而來的滿足和回報。它意味著開心地工作，渴望更多的知識和進步。它意味著多打幾個 ，多夏裝幾里路，多除草，早起床，意味著總是尋求更好的方式去做你在做的事情。毅力就是經(jīng)歷考驗和過失的成功。 人生成功第7課駐足片刻聞花香在現(xiàn)代生活的忙忙碌碌中，人們很少會停下來欣賞自然的美。問問自己，你有多少次傾聽過鳥兒的歌唱。你最近一次抬頭仰望閃耀的星空又是在什么時候？時光飛逝，人生苦短。不要忘記駐足聞聞花香。我們在急于謀生的過程中，往往忽視了我們生活的品質(zhì)。多少次，你聽見人們?yōu)檫@為那說“我忙死了。多可惜?。∮幸惶?，當(dāng)他們真的找到時間能夠駐足片刻聞花香時，可能已經(jīng)太遲了。 人生成功第8課加入到微笑者和贊美者的行

35、列來當(dāng)你對別人，別人也會對你報以，你自然會感覺很棒。即使他有對你報以，你也會感覺很棒，因為你認(rèn)識到世界上最貧窮的人就是從不微笑的人，當(dāng)你對那個人微笑，你立刻變得更加富有。贊美也是這個道理。當(dāng)你真誠地毛病抑或恭維一個人時，他將立刻受益，更喜歡自己。當(dāng)你讓別人感覺更好時，你自己也會感覺更好。人生成功第9課 讓自己快樂。調(diào)查說明，我們當(dāng)中70%的人在生活中時間有臨床性的抑郁現(xiàn)象。如今我們有這么多的機遇，為什么我們還這么不快樂呢？人們嘗試各種東西：金錢，權(quán)利，事業(yè)，婚姻，離婚，酒精，搖滾甚至毒品，但我們大多數(shù)人只是想要得到一樣?xùn)|西快樂?？鞓肥侨说囊环N自然的身心狀態(tài)；我們只要去相信快樂，讓自己感受快樂。

36、要宣稱：我應(yīng)當(dāng)?shù)玫娇鞓贰?說出來，唱出來，喊出來。優(yōu)先考慮快樂，讓快樂成為你最重要的事情。對你所擁有的一切抱以感激之情吧。 人生成功第10課 我擁有無與倫比的想象力現(xiàn)在我將通過這種神奇的力量得到我想要的。 如果我害怕發(fā)表演講，我就想象自己在公眾場合無所畏懼，充滿信心；如果我在病魔的煎熬，我就想象我以前健康的樣子；如果我感到貧窮，我就想象我將要富有。 現(xiàn)在我明白了：人類惟一的限制就是想象力。我之所以沒有成功，原因就在于我不知道如何使用我的想象力?，F(xiàn)在，我精通這個技巧，我將從中受益。最大的回報將是成功和愈加快樂。你會管理時間嗎?如何讓自己一天的時間不止24小時呢?這里有一些總結(jié):你會管理時間嗎?1

37、1.對目標(biāo)、任務(wù)、會議等事件分別按優(yōu)先級進行排序；2.從優(yōu)先級最高的事物著手；3.和拖延做斗爭，如果事情重要，從現(xiàn)在開始做；4.把大的、艱難的任務(wù)細(xì)分為小的、容易的部分；5.為自己創(chuàng)造一小時的寧靜，哪怕這需要很強的意志力，或者有時不起作用；你會管理時間嗎?26.找到一個隱蔽的地方，如圖書館或空閑的辦公室；7.當(dāng)你有重要的事情要處理時，學(xué)會對別人說“不；8.學(xué)會委派別人做事；9.歸納相似的事情，把它們放在一起處理；10.減少例行事務(wù)：它們不值得花費過多時間。縮短低價值的事件。拋開沒有價值的信件和文書工作。委派別人完成、減少或推遲優(yōu)先級很低的任務(wù)；你會管理時間嗎?311.避免完美主義。記住80/2

