常見感染性腹瀉的實驗室診斷

1、常見感染性腹瀉的實驗室診斷腹瀉是消化系統(tǒng)常見的癥狀，由感染（細(xì)菌、病毒、寄生蟲等微生物）引起的腹瀉稱為感染性腹瀉。引起腹瀉的病原種類很多，細(xì)菌性的主要有霍亂弧菌、致瀉性大腸桿菌、空腸彎曲菌，耶爾森氏菌等，病毒性的有輪狀病毒、諾瓦克病毒、腸腺病毒等，以細(xì)菌性感染為主(城市57.6%，農(nóng)村占64.9%）。簡 介霍 亂 弧 菌 霍亂弧菌包括兩個生物型：古典生物型和埃爾托生物型。 1992年發(fā)現(xiàn)了一個引起霍亂流行的新血清型菌株（0139）。 一、生物學(xué)性狀 （一）形態(tài)與培養(yǎng)特性：革蘭氏陰性菌，菌體彎曲呈弧狀或逗點狀，菌體一端有單根鞭毛和菌毛，無莢膜與芽胞?；罹鷳业斡^察，可見細(xì)菌運(yùn)動極為活潑，呈流星穿梭

2、運(yùn)動。營養(yǎng)要求不高，在PH8.89.0的堿性蛋白胨水或平板中生長良好。 （二）抗原性：根據(jù)弧菌O抗原不同，分成個血清群，第群包括霍亂弧菌的兩個生物型。第群A、B、C三種抗原成份可將霍亂弧菌分為三個血清型：含AC者為原型（又稱稻葉型），含AB者為異型（又稱小川型），A、B、C均有者稱中間型（彥島型）。 (三）抵抗力：霍亂弧菌古典生物型對外環(huán)境抵抗力較弱，EL-Tor生物型抵抗力較強(qiáng)，在河水、井水、海水中可存活13周，在鮮魚，貝殼類食物上存活12周。 三、微生物學(xué)診斷（一）直接鏡檢（二）細(xì)菌分離培養(yǎng)（三）特異性制動試驗致瀉性大腸桿菌包括致病性大腸桿菌(EPEC)、產(chǎn)毒型大腸桿菌（ETEC）、侵襲型

3、大腸桿菌（ELEC）、出血性大腸桿菌（EHEC）和粘附性大腸桿菌（EAEC）。（1）腸產(chǎn)毒性大腸桿菌（Enterotoxigenic E. coli,ETEC）：引起嬰幼兒和旅游者腹瀉，出現(xiàn)輕度水瀉，也可呈嚴(yán)重的霍亂樣癥狀。腹瀉常為自限性，一般23天即愈。營養(yǎng)不良者可達(dá)數(shù)周，也可反復(fù)發(fā)作。致病因素是LT或ST，或兩者同時致病。有些菌株具有定居因子，常見者為O6：K15：H16、O25：K7：H42。鑒定ETEC主要測定大腸桿菌腸毒素，血清型有一定參考意義。 （2）腸致病性大腸桿菌 （Enteropathogenic E.coli,EPEC）:是嬰兒腹瀉的主要病原菌，有高度傳染性，嚴(yán)重者可致死；

4、成人少見。細(xì)菌侵入腸道后，主要在十二指腸、空腸和回腸上段大量繁殖。切片標(biāo)本中可見細(xì)菌粘附于絨毛，導(dǎo)致刷狀緣破壞、絨毛萎縮、上皮細(xì)胞排列紊亂和功能受損，造成嚴(yán)重腹瀉。EPEC不產(chǎn)生LT或ST。 (3)腸侵襲性大腸桿菌 （Enteroinvasive E.coli,EIEC）:不產(chǎn)生毒素，依靠其特有的侵襲細(xì)胞的能力侵入腸黏膜上皮細(xì)胞，引起類似于福氏志賀氏菌樣的腹瀉。 (4）腸出血性大腸桿菌 （Enterohemorrhagic E.coli,EHEC）:引起散發(fā)性或暴發(fā)性出血性結(jié)腸炎，可產(chǎn)生志賀氏毒素樣細(xì)胞毒素。EHCO的主要菌型是O157：H7，還可有O26等。 （一）生物學(xué)性狀 1形態(tài)與染色：

5、 2培養(yǎng)特性： 3. 抗原特性：含菌體抗原（O）、鞭毛 抗原（H）、莢膜抗原（K）組成 腸出血性大腸桿菌O157：H7的檢驗診斷（一）常規(guī)分離培養(yǎng)方法1標(biāo)本的采集和運(yùn)送2增菌3分離 4玻片凝集試驗 5K抗原的處理 6培養(yǎng)基制備空 腸 彎 曲 菌 彎曲菌最早于1909年自流產(chǎn)的牛、羊體內(nèi)分離出，稱為胎兒弧菌 ，1947年從人體首次分離出該菌。至1957年king把引起兒童腸炎的這種細(xì)菌定名為“相關(guān)弧菌”。1973年Sebald和Veron發(fā)現(xiàn)該菌不發(fā)酵葡萄糖，DNA的組成及含量不同于弧菌屬，為了區(qū)別于弧菌而創(chuàng)用了彎曲菌這一名稱。目前已認(rèn)識其為人類腹瀉的主要致病菌之一?？漳c彎曲菌的發(fā)病率在發(fā)達(dá)國家

