微生物真菌專題知識講座

1、微生物真菌專題知識講座微生物真菌專題知識講座第1頁2 概 念真菌(fungus)是一類含有經典細胞核，有核膜和核仁，胞漿內有完整細胞器，無根、莖、葉，不含葉綠素，無光合色素，細胞壁含幾丁質和纖維素單細胞或多細胞異養(yǎng)真核細胞型微生物。微生物真菌專題知識講座第2頁真菌概念真菌(fungus)：真核細胞型微生物含有經典細胞結構（細胞核、細胞器、細胞壁）無根、莖、葉，不含葉綠素細胞壁含幾丁質和（或）纖維素以腐生或寄生方式攝取養(yǎng)料能進行有性生殖和（或）無性繁殖生長遲緩微生物真菌專題知識講座第3頁4 概 念真菌分布廣泛，種類繁多，大多數無害，甚至有利。有些真菌也是造成動植物病害病原，與醫(yī)學相關約數百種，少

2、數真菌能夠引發(fā)人類感染性、中毒性及變態(tài)反應性疾病。多年來，因為抗菌藥品廣泛應用和或應用激素、抗癌藥品造成機體免疫功效降低等原因，機會致病真菌感染也顯著增多。微生物真菌專題知識講座第4頁原核細胞型微生物與真核細胞型微生物比較 原核細胞型微生物真核細胞型微生物 細胞核結構核膜 無 有核仁 無 有分裂方式 主要以二分裂 有絲分裂，減數分裂細胞質結構細胞膜 常缺乏固醇 常有固醇 細胞壁 含肽聚糖 含幾丁質和（或）纖維素細胞器 較簡單，有中介體 復雜，有內質網和高爾基體核糖體 70S 80S 呼吸系統(tǒng) 質膜或中介體 線粒體 微生物真菌專題知識講座第5頁 第一節(jié) 分 類真菌分類主要依據為：有性生殖各種器官

3、 無性菌絲和孢子及菌落形態(tài)等特征 大多數學者認為真菌應作為一個獨立界真菌界，并曾將真菌分為兩個門，即黏菌門和真菌門,真菌門又依據其生物學性狀等傳統(tǒng)地分為五個亞門。最新真菌分類是把真菌界分為四個門。微生物真菌專題知識講座第6頁分 類真菌門：5個亞門（傳統(tǒng)） 鞭毛菌亞門 接合菌亞門 子囊菌亞門 擔子菌亞門 半知菌亞門（醫(yī)學相關： 后4個亞門）最新分類：真菌界：4個門： 接合菌門 擔子菌門 子囊菌門 壺菌門微生物真菌專題知識講座第7頁第二節(jié) 基礎特征一、形態(tài)特征真菌比細菌大，用普通光學顯微鏡低倍或高倍鏡就可見。真菌菌體外有一層堅硬細胞壁；其細胞膜含固醇而細菌無。按形態(tài)可將真菌分為單細胞和多細胞兩類。

4、微生物真菌專題知識講座第8頁第二節(jié) 基礎特征一、形態(tài)特征單細胞真菌： 圓形或卵圓形，常見于酵母菌或類酵母菌多細胞真菌： 菌絲+孢子 交織成團菌絲體（霉菌） 二相性真菌： 37呈酵母型，25呈絲狀型真菌微生物真菌專題知識講座第9頁單細胞真菌 形態(tài)：圓形或橢圓形，如酵母型和類酵母型真菌。（1）酵母型真菌：有孢子，無菌絲 菌絲：無 繁殖方式：從母細胞芽生 菌落形態(tài)：與細菌相同 微生物真菌專題知識講座第10頁芽生孢子微生物真菌專題知識講座第11頁酵母菌在培養(yǎng)基上菌落形態(tài)微生物真菌專題知識講座第12頁單細胞真菌（2）類酵母型真菌：芽生孢子與假菌絲 菌絲：假菌絲 假 菌 絲：長芽體可伸進培養(yǎng)基內 繁殖方式

