醫(yī)學抗核抗體譜醫(yī)學生用的免疫學

1、醫(yī)學抗核抗體譜醫(yī)學生用的免疫學一、抗核抗體概念傳統(tǒng)：是以真核細胞的核成分為靶抗原的器官非特異性自身抗體的總稱，屬自身抗體中的一組抗體。新概念：是指抗核酸和核蛋白抗體的總和。靶抗原包括細胞核、細胞質(zhì)、細胞骨架、細胞分裂周期蛋白等。二、抗核抗體分類1, 抗DNA抗體：ds-DNA、ss-DNA2,抗組蛋白抗體：抗組蛋白亞單位H1、H2A、H2B、H3、H4及其復合物抗體。3,抗DNA組蛋白復合物抗體：狼瘡細胞、抗DNP抗體、抗核小體抗體 抗ENA抗體：Sm、SSA、SSB4,抗非組蛋白抗體 抗染色體抗體：抗著絲點二、抗核抗體分類5,抗核仁抗體：抗RNA多聚酶/、原纖維蛋白、NOR-90和Th/To

2、等抗體。6,抗其他細胞成分抗體：板層素、線粒體、高爾基體、溶酶體、肌動蛋白、波形纖維蛋白、原肌球蛋白、細胞角蛋白、紡綞體、中間體等。三、抗核抗體檢測方法首選：間接免疫熒光法（IIF）抗原底物片選擇：1、HEp-2細胞（人喉癌上皮細胞)2、HeLa細胞（人子宮頸癌細胞）3、Ehrlich（小鼠腹水癌細胞）4、動物器官組織切片HEp-2細胞優(yōu)點：人源培養(yǎng)細胞，核抗原豐富、特異性強、含量高；核大、細胞結構清晰、易于熒光染色核型分析。 兩種不同底物檢測ANA的陽性率比較 疾 病 ANA檢測陽性率（%） HEp-2細胞片 組織切片系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE） 99 95干燥綜合癥 85 70系統(tǒng)性硬化 85

3、 40類風濕性關節(jié)炎 55 25 幼年性風濕關節(jié)炎 40 20四、熒光模型1，均質(zhì)型：分裂間期細胞核質(zhì)染色均勻一 致，分裂期細胞染色質(zhì)陽性。相關抗體：抗DNP、抗dsDNA、抗核小體 抗體 、抗組蛋白抗體。2，斑點型：分裂間期細胞核質(zhì)染色呈斑點狀， 斑塊狀，核仁陰性， 分裂期細胞染色質(zhì)陰性。相關抗體：與抗溶性核抗原相關。 四、熒光模型3，核仁型：分裂間期細胞核仁著染熒光，分 裂期細胞染色質(zhì)陰性。核仁顆粒型：與抗RNA多聚酶相關核仁均質(zhì)型：與PM-SCL相關核仁點型（1-2點）：與抗NOR抗體相關4，核膜型：分裂間期細胞熒光染色在核膜周圍，分裂 期細胞染色質(zhì)陰性。相關抗體：抗板層素抗體、gp-2

4、10抗體四、熒光模型5，著絲點型：分裂間期細胞核內(nèi)均勻散布大 小較一致熒光顆粒（40-60）， 分裂期細胞染色質(zhì)著絲點密集排列。 相關抗體：抗著絲點型抗體6，胞質(zhì)型：分裂間期胞質(zhì)熒光陽性。 a,粗顆粒型（線粒體型）、 b,細顆粒型（核糖體） c,核質(zhì)顆粒型（JO-1型）四、熒光模型7，混合型：兩種或兩種以上熒光染色模型。解決方法：用不同稀釋度血清檢測。8，少見模型：a,肌動蛋白型、 b,波形纖白蛋白型、 c,紡錘體型等。五、ANA在各疾病中陽性率 疾 病 陽性率（%）系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）活動期 95-100 非活動期 80-100藥物性狼瘡（DLE） 95-100 混合性結締組織病 （MC