6、超過細(xì)菌性痢疾，在發(fā)展中國家?guī)缀醯韧诩?xì)菌性痢疾。一、生物學(xué)性狀（一）形態(tài)與染色 （二）培養(yǎng)特性 （三）生化反應(yīng) （四）抵抗力 （五）抗原構(gòu)造 二、微生物學(xué)檢驗1. 標(biāo)本采集和運(yùn)送 2. 檢驗方法：（1）.直接涂片檢查： （2）.分離培養(yǎng) （3 ）.初步鑒定 （4）. 種和亞種的鑒定三、血清學(xué)檢查：發(fā)病一周后，血清內(nèi)可出現(xiàn)抗體，主要為lgM，可用間接血凝試驗及間接免疫熒光試驗等檢測特異性抗體效價，正常人或帶菌者血清效價可達(dá)1：21：8，急性期病人抗體效價可達(dá)1：81：32，恢復(fù)期可達(dá)1：801：320以上。由于血清抗體效價不高，須采取雙份血清檢測，以效價增高4倍作為診斷依據(jù)。 耶爾森氏菌耶爾森

7、氏菌病，系由小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌引起的一種人與畜共患傳染病。耶爾森氏菌為動物腸道寄生菌，廣泛存在于動物體內(nèi)。本菌在外界環(huán)境(河水、井水、蒸餾水)中不僅可長期生存，而且可以繁殖。本菌有嗜冷性，食品一旦被污染，在冷藏中仍能繼續(xù)繁殖，故該病冬季多發(fā)?，F(xiàn)代文明的“電冰箱腸炎”致病菌，就是人獸共同的耶爾森氏菌。 耶爾森氏菌屬有11個菌種，其中較重要的有3個菌種，即鼠疫耶爾森氏菌、假結(jié)核耶爾森氏菌及小腸結(jié)腸炎耶氏菌。 該菌屬菌體小，球狀或球桿狀。 鼠疫耶爾森氏菌染色時趨向兩極濃染。除鼠疫耶爾森氏菌外，其他菌種有周身鞭毛，在22-29有動力，而在37 則動力消失。在液體培養(yǎng)基表面形成白色薄膜，呈“鐘乳石”狀

8、，此特征有助于鼠疫耶氏菌的鑒別。鼠疫耶氏菌的生化反應(yīng)特點是無動力，不產(chǎn)生尿素，不產(chǎn)生H2S。假結(jié)核耶氏菌的生化特性是25有動力，37無動力，迅速分解尿素，產(chǎn)生H2S。小腸結(jié)腸炎耶氏菌的生化特點是25有動力，37無動力，嗜冷性，在4增菌3周可分離純化，產(chǎn)生尿素，V-P試驗25陽性，37陰性。輪狀病毒 一、生物學(xué)性狀 形態(tài)結(jié)構(gòu) 抗原與分型 病毒培養(yǎng) 抵抗力 二、致病性與免疫性 輪狀病毒胃腸炎是病毒性胃腸炎中最常見的一種。普通輪狀病毒主要侵犯嬰幼兒，而成人腹瀉輪狀病毒則可引起青壯年胃腸炎的暴發(fā)流行人類輪狀病毒感染。常見于6個月2歲的嬰幼兒,主要在冬季流行，一般通過糞-口途徑傳播。一般病例病程35天，

9、可完全恢復(fù)。隱性感染產(chǎn)生特異性抗體。三、微生物學(xué)診斷 傳統(tǒng)的方法是對腹瀉糞便液直接作電鏡或免疫電鏡檢查，但耗時較長，且由于設(shè)備上的限制，較難普遍應(yīng)用。世界衛(wèi)生組織已將ELISA雙抗體夾心法（檢測病毒抗）列為診斷輪狀病毒感染的標(biāo)準(zhǔn)方法，目前國內(nèi)外均有相應(yīng)試劑盒出售。此外核酸電泳和核酸雜交已漸成常規(guī)技術(shù)，在診斷、鑒別診斷及分子流行病學(xué)研究中發(fā)揮重要作用。 諾瓦克病毒 病原學(xué) ： 諾瓦克樣病毒有許多共同特征：直徑2635nm的小圓結(jié)構(gòu)病毒，無包膜；分離自急性胃腸炎病人的糞便；不能在細(xì)胞或組織中培養(yǎng)；基因組為單股正鏈RNA；在Cscl密度梯度中的浮力密度為（1.361.41）g/cm；電鏡下缺乏顯著的形態(tài)學(xué)特征。 實驗室檢測 (一)抗原檢測 、電鏡(EM) 、酶聯(lián)免疫法(ELISA) 、雜交技術(shù)和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR) (二)血清學(xué)檢測 、免疫電鏡法(IEM) 、放免(RIA)和生物素-親和素法 腸 腺 病 毒 腸腺病毒是嬰幼兒腹瀉的重要病原體。