5、：從母細胞芽生 菌落形態(tài)：與酵母型相同，由假菌絲聯結成假菌絲體，稱為類酵母型菌落微生物真菌專題知識講座第13頁假菌絲假菌絲：類酵母菌進行出芽生殖時，子母細胞不馬上分離而以狹小面積相連，這種藕節(jié)狀細胞串為假菌絲。 假菌絲與真菌絲顯著不一樣處在于其兩細胞間有一細腰，而不象真正菌絲橫隔處兩細胞寬度一致。 微生物真菌專題知識講座第14頁微生物真菌專題知識講座第15頁微生物真菌專題知識講座第16頁多細胞真菌 由菌絲和孢子兩大個別組成 1.菌絲 (hypha) 2.孢子 (spore)微生物真菌專題知識講座第17頁18（一）菌絲（hypha)真菌在適宜環(huán)境中，由孢子出芽長出芽管，逐步延長呈絲狀，稱為菌絲（

6、hypha）。菌絲繼續(xù)分支，交織成團，稱菌絲體（mycelium）。菌絲分為營養(yǎng)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲中能形成孢子叫做生殖菌絲。有些真菌菌絲含有隔膜，叫有隔菌絲；有些真菌菌絲無隔膜，叫無隔菌絲。微生物真菌專題知識講座第18頁不一樣形態(tài)菌絲含有判別意義(1) 單純菌絲 細長管狀組織，有粗有細分枝或不分枝，有隔或無隔，有色或無色。(2) 球拍狀菌絲 菌絲在隔膜部位一端膨大球拍狀，排列規(guī)整。(3) 破梳狀菌絲 菌絲一側有不規(guī)則梳齒狀凸起，梳齒參差不齊如破梳狀。(4) 螺旋狀菌絲 菌絲呈彈簧狀，有規(guī)律性旋轉狀生長。(5) 結節(jié)狀菌絲 稍膨大側枝細胞、菌絲端細胞或中間性細胞彎曲成團，互纏成結。(6)

7、鹿角狀菌絲 菌絲頂端呈不規(guī)則分枝，狀如鹿角。微生物真菌專題知識講座第19頁微生物真菌專題知識講座第20頁微生物真菌專題知識講座第21頁22（二）孢子(spore)孢子（spore）是真菌繁殖結構。孢子分有性與無性兩類。孢子與細菌芽胞不一樣。 真菌孢子 細菌芽胞抵抗力不強，6070短時間即死強，煮沸短時間不死數目一條菌絲可產生多個孢子一個細菌體只形成一個芽胞作用為繁殖方式之一不是繁殖方式形狀形狀各種多樣圓形或橢圓形真菌孢子與細菌芽胞區(qū)分微生物真菌專題知識講座第22頁二相真菌：一些真菌可因寄生環(huán)境及培養(yǎng)條件（營養(yǎng)、溫度、氧氣等）不一樣而交替形成兩種形態(tài)，即在室溫中呈霉菌型，在37攝氏度或體內呈單細

8、胞酵母型，這類真菌有雙向性，所以稱之為雙態(tài)真菌或二相真菌。如球孢子菌、組織胞漿菌及芽生菌。二相真菌微生物真菌專題知識講座第23頁二相真菌機體內寄生37單細胞型：多細胞型：含動物蛋白培養(yǎng)基酵母菌沙保氏培養(yǎng)基25普通培養(yǎng)基25絲狀菌微生物真菌專題知識講座第24頁孢子 (spore)孢子是生殖結構，由生殖菌絲產生。是判定和分類依據。 (1) 無性孢子 不經過兩性細胞配合而產生 ，菌絲上細胞分化或出芽生成，病原性真菌大多形成無性孢子。 (2) 有性孢子同一菌體或不一樣菌體上2個細胞融合經減數分裂形成。絕大多數為非致病性真菌所含有。微生物真菌專題知識講座第25頁26無性孢子分為：分生孢子：大分生孢子小分

