免疫學實驗：免疫電泳

1、實驗課要求1、不考試，實驗報告80%+平時成績20%2、報告內容：實驗原理，實驗材料與儀器，實驗方法，實驗結果，討論與分析3、圖：鉛筆，標題在下，要有必要的圖釋， 彩圖會加分 表：鉛筆，標題在上免疫學 實驗二1、示教：單向擴散、雙向擴散、免疫電泳、火箭電泳2、操作：對流免疫電泳顆粒性抗原（如完整的細胞、細菌）與相應抗體以合適的比例發(fā)生特異性反應時，在一定溫度和電解質存在的條件下，形成肉眼可見的凝集物，稱為凝集反應(agglutination)?？扇苄钥乖ㄈ绲鞍踪|、多糖等）與相應抗體以合適的比例發(fā)生特異性反應時，在一定溫度和電解質存在的條件下，形成肉眼可見的沉淀物，稱為沉淀反應。凝集反應分類

2、單向免疫擴散試驗:在抗原抗體反應時，只有其中的一種成分發(fā)生擴散 雙向免疫擴散試驗:抗原和抗體在瓊脂內各自向對方擴散，在最恰當?shù)谋壤帲纬煽乖贵w沉淀線火箭免疫電泳:將單向免疫擴散和電泳相結合的一種定量檢測技術對流免疫電泳試驗:將雙向免疫擴散與電泳相結合的定向加速的免疫擴散技術沉淀反應總結 單向 火箭免疫電泳 免疫擴散 雙向 對流免疫電泳+電泳 +電泳 1、單向擴散 在含有特異抗體的瓊脂板中打孔，并在孔中加入定量的抗原，當抗原向周圍擴散后與瓊脂中抗體相結合，即形成白色沉淀環(huán)，其直徑或面積與抗原濃度呈正相關。將一定量的抗體混合于瓊脂內，傾注于玻片上，凝固后打孔在孔中加入定量的抗原，使可溶性抗原在

3、半固體瓊脂介質中向四周擴散觀察抗原抗體在比例合適處形成白色沉淀環(huán)量取沉淀環(huán)的直徑，通過抗原標準品，計算待測抗原的濃度大小實驗步驟：意義：主要用于檢測正常人群或患者血清免疫球蛋白水平的定量測定。 2、 雙向擴散雙向免疫瓊脂擴散 是指可溶性抗原與相應抗體在半固體瓊脂介質中相互擴散，彼此相遇后形成一定類型的特異性沉淀線。 實驗結果：1融合性沉淀孤，說明兩孔中抗原相同，為同一性反應2兩沉淀線獨自形成并交叉，說明兩孔中的抗原完全不同，為非同一性反應3. 融合性沉淀弧出現(xiàn)支線，或同時有另一條或兩條沉淀線，說明兩孔中抗原有相同成分又有不同成分，此為部分同一性反應實驗意義： 通過沉淀線的不同來鑒定抗原或者抗體

4、之間是否相同。 3、火箭電泳是將單向擴散與電泳技術相結合的一種方法。實驗原理：1、電泳時，含于瓊脂凝膠中的抗體不發(fā)生移動，而在電場作用下促使樣品孔中的抗原向陽極泳動。2、當抗原與抗體分子達到適當比例時，形成一個狀如火箭的不溶性免疫復合物沉淀峰。3、峰的高度與檢樣中的抗原濃度呈正相關。4、當瓊脂中抗體濃度固定時，根據(jù)樣品的沉淀峰長度即可計算出待檢抗原的含量。 實驗意義：根據(jù)檢測樣品沉淀峰的高度可算出待測抗原的含量用于測定抗血清效價以及分析特異性抗體4、免疫電泳免疫電泳法 是一種將凝膠電泳與雙向免疫擴散兩種技術相結合的實驗方法。在電場作用下，標本中各組分因電泳遷移率不同而分成區(qū)帶，然后沿電泳平行方

5、向將凝膠挖一溝槽，將抗體加入溝槽內，使抗原與抗體相互擴散而形成沉淀線。 5、對流免疫電泳是一種將雙向瓊脂擴散和電泳技術結合在一起的方法。實驗原理：1、大多數(shù)抗原為蛋白質，在堿性環(huán)境下帶負電，電泳時從負極向正極移動；抗體屬球蛋白，所帶的負電少，相對分子質量較大，電泳力小，在電場中的電滲作用下，由正極向負極移動。2、 AgAb定向對流，發(fā)生反應，短時間內出現(xiàn)肉眼可見的沉淀線。根據(jù)沉淀線的數(shù)量、位置，分析標本中所含抗原的性質。實驗意義：由于電泳的作用，不僅幫助抗體定向移動，因而加速了反應的出現(xiàn)，而且也限制了瓊脂擴散時，抗原抗體向四周自由擴散的傾向，因而提高了敏感性，本法比瓊脂擴散法的靈敏度要高101

6、6倍，而且反應時間短，可用于各種蛋白的定性和半定量測定。材料與儀器抗原 (Ag): HBsAg抗體 (Ab):抗HBsAg免疫血清 待測血清, 生理鹽水 (陰性對照)巴比妥緩沖液(pH8.6),1%離子瓊脂其它：電泳儀,載玻片,打孔器,移液器等實驗方法 1將融化的1離子瓊脂4-5ml傾注于玻片上制成瓊脂板 2待瓊脂板冷卻凝固后，按照打孔模板用打孔器打孔，并用微量加樣器加樣，各孔中加入各樣本10l 3將瓊脂板置于電泳槽內，注意加抗原標本的一側應放負極，并將已浸透緩沖液的濾紙一端覆蓋于瓊脂板兩側各約0.5cm，另一端浸于電泳液中 4接通電源，電壓、電流及電泳時間應視儀器性能而定。一般地，電壓6 Vcm，電流每板20mA，泳動時間12h 5電泳完畢，關閉電源，取出瓊脂板，觀察結果實驗結果與分析： 根據(jù)沉淀線的位置，參照陽性對照，判斷結果?？赡艹霈F(xiàn)的情況，各種合理的沉淀線意義。陰性對照不應出現(xiàn)沉淀線，否則實驗無效。檢測試劑應用免疫層析雙抗體夾心法原理，制成HCG檢測試紙，可在3分鐘內測定尿液標本中的HCG。檢測時，當被檢尿樣虹吸通過膠體金標記