4種中藥體外抗結(jié)核分枝桿菌H37RV的研究

1、4種中藥體外抗結(jié)核分枝桿菌H37RV的研究【關(guān)鍵詞】夏枯草；,積雪草；,筋骨草；,青蒿素；,抗結(jié)核摘要：目的研究中藥夏枯草、積雪草、筋骨草和青蒿素的體外抗結(jié)核分枝桿菌H37RV的活性。方法采用改進羅氏固體培養(yǎng)基試管培養(yǎng)法進展活性檢測。結(jié)果夏枯草醇提物抗結(jié)核效果明顯；積雪草苷片、筋骨草及青蒿素均無效。結(jié)論夏枯草醇提物抗結(jié)核菌效果優(yōu)于水提物；積雪草醇提物有微弱抑制結(jié)核桿菌活性，但其有效成分可能不是積雪草苷；青蒿素及二氫青蒿素無抑制結(jié)核分枝桿菌的活性。關(guān)鍵詞：夏枯草；積雪草；筋骨草；青蒿素；抗結(jié)核StudiesntheAnti-ybateriuTuberulsisAtivityf4hineseedi

2、inalHerbsAbstrat：bjetiveTexplretheeffetiveantiybateriutuberulsisativityfPrunellavulgarisL.，entellaasiatia(L.)Urb，AjugadeubensThunb.andarteisini.ethdsAntiybateriutuberulsisativitiesinvitrftheextratsereperfred.ResultsThealhliextratfPrunellavulgarisL.hadbviuslyantiybateriutuberulsiseffet,hiletheextratf

3、AjugadeubensThunb.andarteisininerefneffetagainsttuberlsi.nlusinTheresultssuggestedthattheantiybateriutuberulsisativityfPrunellavulgarisL.alhliextratasresignifiantthanaterslubleextratfit,andasiatisideserelikelytbenneffetivenstituentsfentellaasiatia(L.)Urbttuberlebaillus.Keyrds：PrunellavulgarisL.;ente

4、llaasiatia(L.)Urb；AjugadeubensThunb.；Arteisinin；Antiybateriutuberulsis結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的慢性傳染病，以肺結(jié)核最為常見。近20年來，由于受艾滋病的流行、耐藥結(jié)核病及流動人口增多等因素的影響，全球結(jié)核病疫情呈明顯上升趨勢。肺結(jié)核近來又成為世界上殺傷力最大的傳染玻數(shù)十年來,國際上針對結(jié)核菌已開發(fā)出近二十種藥物,但均存在副作用大,易產(chǎn)生耐藥性等缺點。特別是耐藥及多重耐藥菌株(ultipledrugsresistantbaillustuberulsis,DR-TB)的出現(xiàn),更是對現(xiàn)有的抗結(jié)核藥物提出了挑戰(zhàn)。同時,從化學合成物

5、中尋找有效藥物的難度日益增大。因此,近年來從我國豐富的中藥資源中尋找有效的抗結(jié)核藥物,已引起越來越廣泛的重視。本文對4種傳統(tǒng)中藥進展體外抗結(jié)核桿菌活性的研究。1材料1.1菌種與培養(yǎng)基人型結(jié)核分枝桿菌H37RV(來源于廣州市胸科醫(yī)院)；實驗采用改進羅氏固體培養(yǎng)基,配制方法參考文獻1。1.2提取物及藥品夏枯草水提物：夏枯草藥材(產(chǎn)地:湖北)粗粉,以水為溶劑加熱回流提取，過濾，20%乙醇沉淀除去雜質(zhì),濃縮,凍干得到粉末,收率7.0%。夏枯草醇提物:同批次夏枯草藥材粗粉,以乙醇加熱回流提取，濃縮，凍干得提取物，收率6.5%。積雪草醇提物:積雪草藥材(產(chǎn)地：安徽)粗粉，75%乙醇加熱回流提物,過濾，濃縮

6、，凍干得提取，收率28.3%。筋骨草醇提物:筋骨草藥材(產(chǎn)地：安徽)粗粉乙醇加熱回流濃縮至無醇味,加熱水溶后，冷卻沉淀除去雜質(zhì),濃縮凍干得提取物，收率9.1%。積雪草苷片：上海雷允上藥批號031102利福平膠囊：廣東華南制藥廠批號040502青蒿素,二氫青蒿素：純度HPL98%,陳祥飛博士贈送。熊果酸：中國藥品生物制品檢定所。2方法2.1提取物薄層鑒別夏枯草TL鑒別條件：展開劑環(huán)己烷氯仿醋酸乙酯冰醋酸20580.5，顯色條件：10%硫酸乙醇溶液105加熱顯色。積雪草TL鑒別條件：展開劑氯仿甲醇水730.5，顯色條件：10%硫酸乙醇溶液105加熱顯色。筋骨草TL鑒別條件：展開劑醋酸乙酯乙醇41，