9、生孢子葉狀孢子：芽生孢子關節(jié)孢子厚膜孢子孢子囊孢子有性孢子分為：卵孢子、接合孢子、子囊孢子及擔孢子（二）孢子(spore)微生物真菌專題知識講座第26頁無性孢子1) 葉狀孢子 由菌絲細胞直接形成 芽生孢子 經過發(fā)芽方式形成圓形或卵形細胞 關節(jié)孢子 由菌絲分化成長方形幾個節(jié)段，胞壁稍厚 厚膜孢子 是一個休眠細胞，條件適宜可再發(fā)芽微生物真菌專題知識講座第27頁微生物真菌專題知識講座第28頁2) 分生孢子 常見一個無性孢子形狀、大小、結構、顏色等：分類、判定 大分生孢子 體積較大，多細胞性。孢子呈紡錘形，棍棒狀等。 小分生孢子 體積小，單細胞性，外壁薄，球形、卵形、梨形以及棍棒狀等。無性孢子微生物真

10、菌專題知識講座第29頁微生物真菌專題知識講座第30頁生殖菌絲末端細胞分裂或收縮形成；也可從菌絲側面出芽形成大分生孢子形態(tài)微生物真菌專題知識講座第31頁3) 孢 (子) 囊孢子由絲末端形成一個囊狀結構（孢子囊），內有許多孢囊孢子。 無性孢子微生物真菌專題知識講座第32頁多細胞真菌形態(tài)微生物真菌專題知識講座第33頁微生物真菌專題知識講座第34頁真菌孢子和細菌芽胞區(qū)分真菌孢子細菌芽胞抵抗力不強，60-70短時間殺死強，煮沸短時間不死數目一條菌絲可產生多個孢子一個細菌體只形成一個芽孢作用為繁殖方式之一不是繁殖方式形成位置可在細胞內外形成只在細菌細胞內形成形狀形態(tài)、色澤多樣圓形或橢圓形微生物真菌專題知識

11、講座第35頁繁殖與培養(yǎng) 真菌繁殖方式依靠孢子及菌絲進行繁殖:有性繁殖 無性繁殖無性繁殖 1.芽生: 酵母菌及酵母樣真菌 2.裂殖: 以二分裂法進行繁殖 3.萌管: 萌發(fā)芽管，芽管伸延后形成菌絲 4.隔殖: 在分生孢子梗某一段落形成一隔膜，隨之原生質濃縮而形成一個新孢子。孢子可再獨立繁殖。 微生物真菌專題知識講座第36頁真菌培養(yǎng)特征 真菌營養(yǎng)要求不高 常見沙保培養(yǎng)基 ：蛋白胨、葡萄糖、氯化鈉和瓊脂。 溫度：2228，但一些深部感染真菌為37。 pH：4.06.0 生長速度:較慢“三低兩高”微生物真菌專題知識講座第37頁常見培養(yǎng)基沙氏瓊脂培養(yǎng)基Sabourauds Agar蛋白胨 10.g葡萄糖

12、40.0g瓊脂 20.0gpH值5.60.2 蛋白胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源；瓊脂是培養(yǎng)基凝固劑。 微生物真菌專題知識講座第38頁馬丁氏(Martin)培養(yǎng)基(分離真菌用)配方KH2PO4 1gMgSO4 7H2O 0.5g 蛋白胨 5g葡萄糖 10g瓊脂 15-20g水 1000mLpH 自然此培養(yǎng)液1000mL加1%孟加拉紅1%水溶液3.3mL.臨用時每100mL培養(yǎng)基中加入1%鏈霉素液0.3mL. 微生物真菌專題知識講座第39頁基礎原理葡萄糖主要作為碳源,蛋白胨主要作為氮源,KH2PO4和MgSO4 7H2O作為無機鹽,為微生物提供鉀,磷,鎂離子.而孟加拉紅和鏈霉素主要是細菌和放線

