20種抗菌中藥的凝集活性研究

1、20種抗菌中藥的凝集活性研究【摘要】目的比擬常見抗菌中藥的凝集活性。方法選用鹽-磷酸PBS、Tris-Hl、乙酸鈉緩沖溶液提取20種常見抗菌中藥的凝集素，測定各提取液對兔血紅細(xì)胞的凝集作用。結(jié)果20種抗菌中藥用不同pH的浸提液提取后表現(xiàn)不同的凝集活性，在3種不同pH的浸提取液中均具有較高凝集活性的有虎杖、山豆根、黃連、板藍(lán)根。結(jié)論抗菌中藥多數(shù)有較好的凝集活性，PBS對中藥材中凝集素的提取具廣譜性?！娟P(guān)鍵詞】抗菌中藥；凝集素；紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)Abstrat：bjetiveTparetheheagglutinatinativitiesftheextratinsfrantiirbialhinesehe

2、rbs.ethdsTheheagglutinatinativitiesftheextratinsfrPBS,Tris-Hl,NaAetatebufferslutinsf20kindsfantiirbialhineseherbsnrabbiterythryteereeasuredbyHeagglutinatintiters.ResultsTheheagglutinatinativitiesftheseherbserevariusinthethreedifferentbufferslutins;Furtherre,RhizaPlygniuspidati,RadixPuerariae,Rhizapt

3、idisandRadixIsatidishadhighheagglutinatinativitiesinthethreedifferentbufferslutins.nlusinstfantiirbialhinesehavegdheagglutinatinativities;PBSanbeusedidelyfrtheheagglutinatinativitiesftheextratinsfrantiirbialhineseherbs.Keyrds：Antiirbialhineseherbs;Letins;Heagglutinatinativity我國是水產(chǎn)養(yǎng)殖大國，但是水產(chǎn)病害一直是制約水產(chǎn)養(yǎng)

4、殖開展的主要因素。為治療和預(yù)防魚蝦貝類的疾病，人們廣泛使用各種化學(xué)藥物和抗生素。長期用藥，不僅使病原菌的抗藥性越來越明顯，而且藥物殘留和環(huán)境污染日趨嚴(yán)重，生態(tài)養(yǎng)殖和科學(xué)防治成為水產(chǎn)養(yǎng)殖面臨的迫切問題。在長期的養(yǎng)殖活動中，發(fā)現(xiàn)采用中藥如黃連、大黃、板藍(lán)根等可以防治一定的水產(chǎn)病害。這與中藥能進(jìn)步水產(chǎn)動物非特異性免疫才能，調(diào)整機(jī)體新陳代謝，進(jìn)步抗應(yīng)激才能等多種作用有關(guān)1，2。在水產(chǎn)動物中，分為無脊椎動物和脊椎動物。脊椎動物主要行使非特異性免疫與特異性免疫。屬于無脊椎動物的甲殼動物和軟體動物均缺乏免疫球蛋白，主要通過物理屏障、吞噬作用、溶菌作用和凝集作用等去除入侵的病原菌。凝集素(Letin)可以與碳

5、水化合物和糖蛋白結(jié)合,從而使異源細(xì)胞或微生物發(fā)生凝集,或使各種可溶性糖結(jié)合物發(fā)生沉淀,被認(rèn)為是機(jī)體自然防御機(jī)制中的免疫識別和監(jiān)測分子。魚蝦貝類免疫系統(tǒng)不像高等動物那樣完善,凝集素等非特異性免疫因子在其防御病原微生物過程中發(fā)揮著重要的作用36。雖然目前關(guān)于中藥進(jìn)步免疫和抗菌用于水產(chǎn)病蟲害防治的研究較多，但多數(shù)集中在粗提物、小分子和多糖等活性成分711，對于抗菌中藥中的凝集素，如何通過外源途徑進(jìn)步水產(chǎn)動物的防病才能研究報(bào)道極少。鑒于此，本研究選用了3種浸提液提取20種中藥的凝集素，測定這些常見抗菌藥物的提取液對兔血紅細(xì)胞凝集作用的強(qiáng)弱。旨在為研究水產(chǎn)養(yǎng)殖抗菌中藥的抗菌和免疫物質(zhì)根底提供研究思路和數(shù)

6、據(jù)，為抗菌中藥的挑選及水產(chǎn)病蟲害的防治提供實(shí)驗(yàn)根據(jù)。1材料與方法1.1中藥材20種中藥從上海董涵春堂藥店購置，均未炮制處理，切細(xì)或粉碎，過篩，備用。1.2浸提緩沖液鹽磷酸緩沖液(PBS)pH7.2；0.05l/LTris-H11l/LNa1緩沖溶液，pH8.0；0.05l/LNaAetate(乙酸鈉)(1l/LNal)緩沖溶液，pH5.0。1.32紅血球生理鹽水懸液兔紅血球取自上海第二軍醫(yī)大學(xué)所提供的家兔，取兔新穎血液，參加裝有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖數(shù)分鐘或用玻璃棒攪拌，除去纖維蛋白原，用生理鹽水沖洗，離心23次(3000r/in，5in)，至上清液不呈紅色為止。然后根據(jù)紅血球體積用生理鹽水