38、0定律；12.避免做出過多許諾。對你在有限時間內(nèi)能完成的工作持現(xiàn)實態(tài)度；13.不要把時間表排得滿滿的，為自己留下一定機動時間應(yīng)付突發(fā)事件；14.設(shè)置時間限制。例如，做某些決定時，不應(yīng)超過3分鐘；15.聚精會神地做手頭的事情；你會管理時間嗎?416.處理重要事情時，使用大塊的時間；17.迅速處理困難的事情，等待和拖延不會使它們變?nèi)菀祝?8.文書工作爭取只處理一次；19.在行動以前，徹底地思索整件工作；20.第一次就做好。成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的1 1：找方法，不找借口。2：遇到挫折時，對自己說“太棒了。3：不說消極的話，不落入消極的情緒，一旦出現(xiàn)立即正面處

39、理。4：隨時用零碎時間做零碎的事。5：寫下來，不要太依靠腦袋記憶。6：隨時記錄靈感。7：守時8：把重要的觀念方法寫下來，并隨時提醒自己。9：走路時，比平時快30%，肢體語言要健康，有力，不懶惰，不萎靡。10：每天自我反省一次。11：每天堅持一次運動。12：開會坐在前排。13：微笑。14：說話時，聲音有力。15：說話之前，先考慮對方的感受16：每天有意識或真誠地贊美別人3次17:不要用訓(xùn)斥 指責(zé)的口吻跟別人說話.18:每天做一件分外事.19:節(jié)儉.20:恪守誠信,說到做到.成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的2“好的習(xí)慣讓人立于不敗之地，壞的習(xí)慣那么讓人從成功的寶座上跌下來。拿破侖希爾認(rèn)為，保羅蓋蒂

40、的這句話很有道理。有一段時期，蓋蒂抽煙抽得很兇。一天，他去法國度假的途中，在一個小旅館投宿。晚上下起了大雨，地面特別泥濘，開了好幾個鐘頭的車之后，蓋蒂實在是累極了。吃過晚飯，他就回到自己的房間里，睡著了。但是清晨時分蓋蒂突然醒了過來，他很想抽支煙，于是他就打開了燈，很自然的伸手去摸他一般都會放在床頭的煙，但是沒有。他下了床，到衣服的口袋里去找，也沒有。于是他又在行李袋里找，結(jié)果他又一次失望了。他知道這個時候旅館的酒吧和餐廳早就關(guān)門了。他想，這個時候把不耐煩的門房叫過來，實在是不可能?，F(xiàn)在他唯一能得到香煙的方法就是穿好衣服，到火車站去，但是那還在6條街之外呢。 成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的3

41、看來情形并不樂觀，外面還下著雨。他的汽車也停在離旅館還有一段距離的車房里。而且，在他住店的時候，別人也提醒過他了。車房的門是午夜關(guān)，第二天早上6點才開門，現(xiàn)在能叫到出租車的機率也相當(dāng)于零。顯然，要是他真的迫切地需要一支煙，那么他只能在雨里走到黑暗中。抽煙的欲望不斷地折磨著他。于是，他下了床，脫下睡衣，穿好衣服，準(zhǔn)備出去。正在他伸手拿雨衣的時候，他突然笑了起來，笑自己傻。他突然覺得，自己的行為多荒唐可笑。蓋蒂站在那里，心里不停地想著，一個所謂的知識分子，一個商人，一個認(rèn)為自己有足夠的智慧可以對別人下命令的人，居然在三更半夜要離開舒適的旅館，冒著大雨走上好幾條街去買香煙。蓋蒂也是生平第一次注意到，