13、菌抑制劑,對真菌無抑制作用,因而真菌在這種培養(yǎng)基上能夠到達優(yōu)勢生長,從而到達分離真菌目標.微生物真菌專題知識講座第40頁察氏瓊脂Czapek Dox Agar硝酸鈉磷酸氫二鉀硫酸鎂氯化鉀硫酸亞鐵蔗糖瓊脂 3.01.00.50.50.0130.015.0 原理： 硝酸鈉提供氮源；磷酸氫二鉀是緩沖劑； 硫酸鎂、氯化鉀、硫酸亞鐵提供必須離子； 蔗糖提供碳源；瓊脂是培養(yǎng)基凝固劑。用途：用于青霉,曲霉判定及保留菌種用(GB標準)微生物真菌專題知識講座第41頁孟加拉紅培養(yǎng)基（虎紅培養(yǎng)基）Rose Bengal Medium蛋白胨 葡萄糖磷酸二氫鉀硫酸鎂(無水)瓊脂孟加拉紅氯霉素 5.010.01.00.5

14、20.00.0330.1 微生物真菌專題知識講座第42頁原理：蛋白胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源；磷酸二氫鉀為緩沖劑；硫酸鎂提供必須微量元素；瓊脂是培養(yǎng)基凝固劑；氯霉素可抑制細菌生長；孟加拉紅作為選擇性抑菌劑可抑制細菌生長，并可減緩一些霉菌因生長過快而造成菌落漫延生長。 微生物真菌專題知識講座第43頁在沙保培養(yǎng)基上， 3種類型菌落： 1.酵母型菌落 ：菌落柔軟、光滑、濕潤。鏡下可見單細胞性芽生孢子，無菌絲。隱球菌菌落 2.類酵母型菌落（酵母樣菌落） ：和酵母型菌落相同，鏡下可見假菌絲。白色念珠菌菌落 3.絲狀型菌落 ：由多細胞菌絲體組成絮狀菌落（一個別向空中生長，并形成孢子）。絲狀真菌或霉菌

15、菌落。 (菌落較大)真菌培養(yǎng)特征微生物真菌專題知識講座第44頁微生物真菌專題知識講座第45頁赭曲霉微生物真菌專題知識講座第46頁鐮刀菌及其大分生孢子微生物真菌專題知識講座第47頁黃曲霉菌落形態(tài)微生物真菌專題知識講座第48頁黃曲霉鏡下特征微生物真菌專題知識講座第49頁青霉菌菌落形態(tài)微生物真菌專題知識講座第50頁青霉菌鏡下形態(tài)微生物真菌專題知識講座第51頁鐮刀菌菌落形態(tài)微生物真菌專題知識講座第52頁鐮刀菌鏡下特征微生物真菌專題知識講座第53頁變異與抵抗力變異性 屢次傳代或孵育過久，輕易變異（形態(tài)、結構、菌落性狀、色素以及生理性狀 (毒力)改變。 抵抗力 熱：不強。孢子普通60經1h即被殺滅（不一樣

16、于芽胞）。 干燥、日光、紫外線及各種化學藥品：耐受性較強。 1%3%石碳酸、2.5%碘酊、0.1%升汞及10甲醛液：較敏感。 微生物真菌專題知識講座第54頁55三、 致病性致病物質： 細胞壁糖蛋白（有內毒素樣活性）、毒素、莢膜等。致病方式： 病原性真菌感染（主要是外源性真菌感染） 條件致病性真菌感染（主要是內源性真菌） 真菌變態(tài)反應性疾?。ㄆぱ?、哮喘等） 真菌性中毒（毒素引發(fā)） 真菌毒素與腫瘤關系（黃曲霉毒素等）微生物真菌專題知識講座第55頁真菌性感染 真菌病 (mycoses)： 由真菌引發(fā)感染并表現臨床癥狀者 真菌致病力比細菌弱 致病性真菌、條件致病性真菌原發(fā)性感染： 球孢子菌(Cocci

