多重免疫組化VS免疫熒光

1、免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescence technique , IF ）又稱熒光抗體技術(shù)，是標(biāo)記免疫 技術(shù)中發(fā)展最早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)技 術(shù)。很早以來就有一些學(xué)者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組 織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。多重免疫組化（mIHC）:主要的技術(shù)原理來自TSA技術(shù)，TSA即酪酰胺信號放大（Tyramide signal amplification）是一類利用辣根過氧化酶（HRP）對靶蛋白或核酸進(jìn)行高密度原位標(biāo) 記的酶學(xué)檢測方法。該技術(shù)可與高性能染料Alexa Fluor、傳統(tǒng)熒光染料和比色檢測系統(tǒng) 相

2、兼容。TSA主要原理是利用酪胺Tyramide的過氧化物酶反應(yīng)（酪胺鹽在HRP催化H202 下形成共價鍵結(jié)合位點(diǎn)），產(chǎn)生大量的酶促產(chǎn)物，該產(chǎn)物能與周圍的蛋白殘基（包括色氨酸、 組氨酸和酪氨酸殘基結(jié)合，這樣在抗原-抗體結(jié)合部位就有大量的生物素沉積，與隨后加入 的StreptavidinHRP/熒光基團(tuán)結(jié)合，經(jīng)幾次這樣的循環(huán)放大，可以結(jié)合大量的酶分子or 熒光基團(tuán)，結(jié)果使其檢測信號得到幾何級放大。mIHC和IP的區(qū)別：多免疫組化血職。免疫熒光（IP）靶點(diǎn)數(shù)量可同時染色7色（含dapi ）一般標(biāo)記三種（含dapi）大于三種效果差一抗種類同一種屬的不同抗體即可滿足要求不同種屬的不同抗體二抗種類不同神屬

3、的不同抗體連接熒光探針的不同種屬二抗染色策略分步染色，多次重復(fù)進(jìn)行免疫組化操作樣本抗原的空間位置 的差異，需要設(shè)計復(fù)雜 的染色策略。樣本/靶 點(diǎn)的差異導(dǎo)致染色策 略的差異，染色過程復(fù)雜、多變?nèi)旧Ч呷旧直媛屎腿旧禺愋?，信號?qiáng)度更強(qiáng)，更 穩(wěn)定,淬滅時間更長，無背景影響，各靶點(diǎn)的信 噪比大大提高，尤其適合組織基于單細(xì)胞的定亮度較弱，容易淬滅，各 種抗體間存在互相影 響，背景較高，對基于量分析單細(xì)胞的定量分析不 利。實(shí)驗(yàn)成本1同一種屬的一抗和抗，價格相對便宜。2簡單的染色策略和無需任何重復(fù)的預(yù)實(shí)驗(yàn)， 即可掌握整個染色技術(shù)，大大縮小了預(yù)實(shí)驗(yàn)的 材料損耗。3 抗和二抗工作濃度更低,單次費(fèi)用更低1不

4、同種屬的抗體價 格存在差異，般種屬 稀少的價格高。2不同種屬的二抗，價 格存在差異，般稀少 的種屬價格高。3尋找合適的染色策 略，復(fù)雜的多次重復(fù)的 預(yù)實(shí)驗(yàn)大大的增加了 實(shí)驗(yàn)成本應(yīng)用范圍二抗具備通用性，因此實(shí)驗(yàn)室中所有的研究領(lǐng)域均可使用二抗不具備通用性，實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)用領(lǐng)域受到局限貨號產(chǎn)品名稱abs50012四色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒（鼠兔通用二抗）abs50013五色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒（鼠兔通用二抗）abs50014六色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒（鼠兔通用二抗）abs50015七色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒（鼠兔通用二抗）abs50028四色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒（抗兔二抗）abs50029五色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