42、他現(xiàn)在早就養(yǎng)成了一個壞習(xí)慣，那就是為了一個不好的習(xí)慣，他可以放棄極大的舒適?？磥恚@個習(xí)慣對他并沒有什么好處，于是，他的頭腦立刻就清醒了過來，很快他就做出了決定。成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的4他已經(jīng)決定好了，就走到桌子旁邊把那個煙盒團起來扔出去，然后重新?lián)Q上睡衣，回到舒服的床上。心里懷著一種解脫，甚至是一種勝利的感覺，很滿足地關(guān)上燈，合上了眼睛。在窗外的雨聲里，他進入了一個從來沒有過的深沉的睡眠。自從那個晚上之后，他再也沒抽過一根煙，也再沒有想過要抽煙。蓋蒂說，他并不是想用這件事來指責(zé)那些有抽煙習(xí)慣的人。但是他經(jīng)常回憶那天晚上的情形，他只是為了表示，按照他當(dāng)時的情況，他差點被一種惡習(xí)俘虜。

43、經(jīng)常做一件事就會形成習(xí)慣，而習(xí)慣的力量是難以抗拒的。但是人類還有一種潛藏的緩沖能力，也不容小覷。既然人有可能養(yǎng)成一種習(xí)慣，那肯定他也有能力改掉這種習(xí)慣。還有些人說，奇怪的是，養(yǎng)成好習(xí)慣很難，但是一個壞習(xí)慣卻在不知不覺中就已經(jīng)形成了。但是，事實并非如此，這還要看一個人的毅力。不管怎么說，習(xí)慣終歸是習(xí)慣，并沒有合理的理論說壞習(xí)慣要比好習(xí)慣更容易養(yǎng)成。成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的5動作敏捷或遲緩只是個時間的問題，一個人要么習(xí)慣了準(zhǔn)時，要么他就會習(xí)慣遲到。一個準(zhǔn)時的人，總會體會到這種習(xí)慣給他帶來的好處，無論是約會，會議，還是什么別的方面的承諾。如果別人請你吃飯，你遲到了，那就會給主人和其他的客人造

44、成不便。你可能會因此而變得很不受歡迎，以后人家都不會再請你吃飯了。拿破侖 希爾認(rèn)為，對商人來說，準(zhǔn)時是一項特別寶貴的資產(chǎn)。俗話說得好，“時間就是金錢，這句話永遠是正確的，現(xiàn)在這個時代里，這個原那么比以前更加重要。現(xiàn)代企業(yè)的步調(diào)是一日千里，分秒必爭。主管和高級職員的每日安排都是滿滿的，因為他們可沒有多余的時間可以浪費，就像生產(chǎn)線不能耽擱一樣。守信對生意人來說，是個難得的品德，最有希望成功的商人和公司，他們一定是準(zhǔn)時接受定單，準(zhǔn)時回復(fù)并交貨，提供服務(wù)，準(zhǔn)時付款，準(zhǔn)時還債。如果等時間已過去了，訂貨還沒到，那顧客下次可能就不找你了。成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的6節(jié)儉是另外一種可以養(yǎng)成的習(xí)慣，對天生

45、節(jié)儉的人來說，這個習(xí)慣給他帶來的成功的機會要比別人多。而習(xí)慣了節(jié)儉的人，他只知道在乎時就要注意節(jié)減開支和成本。 受用一生的教誨：職場10只魔戒 N條箴言第只魔戒 第一條箴言：習(xí)慣仿佛像一根纜繩，我們每天給它纏上一股新索，要不了多久，它就會變得 牢不可破。第二條箴言：人類所有優(yōu)點都要變成習(xí)慣才有價值，即使愛這樣一個永恒的主題，你也 必須通過不斷的修煉，變成你的習(xí)慣，才真正會化為你的行動。第三條箴言：很多好的觀念、原那么，我們知道是一回事，但知道了是否能做到是另 一碼事。這中間必須架起一座橋，這橋便是習(xí)慣。第四條箴言：科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn)，一個習(xí)慣的養(yǎng)成需要天的時間，這天是個平均數(shù)， 但習(xí)慣一旦養(yǎng)成就將