17、diodes)、 皮炎芽生菌 (Blastomyoes dermatitidis)、 組織胞漿菌(Histoplasma)等繼發(fā)性感染： 機體防御機能顯著低下時。 致病機理：真菌粘附能力，對免疫系統(tǒng)功效抑制，胞壁中酶類微生物真菌專題知識講座第56頁真菌性超敏反應 按性質分：感染性超敏反應：感染后, 型接觸性超敏反應： 吸入或食入, 型按部位分: 皮膚超敏反應: 皮炎、濕疹、蕁麻疹、瘙癢癥等呼吸道超敏反應: 支氣管哮喘以及過敏性鼻炎消化道超敏反應 微生物真菌專題知識講座第57頁真菌毒素中毒 農作物、食物或飼料上表現: 1. 肝、腎、神經、造血系統(tǒng)損傷 2. 致癌性: 黃曲霉毒素,等 （原發(fā)性肝癌

18、）微生物真菌專題知識講座第58頁 免疫力不強，不能形成穩(wěn)固病后免疫 1. 抗體作用 2. 細胞免疫及超敏反應 免 疫 性 微生物真菌專題知識講座第59頁微生物學檢驗法 取材：淺部：鱗屑、病發(fā)或甲屑 深部：分泌物、排泄物、體液、 痰液及血液直接鏡檢： 粘稠或含角質標本:先加10%KOH，加溫后鏡檢 液體標本：離心后鏡檢培養(yǎng)： 含抗生素沙保弱培養(yǎng)基 25 (絲狀真菌) 37 (酵母型真菌) 微生物真菌專題知識講座第60頁3.菌種判定(1)絲狀真菌：依據菌落形成所需要時間，在不一樣條件下生長情況，菌落表面及后面形態(tài)、色素，培養(yǎng)基中有沒有色素，培養(yǎng)物用乳酚棉藍染色后鏡檢找特征性標志結構。主要是形態(tài)學判

19、定，如直接涂片觀察，小培養(yǎng)顯微鏡判定， 微生物真菌專題知識講座第61頁毛霉 根霉 梨頭霉 微生物真菌專題知識講座第62頁微生物真菌專題知識講座第63頁微生物真菌專題知識講座第64頁微生物真菌專題知識講座第65頁微生物真菌專題知識講座第66頁曲霉結構圖微生物真菌專題知識講座第67頁煙曲霉菌落煙曲霉,光鏡 X400微生物真菌專題知識講座第68頁黃曲霉菌落黃曲霉,光鏡 X200 微生物真菌專題知識講座第69頁黃曲霉鏡下特征微生物真菌專題知識講座第70頁黑曲霉菌落 黑曲霉,光鏡 X200微生物真菌專題知識講座第71頁土曲霉菌落 土曲霉，光鏡 X200 微生物真菌專題知識講座第72頁構巢曲霉菌落 構巢曲

20、霉,光鏡 X400微生物真菌專題知識講座第73頁雜色曲霉菌落雜色曲霉,光鏡 X400微生物真菌專題知識講座第74頁青霉菌菌落形態(tài)微生物真菌專題知識講座第75頁青霉菌鏡下形態(tài)微生物真菌專題知識講座第76頁鐮刀菌菌落形態(tài)微生物真菌專題知識講座第77頁鐮刀菌鏡下特征微生物真菌專題知識講座第78頁2)酵母菌判定：形態(tài)學判定主要觀察有沒有假菌絲產生，如有則為念珠菌屬，如無則為念珠菌以外酵母菌;玉米吐溫誘導下特征菌絲及特征孢子檢驗，血清芽管形成在形態(tài)學基礎上還必須進行生化判定：有標準判定，自動儀器判定，顯色判定，其中，自動儀器判定(如API20C，ID32C等)，顯色判定對于酵母樣真菌判定，特點是快速簡便;微生物真菌專題知識講座第79頁標準判定是按傳統(tǒng)雙歧表流程判定(包含糖同化試驗，糖發(fā)酵試驗，CAFC酚氧化酶試驗，尿酶試驗，KNO3同化試驗，脂肪酸需求試驗)，是真菌判定金標準，系統(tǒng)準確，缺點是程序繁瑣，耗時長，與臨床治療不太適應。血清學玻片凝集試驗，動物致病性試驗，微生物真菌專題知識講座第80頁血清學方法檢測真菌抗原成份 念珠菌感染和曲霉感染血清學檢測可分為抗體檢測和抗原檢測兩大類；因為發(fā)