高效液相色譜法測(cè)定八角蓮中鬼臼毒素的含量

1、高效液相色譜法測(cè)定八角蓮中鬼臼毒素的含量【摘要】目的建立高效液相色譜法測(cè)定八角蓮中鬼臼毒素含量的方法。方法采用高效液相色譜法，色譜柱為Diansilt18柱；流動(dòng)相：甲醇-0.1l/L磷酸二氫鉀水溶液5050；流速：1.0l/in；檢測(cè)波長(zhǎng)：290n。結(jié)果鬼臼毒素在0.047690.4769g/l呈良好線性關(guān)系r=0.9996，平均回收率為99.94%，RSD=1.71%n=5。結(jié)論采用高效液相色譜法測(cè)定八角蓮中鬼臼毒素的含量，操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)?！娟P(guān)鍵詞】高效液相色譜八角蓮鬼臼毒素Abstrat：bjetiveTestablishaethdfdeteriningPdphlltxinin

2、DyssaversipellisbyHPL.ethdsHighPerfraneLiquidhratgraphyasperfredDiansil18.Thehratgraphynditinsereasflls:ethanl-0.1l/Lnbasiptassiuphsphate(5050)asbilephase,flratebEing1.0l/inanddetetingavelengthas290n.ResultsAgdlinearityfPdphlltxinasshninrangef0.047690.4769g/l(r=0.9996),theaveragereveryas99.94%andRSD

3、as1.71%(n=5).nlusinTheethdansupplyevidenefrthequalityevaluatinfDyssaversipellis.Itissipleandaurate.Keyrds：HPL；Dyssaversipellis；Pdphlltxin八角蓮為小檗科植物八角蓮DyssaversipellisHane.hengPdphylluversipelleHane.的根及根莖。具有清熱解毒、化痰散結(jié)、祛痰消腫之功能。用于癰腫疔瘡、瘰疬、咽喉腫痛、跌打損傷、毒蛇咬傷等。筆者曾對(duì)八角蓮的性狀、顯微構(gòu)造進(jìn)展過(guò)研究1。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定八角蓮中鬼臼毒素的含量，為完善

4、八角蓮藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及臨床應(yīng)用提供科學(xué)根據(jù)。1儀器與試藥1.1儀器戴安UltiateT3000型高效液相色譜儀，包括四元梯度泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、紫外檢測(cè)器、變色龍hrelen軟件數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；島津AU120D分析天平d0.1g/0.01g；UP5200H超聲波清洗器熊貓集團(tuán)南京電子計(jì)量。1.2試藥甲醇為色譜純中國(guó)上海陸都化學(xué)試劑廠；磷酸二氫鉀為分析純。鬼臼毒素對(duì)照品含量測(cè)定用，以93.5%計(jì)，批號(hào)111645202201由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；八角蓮DyssaversipellisHane.hengPdphylluversipelleHane.，由中南民族大學(xué)萬(wàn)定榮教授鑒定和提供。2

5、方法與結(jié)果2.1色譜條件Diansilt18色譜柱2504.6，5；流動(dòng)相為甲醇-0.1l/L磷酸二氫鉀5050；檢測(cè)波長(zhǎng)290n；流速1.0l/in；柱溫30；靈敏度：0.1AUFS；理論塔板數(shù)按鬼臼毒素峰計(jì)算不低于1500。2.2對(duì)照品溶液的制備精細(xì)稱取在五氧化二磷枯燥器中減壓枯燥12h的鬼臼毒素對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升約含0.5g的溶液，搖勻，微孔濾膜過(guò)濾0.45，得鬼臼毒素對(duì)照品溶液。2.3供試品溶液的制備分別取八角蓮根莖和根粉末過(guò)3號(hào)篩各約0.5g，精細(xì)稱取，置具塞錐形瓶中，精細(xì)參加甲醇25l，密塞，放置12h，稱定重量，超聲處理30in，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的