46、終生受用。第五條箴言：任何一個習(xí)慣的培養(yǎng)都不會是輕而易舉的，因此一定要遵循循序漸進、由淺入 深、由近及遠、由漸變到突變的原那么。第只魔戒 第一條箴言： 人生來是簡單的，和文明打交道之后變得復(fù)雜了，陷入了某種復(fù)雜的旋渦中 無法自拔，這些羈絆使人忘記人性的最終追求是平靜、簡單、自由。第二條箴言：不經(jīng)過復(fù)雜的簡單是一種蒼白，我曾經(jīng)很人為地把金錢放在一邊它卻不安分， 但今天當(dāng)我駕馭了金錢，它就能很安分地呆在一邊。第三條箴言：要鍛煉一個人的財商，讓他具有富人心態(tài)，首先他確實要學(xué)會放棄，同時也要 學(xué)會克服，要學(xué)會走出很多障礙和陰影。第四條箴言：財商教育的根本目的是讓人們獲得自由，增加收入、減少財務(wù)問題的初

47、衷是減 少人們在金錢上的虛榮心和攀比風(fēng)。第五條箴言：財商教育要解決人類面對金錢的兩大問題：恐懼與貪婪。而為了生活穩(wěn)定這個 假象，人們常常淪為金錢的奴隸。第六條箴言：對于金錢，不是說你要成為它的主人，而是要做到與之和諧、平等，因為它反 映的是你自己，所以對它要多一分寬容。第只魔戒 第一條箴言：成功的實質(zhì)就是獲得自由度，就是當(dāng)你想當(dāng)?shù)娜?，做你想做的事，去你想去?地方，說你想說的話。 第二條箴言：世上沒有懶惰的人，只有沒有目標(biāo)的人。世界上最貧窮的人就是沒有目標(biāo)的人 ，因為連夢想都沒有，還會擁有什么？第三條箴言：只有明確而具體的目標(biāo)才可衡量，而只有可衡量的目標(biāo)才可能達到。第四條箴言：付出就表示富有，

48、索取就是貧窮，快行動起來，用行動表現(xiàn)你的富有。第五條箴言：心態(tài)、目標(biāo)、時間管理三者的集中點就是在行動上，三者的表現(xiàn)特征也是行 動。它們共同形成知行合一的統(tǒng)一體。 第只魔戒 第一條箴言：人的一生就是不斷地闖入一個又一個圈子并不斷爭取承認(rèn)的過程。第二條箴言：在西方社會，特別是在北美，只有那些樹立自我推銷和成功意識的人，才有可 能贏得機會與成功。第三條箴言：國際化人才不是一個地理意義上的概念，而是文化、心理層面的概念。是否是 國際化人才取決于一個人的涵養(yǎng)、知識構(gòu)成和思維模式。第四條箴言：創(chuàng)業(yè)的失敗率是非常高的，在美國，每年有幾十萬人開公司，每年也有幾十萬 家公司倒閉，所以創(chuàng)業(yè)只適合一部分人。第五條箴

49、言：我時常摸著跳動的心口，數(shù)著那一下一下的脈搏，計算著我的生命長河究竟能 卷起多少浪花。我要讓短暫的生命，爆發(fā)出火花。第六條箴言：命運不是機遇，而是一種選擇。命運從來都不是一種可以等到的東西，而是一 件需要去完成的事情。第只魔戒 第一條箴言：不管你對成功如何定義，積極總是有價值的。積極不一定成功，但消極肯定失敗。第二條箴言：成功學(xué)的最大的特征就是強調(diào)標(biāo)準(zhǔn)化和量化，把認(rèn)為說不清楚、不可琢磨的東 西都變成可琢磨、可操作的東西。第三條箴言：成功絕對有捷徑，當(dāng)然它的捷徑絕對不是整個過程，這個捷徑告訴我們的是必 須按照最有效的成功策略去做，否那么你就會越忙越出錯。第四條箴言：人的改變會遵循一定的軌跡，即