7、顯色條件：10%香草醛硫酸乙醇溶液105加熱顯色。以上薄層均采用硅膠G板青島海洋展開。2.2含藥培養(yǎng)基的制備取各提取物及積雪草苷片用0.5%吐溫-80水溶液溶解或混懸，制成含藥濃度分別為5，2，0.5，0.1，0.02g/l共五個濃度的含藥培養(yǎng)基；0.2及0.05g/l的青蒿素和二氫青蒿素培養(yǎng)基；5g/l的利福平培養(yǎng)基，每個濃度平行裝2支試管，以0.5%吐溫80水溶液作為空白對照培養(yǎng)基。取適量無藥改進羅氏培養(yǎng)基上2030d后生長良好的H37RV結(jié)核桿菌菌株。取上述菌種適量,置盛0.5%(v/v)Teen80生理鹽水的瑪瑙研缽中,研磨成混懸液,將濃度調(diào)整至1g/l，再用生理鹽水稀釋，使之濃度為0

8、.5101g/l，供接種用。取該菌液0.1l，在無菌條件下分別接種于不同濃度的各培養(yǎng)基中,使接種菌量約為0.5103g/l。放入37恒溫箱中培養(yǎng)，1周后開場觀察培養(yǎng)基外表菌落生長情況。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3結(jié)果3.1薄層鑒別結(jié)果如圖1所示。a展開劑：環(huán)己烷氯仿醋酸乙酯冰醋酸20580.5b展開劑：氯仿：甲醇水730.5；展開劑：醋酸乙酯乙醇41圖1夏枯草、積雪草和筋骨草提取物薄層鑒別圖譜略夏枯草和積雪草提取物的TL鑒別采用?中國藥典?2提供的方法，圖1a結(jié)果可見夏枯草醇提物中存在與對照品熊果酸一樣紫色斑點，夏枯草的水提物極性較大在此弱極性的展開條件下幾乎沒有位移，也無熊果酸類低極性成分存在。

9、圖1b可見積雪草提物中存在著積雪草苷對應(yīng)的斑點。圖1筋骨草醇提物與藥材對應(yīng)位置有一樣的綠色斑點。3.2抗菌實驗結(jié)果如表1所示。表14種中藥體外抗結(jié)核桿菌試驗菌落生長情況觀察表略“-表示無結(jié)核桿菌生長；“+表示肉眼可見菌落生長，其中+號的多少反映出菌落相對生長的多少。其余低濃度樣品同空白對照組一樣，均無抗菌活性，未在表中列出由表1可見，空白對照組的培養(yǎng)基外表3周后即長滿結(jié)核桿菌，陽性對照組利福平5g/l連續(xù)5周的培養(yǎng)，培養(yǎng)基外表仍光滑，無結(jié)核桿菌生長。夏枯草的水提經(jīng)過20%乙醇沉淀后的提取物4周內(nèi)無菌生長，但第5周開場結(jié)核菌開場生長。夏枯草醇提物，連續(xù)5周培養(yǎng)基外表均無結(jié)核桿菌生長。積雪草苷片、

10、筋骨草提物、青蒿素和二氫青蒿素在所研究劑量下，3周后同空白對照組一樣，培養(yǎng)基外表結(jié)核桿菌均明顯生長。4討論我國傳統(tǒng)中醫(yī)藥抗結(jié)核治療已有2000多年的歷史了。夏枯草、積雪草和筋骨草在傳統(tǒng)中醫(yī)藥學中均可用于肺結(jié)核病的治療。?中藥大辭典?中記載3，夏枯草水煎劑對小鼠實驗性結(jié)核病，能使肺部病變減輕；積雪草苷具有治療皮膚結(jié)核和麻風病等的作用；筋骨草配伍其他中藥對肺結(jié)核的肺熱咯血病癥有較好的療效。桂曉紅等4采用蘇通氏培養(yǎng)基進展研究也發(fā)現(xiàn)夏枯草水煎劑有體外抗結(jié)核桿菌的作用。而本實驗中夏枯草水提物雖有一定的抑制結(jié)核分枝桿菌生長的作用，但其乙醇提取物表現(xiàn)出更明顯抑菌活性，說明夏枯草中可能不僅存在著水溶性的抗結(jié)核的成分，另外還有些極性小的成分具有協(xié)同抑制結(jié)核桿菌的效果，應(yīng)該引起重視。我們的研究發(fā)現(xiàn)積雪草的醇提物有微弱的抑制H37RV的活性，但是以積雪草苷為主要成分的積雪草苷片卻無抑菌活性，說明積雪草抑制結(jié)核桿菌的作用可能不是積雪草苷的作用，有關(guān)的實驗需進一步驗證。而筋骨草的醇提物在所研究的劑量條件下體外無抗結(jié)核桿菌的作用。另外，我們還選擇了抗菌效果較好的青蒿素和二氫青蒿素用于抗結(jié)核分枝桿菌的挑選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)所給劑量無抑制結(jié)核分枝桿菌H37RV的活性。參考文獻：1趙奎君，徐國鈞，金蓉鸞,等.狼毒類中藥對結(jié)核桿菌抗菌作用的比擬J.