6、重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，微孔濾膜過(guò)濾0.45，得八角蓮根莖和根的供試品溶液。2.4八角蓮根莖和根HPL譜圖比擬分別取八角蓮根莖和根供試品溶液10l，注入高效液相色譜儀中，對(duì)其HPL圖進(jìn)展比擬，由圖14比擬可以看出，八角蓮根中根本不含鬼臼毒素成分。圖1八角蓮根莖HPL圖略圖2八角蓮根HPL圖略圖3鬼臼毒素對(duì)照品HPL圖略圖4空白溶劑HPL圖略2.5線性關(guān)系考察精細(xì)稱取在五氧化二磷枯燥器中減壓枯燥12h的鬼臼毒素對(duì)照品25.5g，置50l容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻0.5193.5%0.4769g/l，精細(xì)量取溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0l，分別置10l容量瓶中，加甲醇

7、稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，鬼臼毒素含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算回歸方程為：Y=0.01108X8.6782103，r=0.9996。結(jié)果說(shuō)明，鬼臼毒素的進(jìn)樣量在0.047690.4769g/l的范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系。2.6精細(xì)度實(shí)驗(yàn)精細(xì)汲取鬼臼毒素對(duì)照品溶液10l，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，依次測(cè)定各峰的峰面積值，結(jié)果鬼臼毒素對(duì)照品RSD=0.24%，說(shuō)明儀器精細(xì)度良好。2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精細(xì)汲取密封室溫保存的八角蓮根莖供試品溶液10l，分別于0，2，5，8，10h進(jìn)樣，測(cè)定其峰面積值，計(jì)算RSD=0.84%n=3，結(jié)果說(shuō)明，供試品

8、溶液在10h內(nèi)檢測(cè)對(duì)結(jié)果無(wú)影響，穩(wěn)定性良好。2.8重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)取同一批八角蓮根莖樣品，按供試品溶液制備方法平行制備5份供試液，分別精細(xì)汲取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10l，測(cè)定5份供試品中鬼臼毒素的含量，結(jié)果RSD=1.50%。2.9樣品測(cè)定取3批八角蓮根莖樣品，按供試品溶液制備方法操作，分別精細(xì)汲取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10l，注入高效液相色譜儀，用外標(biāo)法測(cè)定，計(jì)算樣品中鬼臼毒素的含量。結(jié)果見(jiàn)表1。2.10加樣回收率實(shí)驗(yàn)取含量的八角蓮根莖樣品5份，各約0.25g，精細(xì)稱定，分別參加鬼臼毒素對(duì)照品2.55g2.5593.5%2.3843g，按供試品溶液制備方法操作，照上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率

9、，結(jié)果平均回收率為99.94%，RSD=1.71%。表1八角蓮中鬼臼毒素的含量測(cè)定結(jié)果略表2八角蓮中鬼臼毒素加樣回收率測(cè)定結(jié)果略3討論3.1八角蓮中鬼臼毒素的含量與提取方法有關(guān)八角蓮的有效成分為鬼臼毒素，有文獻(xiàn)報(bào)道八角蓮經(jīng)80%甲醇超聲提取，測(cè)得鬼臼毒素的含量為0.94%2，采用文中所用的甲醇超聲提取測(cè)得鬼臼毒素的含量為1.01%，結(jié)果說(shuō)明，八角蓮中鬼臼毒素的含量可能與提取溶劑、方法等有一定關(guān)系，值得進(jìn)一步研究。3.2八角蓮根中根本不含鬼臼毒素通過(guò)比擬八角蓮根與根莖的HPL圖可以看出，八角蓮根中根本不含鬼臼毒素，實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，主要是八角蓮的根莖具有鬼臼毒素的抗癌抗病毒活性。本法測(cè)定八角蓮中鬼臼毒素的含量，樣品預(yù)處理簡(jiǎn)單，有效成