50、：結(jié)果決定于行為，行為決定于態(tài)度，態(tài)度決 定于信念，信念決定于自我期望。第五條箴言：人對環(huán)境有四種反應(yīng)：第一是離開環(huán)境；第二是改變環(huán)境；第三是適應(yīng)環(huán)境； 第四是抱怨環(huán)境。前三種反應(yīng)都有可能從中找到新的生機，只是千萬不要選擇第四種反應(yīng)。第六條箴言：成功的秘訣第一個是堅持到底，永不放棄；第二個就是當(dāng)你想放棄的時候，再 照著第一個秘訣去做：堅持到底，永不放棄。第只魔戒第一條箴言：人們總是感到自己是對的，別人和世界都是不對的；所以人們總想改變世界、 改變別人，很少想到改變自己。其實，改變世界應(yīng)該先從改變自己開始。第二條箴言：不少老板都恨不得把員工改造成跟自己一樣的人，其實最不像你的人、你最不 喜歡的人

51、，或許正是你的團隊最需要的人。第三條箴言：性格本身并沒有好壞之分，也沒有誰對誰錯。樂觀和悲觀對這個世界都有貢獻 ，前者發(fā)明了飛機，后者發(fā)明了降落傘。第四條箴言：這是一個充斥著個性的時代，這是一個崢嶸著個性的社會，許多個性相差甚遠 的人都在適于自己的路上找到了自己最好的歸宿。第五條箴言：個性是半個生命，喪失個性就是半個死亡。第只魔戒 第一條箴言：中國人的問題是更重視歷史，但缺少前瞻性的思維。其實我們更應(yīng)該具有未來 決定現(xiàn)在這樣一種思考。第二條箴言：如果中國只變成一個世界工廠是不行的，我們的最大優(yōu)勢是人，但現(xiàn)在還只是 重視數(shù)量而沒重視質(zhì)量。第三條箴言：社會認(rèn)可是動態(tài)的，歷史上有很多人就是生前不被社

52、會認(rèn)可的，像梵高的畫， 像馬克思的思想。第四條箴言：個性化發(fā)展強調(diào)的是你自己的個性，是適合自己的途徑，我切身的體會不是學(xué) 識上的成長，而是精神上的成長。第五條箴言：科技發(fā)展的日新月異、信息的爆炸，使本領(lǐng)的地位比任何時代都高，本領(lǐng)恐慌 比任何時代都更可怕。第六條箴言：在世紀(jì)，擁有創(chuàng)造性學(xué)習(xí)能力是最根本的應(yīng)變之道。 第只魔戒 第一條箴言：在生活中所極力追求的，應(yīng)該是按自己內(nèi)心深處確認(rèn)的人類的永恒價值，而不 是流行的市場價值。第二條箴言：人的智慧力、道德力和意志力，是重要的“人格三要素。這三種力量越強的 人，越容易達到自我實現(xiàn)的最高境界。第三條箴言：高峰體驗既是一種最正確狀態(tài)，又是一種終極體驗。經(jīng)歷

53、了這種高峰體驗的人， 也就會產(chǎn)生這輩子沒有白活的感覺。第四條箴言：物質(zhì)需要屬于匱乏性需要，它的滿足引起的感覺是短暫的、膚淺的；自我實現(xiàn) 需要是成長性需要，它的滿足才會產(chǎn)生持久的、深刻的感覺。第五條箴言：第一流的菜湯比第二流的繪畫更具有創(chuàng)造性。第只魔戒 第一條箴言：任何職業(yè)生涯規(guī)劃都不能對未來進行非常精確的預(yù)測，但人們可以進行環(huán)境分 析、個人條件分析，然后在此基礎(chǔ)上確定自己的目標(biāo)。第二條箴言：評判職業(yè)成功與否沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，這里有一個標(biāo)準(zhǔn)可做參考，即在實現(xiàn)目標(biāo) 的過程中快樂一定要多于痛苦。第三條箴言：人的自我實現(xiàn)就是人的創(chuàng)造性潛能的充分發(fā)揮，求知是自我實現(xiàn)的前提，求美 是自我實現(xiàn)的過程。第四條箴言：職業(yè)生涯開發(fā)與管理講求的是：只要開始，永遠不晚；只要進步，總有空間。 重要的不