5、TD） 95-100系統(tǒng)性硬化（SSc） 70-90干燥綜合癥 （SS） 60-80五、ANA在各疾病中陽性率 疾 病 陽性率（%）多發(fā)性肌炎/皮膚炎（PM/DM） 40-60類風濕關節(jié)炎（RA） 30-50 幼年類風濕關節(jié)炎（JRA） 20-40慢性活動性肝炎（CAH） 10-20 重癥肌無力（MG） 10-20慢性淋巴性甲狀腺炎 10-20正常人 5-10六、各型ANA臨床意義及檢測方法抗DNA抗體1、抗ds-DNA臨床意義SLE診斷標準之一活動期SLE陽性率80%-90%未治療SLE病人特異性90%，敏感性70%抗體高水平伴補體低水平，提示狼瘡性腎炎危險性大SLE活動指標之一，用于監(jiān)視S

6、LE病情變化，活動期判斷、藥物治療效果觀察檢測方法間接免疫熒光法（IIF）：短膜蟲法、馬疫錐蟲法放射免疫法（RIA）酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）免疫印跡法（IB）斑點金免疫滲濾法（DIGFA）間接血凝法（PHA）2、抗ss-DNA臨床意義對疾病診斷缺乏特異性，SLE陽性率70%以上，DIL：60%-80%，MCTD：20%-50%，PM/DM：40-50%，SSc：14%，SS：13%，RA：8%。非風濕疾病（慢活肝、細菌、病毒感染等）、正常老年人也存在抗ss-DNA一般不用于常規(guī)檢測抗組蛋白抗體（AHA）AHA的靶抗原是細胞核染色質(zhì)中的組蛋白，為一組與DNA結合的含大量陽性電荷的小分子蛋白質(zhì)

7、，無種屬及器官特異性，是染色質(zhì)基本結構核小體的重要組織部分。 組蛋白可分5種：H1、H2A、H2B、H3、H4。臨床意義AHA可以在多種結締組織病中出現(xiàn)，不具有診斷特異性。僅有AHA抗體而不伴有其他ANA（抗ssDNA除外），強烈支持DIL診斷，IgG型AHA更有利于DIL診斷。檢測方法ELISA法檢測總的AHAIB法檢測組蛋白亞單位多肽抗體抗DNA組蛋白復和物抗體1、狼瘡細胞臨床意義LE細胞在活動性SLE中陽性率50%-80%，在緩解期和治療后性率低。在SS、MCTD、慢活肝、結核、腎炎、白血病中亦可見到LE細胞。檢測方法顯微鏡鏡檢，1994年美國臨床病理協(xié)會明確提出LE檢查是一項過時（廢棄

8、）的試驗抗DNA組蛋白復和物抗體2、抗DNP抗體臨床意義陽性主要見于SLE，活動期陽性率80%-90%，非活動期20%左右。其它結締組織病陽性率低于10%，且部分合并SLE檢測方法膠乳凝集法，陰性不能排除SLE抗DNA組蛋白復和物抗體1、抗核小體抗體核小體含4種核心組蛋白，形成組蛋白八聚體，占據(jù)核小體頂部，通過聯(lián)結DNA與相鄰核小體連接。臨床意義該自身抗體產(chǎn)生早先于其它抗體，與腎小球腎炎有關。多見于活動性狼瘡。在SLE中診斷敏感性58%-71%，特異性高達7%-99%。檢測方法主要應用ELISA法抗可提取性核抗原抗體1、抗Sm抗體臨床意義抗Sm抗體是公認的SLE標記抗體，在SLE中陽性率20%

