臨床生物化學(xué)檢驗實驗：實驗六 碘－淀粉比色法測定血清淀粉酶

1、1實 驗 五碘淀粉比色法測定血清淀粉酶 2實驗?zāi)康?掌握：碘淀粉比色法測定AMY的原理熟悉：碘淀粉比色法測AMY的操作了解：AMY測定的方法進展3 血清淀粉酶概述淀粉酶（AMY）又稱1,4葡聚糖水解酶，作用于多糖分子的1,4糖苷鍵，生成麥芽糖和葡萄糖。主要存在于胰腺、唾液腺及其分泌液中。對于食物中的多糖物質(zhì)消化起到重要的作用。血清淀粉酶主要有兩種同工酶，同工酶P來自胰腺，同工酶S來自唾液等組織。血清淀粉酶增高對于急性胰腺炎有診斷價值，也常用于急性胰腺炎和急腹癥的鑒別診斷。而淀粉酶同工酶的測定比總酶有著更好的診斷靈敏度和特異性。4 方法概述測定方法分類，大致可以分為粘度測量法、比濁法、碘量法、糖

2、化法和染料釋放法。以天然淀粉為底物的測定方法 早期的一種方法，共同缺點是天然淀粉缺乏統(tǒng)一明確的分子結(jié)構(gòu)和化學(xué)性質(zhì)，因此難以達到方法學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化，測定的準(zhǔn)確性和重復(fù)性較差，但因方法簡單易行，尚有應(yīng)用于基層醫(yī)院手工測定 。以人工合成的麥芽寡糖苷為底物的方法。 這類底物的結(jié)構(gòu)和分子量確定，溶解度好可以配制較高濃度，使酶反應(yīng)初速度達到最大速度，滿足零級反應(yīng)的要求。這類方法均適合自動化分析，分析速度快，精密度高，酶的活性可以國際單位表達，目前幾乎已完全取代了天然淀粉為底物的方法。 IFCC推薦方法是對硝基麥芽庚糖苷法（4NP-G7法）對-硝基苯麥芽庚糖苷(4-nitrophenyl-malto-heptao

3、side，4NP-G7)為底物，經(jīng)-淀粉酶催化，水解為游離的寡糖(G5，G4，G3)及葡萄糖殘基減少的對-硝基苯寡糖苷(4NP-G2，4NP-G3，4NP-G4)。4NP-G2、4NP-G3及部分4NP-G4，在-葡萄糖苷酶催化下，進一步水解為葡萄糖和對-硝基酚對-硝基苯麥芽庚糖苷法了解7碘比色法實驗原理 淀粉經(jīng)-淀粉酶(-1.4糖苷健)催化，水解為麥芽糖,及葡萄糖,-1.6糖苷健的糊精。在底物過量的前提下,反應(yīng)后加入碘液,與未反應(yīng)的淀粉結(jié)合生成蘭色化合物,淀粉消耗量在一定范圍內(nèi)與-淀粉酶活性呈正比。8試劑與器材 1、0.4g/L緩沖淀粉溶液 成分及作用：可溶性淀粉（底物）；磷酸氫二鈉和磷酸二

4、氫鉀（緩沖液），氯化鈉（淀粉酶的激活劑）；甲醛（防腐劑）。2、0.1mol/L碘儲存液 碘酸鉀和碘化鉀（提供顯色反應(yīng)的碘）；濃鹽酸（穩(wěn)定劑）3、0.01mol/L碘應(yīng)用液9加入物(ml) 空白管測定管1（重復(fù)兩次） 測定管2緩沖淀粉溶液 1.0 （37預(yù)溫5min） 1.0血清或稀釋唾液 -0.02立即混勻，置37水浴保溫7.5min（準(zhǔn)確）碘應(yīng)用液 1.0 1.0 去離子水 6.0 6.0充分混勻，以波長660nm，去離子水調(diào)吸光度零點，讀取各管吸光度值。測定管2：在試管里留取一份唾液（口水），首先稀釋100-500倍。操作步驟 10計算 其中：（空白管A測定管A）/空白管A 底物消耗比率0

5、.4/5 （1ml緩沖淀粉溶液中淀粉含量0.4mg）相當(dāng)于多少個活性單位15/7.5 反應(yīng)時間折算100/0.02 血清用量折算單位定義：100ml血清中的淀粉酶，在3715min水解5mg淀粉為1個單位。11 血清AMY: 血清 80180U； 尿液 1001200U。參考范圍 12 臨床上主要用于急性胰腺炎的診斷（胰腺組織病變損傷），發(fā)病后血清中AMY首先增高，1224小時到達峰值，25天下降至正常。 發(fā)病后尿液AMY升高比血清晚，從1224小時開始升高，下降也比血清緩慢。 在發(fā)病12小時內(nèi)，測定血清AMY，后期測定尿AMY更有價值。 流行性腮腺炎AMY也會大量升高。臨床意義 131、AMY活性在400U以下時，與底物的水解成良好的線性。如果結(jié)果超過400U，或測定管吸光度小于空白管吸光度一半時，應(yīng)加大標(biāo)本稀釋倍數(shù)或減少稀釋血清加入量，結(jié)果乘上稀釋倍數(shù)。注意事項142、使用血清標(biāo)本，或以肝素抗凝。草酸鹽、枸櫞酸鹽、EDTA2Na、氟化鈉抗凝劑對AMY活性有抑制作用。3、防止唾液污染。4、本方法可以用于其它體液的AMY測定，如胸水和腹水，尿液AMY測定應(yīng)做20倍稀釋。 方法線性：400U； 精密度：批內(nèi)CV 39，批間1215