9、-40%，對早期、不典型的SLE或經(jīng)治療緩解后SLE回顧性診斷有意義檢測方法常用IB法、條帶（斑點）印跡法。國外常用ELISA法。IB法顯色區(qū)帶為28000、29000、13500上。IF法常顯示強斑點型熒光。2、抗U1RNP臨床意義混合性結締組織病陽性率95%,SLE30%-40%，SS14%，SSc12%,PM/DM15%。抗體陽性患者常與肌炎、食道蠕動功能低下、雷諾現(xiàn)象、關節(jié)痛、指硬化、間質(zhì)性肺炎相關。腎炎發(fā)病率低。檢測方法常用IB法、條帶（斑點）印跡法。國外常用ELISA法。IB法顯色區(qū)帶為70000、32000、17500上。IF法常顯示強斑點型熒光。3、抗SS-A抗體臨床意義原發(fā)性

10、SS中陽性率40%-95%,SLE20%-60%，SSc24%,PBC20%。抗體陽性可引起亞急性皮膚型狼瘡（SCLE）；IgG類抗體通過胎盤可引起新生兒狼瘡綜合癥（NLE），造成先天性心臟傳導阻滯。檢測方法常用IB法。國外常用ELISA法。IB法顯色區(qū)帶為52000（多見于SS）、60000（多見于SCLE）。IF法常顯示陰性或弱斑點型熒光。4、抗SS-B抗體臨床意義是SS的血清特異性抗體，原發(fā)性SS中陽性率65%-85%,SLE10%-15%，且大多為SLE合并SS。亦可引起新生兒狼瘡綜合癥（NLE），造成先天性心臟傳導阻滯。檢測方法常用IB法。國外常用ELISA法。IB法顯色區(qū)帶為450

11、00、47000、48000（更有特異性）IF法常顯示陰性或弱斑點型熒光。5、抗核糖體抗體（抗-rRNP抗體）臨床意義是SLE的血清特異性抗體，陽性率10%-40%。具有腦炎和精神病癥狀的SLE患者， 抗-rRNP抗體的敏感性56%-90%。檢測方法常用IB法。國外常用ELISA法。IB法顯色區(qū)帶為38000、16500、15000。IF法細胞分裂間期HEp-2細胞胞質(zhì)呈非常致密、均勻細顆粒樣熒光，核仁呈細顆?；蚓|(zhì)型熒光。6、抗ScL-70抗體臨床意義是系統(tǒng)性硬化（SSc) 的血清特異性抗體，診斷SSc的特異性為100%，敏感性40%。檢測方法常用IB法。國外常用ELISA法。IB法顯色區(qū)帶

12、為86000、70000。IF法細胞分裂間期HEp-2細胞胞質(zhì)呈弱的細顆粒樣到均質(zhì)型熒光，核仁呈細顆?；蚓|(zhì)型熒光。7、抗Jo-1抗體臨床意義是多發(fā)性肌炎/皮肌炎（PM/DM） 的血清標記性抗體，在PM/DM中陽性率20%-30%，在合并肺間質(zhì)病變病人中陽性率高達60%。抗Jo-1對肌炎的診斷特異性95%，抗體效價與疾病活動性、CK水平有關。檢測方法常用IB法。國外常用ELISA法。IB法顯色區(qū)帶為55000。IF法細胞分裂間期HEp-2細胞胞質(zhì)呈細顆粒樣到均質(zhì)型熒光。8、抗增殖性細胞核抗原（PCAN）抗體臨床意義是SLE 的血清標記性抗體，但敏感性較低，僅3%-6%，與SLE活動性及彌漫增殖

13、性腎小球腎炎相關。檢測方法常用免疫擴散法（ID）及IIF法。IIF中HEp-2細胞分裂間期細胞核部分（約半數(shù)）呈現(xiàn)明亮的細顆粒樣熒光，另一部分呈現(xiàn)陰性或較弱的細顆粒樣熒光。9、抗Mi-2抗體臨床意義是肌炎高度特異性抗體（97%），成人DM（15%-25%）幼年型DM（10%-15%）PM/DM（5%-10%）?？贵w陽性患者95%有皮膚病變，多表現(xiàn)為V型及“圍巾”型皮疹與表皮增生，對治療的反應及預后較好。檢測方法IIF中HEp-2細胞分裂間期呈細胞核強細顆粒熒光，核仁弱陽性，胞質(zhì)完全陰性。10、抗類風濕關節(jié)炎核抗原（RANA）抗體臨床意義靶抗原是一種與EB病毒感染有關的酸性可溶性蛋白質(zhì)，存在于E

14、B病毒感染的B淋巴細胞內(nèi)，在RA中的陽性率40%-60%，抗體滴度高。檢測方法IIF以含有EBV基因組的人淋巴細胞作為抗原底物檢測，陽性時表現(xiàn)為大多數(shù)細胞核及胞質(zhì)內(nèi)分布均勻密集的細小顆粒型特異性熒光。ELISA法是以人工合成的P62多肽作為靶抗原進行檢測。11、抗P80螺旋蛋白抗體臨床意義靶抗原是核質(zhì)中螺旋小體相關聯(lián)的80000核蛋白和小核糖核蛋成分，又稱抗核少點抗體?？筆80螺旋蛋白抗體可見于干燥綜合癥（4%）、原發(fā)性膽汁性肝硬化和慢性活動性肝炎。檢測方法IIF法多表現(xiàn)為分裂間期細胞的細胞核核質(zhì)1-6個分散的圓點狀熒光染色，有絲分裂期細胞濃縮的染色體區(qū)為陰性。12、抗SP100抗體臨床意義靶

15、抗原為分子量100000的可溶性酸性磷酸化核蛋白?？筍P100抗體對原發(fā)性膽汁性肝硬化有較高的敏感性和特異性，在PBC患者中陽性率10%-30%，其它肝病均陰性。在AMA陰性患者中陽性率（60%）顯著高于AMA陽性者（20%）。檢測方法IIF法多表現(xiàn)為分裂間期細胞的細胞核核質(zhì)6個以上大小不等分散的圓點狀熒光染色，有絲分裂期細胞濃縮的染色體區(qū)為陰性?？谷旧wDNA蛋白抗體-抗著絲點抗體簡介ACA靶抗原為著絲點蛋白，位于在細胞分裂時與紡綞體相互作用的動原體的內(nèi)板與外板上。通常分4種：著絲點蛋白A（CENT-A，17000）、著絲點蛋白B（CENT-B，80000）、著絲點蛋白C（CENT-C，14

16、0000）、著絲點蛋白D（CENT-D）。主要靶抗原是CENT-B，能與各種著絲點蛋白的血清發(fā)生反應?？谷旧wDNA蛋白抗體-抗著絲點抗體臨床意義ACA是系統(tǒng)性硬化亞型-CREST綜合癥的特異性抗體，陽性率80%-98%。ACA陽性是患者預后較好的一個指標。原發(fā)性雷諾現(xiàn)象患者中ACA陽性率52%，抗體陽性患者易發(fā)展成局限型系統(tǒng)性硬化。PBC患者中ACA陽性率10%-20%，PBC患者中ACA的靶抗原性質(zhì)同SSc，以著絲點蛋白B為主。抗染色體DNA蛋白抗體-抗著絲點抗體檢測方法 應用分裂細胞染色體為抗原基質(zhì)的IIF法，檢測ACA效果較佳。要求HEp-2細胞抗原底物至少應含有少量分裂期細胞。IIF檢測ACA陽性時分裂細胞可見細的、大小相同、明亮的熒光顆粒均勻散布于細胞核位置，顆粒數(shù)量40-80個；有絲分裂期細胞染色體呈現(xiàn)密集棒狀或帶狀排列的著絲點熒光。 ELISA檢測ACA時多用提純或重組的CENT-B為包被抗原?？蛊渌毎煞挚贵w（一）核包膜蛋白抗體IIF法測ANA時，在自免肝患者中出現(xiàn)纖細光滑的核膜型熒光染色，對自免肝有診斷意義主要包括：抗GP210抗體、抗P62抗體。GP210診斷PBC敏感性10%-41%，特異性96%-99%，抗體陽性提示預后不良。抗P62診斷PBC敏感性23%-32%，一般