7、配成2的混懸液。1.4樣品浸提液的制備將20種藥材每份稱重1g，稱取3份，分別參加10l的PBS緩沖液、Tris-H1緩沖液、NaAetate緩沖液浸泡過夜，然后將浸提液離心(10000r/in，5in)，保存?zhèn)溆谩?.5凝集效價(jià)測定12取96孔V型凝集板，每孔參加25lPBS，然后在每排第一孔加樣品粗提液25l，依次倍比稀釋，每一樣品作3排，最后分別參加兔紅血球懸液25l，設(shè)PBS為空白對照。靜置1h后，用肉眼和顯微鏡觀察其凝集效價(jià)。用同樣方法分別做Tris-H1緩沖液、乙酸鈉緩沖液樣品的凝集效價(jià)。2結(jié)果2.120種抗菌中藥PBS提取液的凝集效價(jià)測定結(jié)果抗菌中藥材中提取的凝集素生物活性的大小

8、通常用凝集效價(jià)來表示，即能引起凝集現(xiàn)象凝集素的最高稀釋倍數(shù)2n表示(n為中藥材待測樣品所含凝集素的稀釋倍數(shù)，稀釋倍數(shù)越高其生物括性就越高)。各抗菌中藥材的凝集素活性見表1。表120種抗菌中藥PBS提取液的凝集效價(jià)略由表1可見，被測的20位味中藥材分屬l3科，其中17種有凝集活性，占到總數(shù)的85。使兔紅血球凝集的效價(jià)最高為256，最低為1。將抗菌中藥材中提取的凝集素的凝集效價(jià)分列為四級(見表1)。一級效價(jià)大于128，計(jì)3種：虎杖、山豆根、板藍(lán)根；二級效價(jià)為3264，計(jì)6種：蘆薈、魚腥草、百合、黨參、黃芪和黃連；三級效價(jià)為816，計(jì)7種：川芎、黃精、梔子、補(bǔ)骨脂、甘草、黃柏、北柴胡；四級效價(jià)小于8

9、，計(jì)4種：大黃、黃芩、紫草、金銀花。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.220種抗菌中藥的不同pH值浸提液的凝集效價(jià)測定結(jié)果為了挑選這20種抗菌中藥最正確的凝集效價(jià)，選用了3種不同pH值浸提液作比擬。結(jié)果見表2。表220種抗菌中藥的不同pH值浸提液的凝集效價(jià)略從表2可以看出，這20種抗菌中藥用不同pH的浸提液提取后表現(xiàn)不同的凝集活性，例如補(bǔ)骨脂在PBS和Tris-H1緩沖液凝集活性23遠(yuǎn)低于在乙酸鈉緩沖液凝集活性26；但山豆根在Tris-H1緩沖液凝集活性最高23；北柴胡在乙酸鈉緩沖液凝集活性最高23。這20種抗菌中藥用PBS浸提，其中16種有較好的凝集活性，占到總數(shù)的80，這說明PBS對中藥材中凝集素

10、的提取具有一定的廣譜性。3討論經(jīng)過本研究發(fā)現(xiàn)，20種抗菌中藥在3種不同pH的浸提液中均具有較高凝集活性的有虎杖、山豆根、黃連、板藍(lán)根。無論是在治療和預(yù)防人患感冒疾病還是水生動物疾病的防治中，這4種中藥都是抗菌療效肯定深受群眾歡送的常用品種。胡興昌等13研究說明板藍(lán)根的明板藍(lán)根凝集素的效價(jià)與其抑制流感病毒的作用成正相關(guān)。是否其他抗菌中藥所含的凝集素也有同樣的作用，其量效關(guān)系如何，在后續(xù)的研究工作中會在別離純化抗菌中藥所含的凝集素根底上，研究凝集素的效價(jià)與其抗菌作用的相關(guān)性，探究其與水生動物免疫的關(guān)系。凝集素對水產(chǎn)動物的影響及抗菌中藥在水產(chǎn)疾病防治藥物挑選上的有重要意義。近年來病害對水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成

11、的危害加劇，水產(chǎn)養(yǎng)殖動物生活在種群復(fù)雜的水域環(huán)境中，受致病菌侵染而致病的危險(xiǎn)性始終存在。目前認(rèn)為水產(chǎn)動物免疫系統(tǒng)在對致病菌進(jìn)展防御因子包括凝集素、防御素、溶菌酶等。而凝集素作為無脊椎動物的甲殼動物和軟體動物體內(nèi)廣泛分布的一種天然的非免疫起源的蛋白質(zhì)或糖蛋白，具有凝集細(xì)胞、抑制腫瘤細(xì)胞增殖、激活淋巴細(xì)胞、抑制血小板凝集、毒性集等多種生物活性，在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究及病害防御中具有重要意義。然而，迄今為止，對于水產(chǎn)動物外源凝集素的作用相關(guān)根底研究極少。本研究中挑選的局部抗菌中藥，長期作為水產(chǎn)動物疾病防治藥物使用，療效肯定。但對于其抗菌的物質(zhì)根底和機(jī)理研究較少，因此對抗菌中藥凝集素進(jìn)展凝集活性檢測及性質(zhì)

12、研究，以期對水產(chǎn)養(yǎng)殖的病害防治機(jī)制提出新的認(rèn)識，同時(shí)也為進(jìn)一步開發(fā)凝集素的新來源提供科學(xué)根據(jù)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1謝仲權(quán),趙建民.中草藥防治魚病.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1987：40.2陳孝煊,吳志新,殷居易,等.大黃、穿心蓮、板藍(lán)根和金銀花對異育銀鯽免疫機(jī)能的影響J.中國水產(chǎn)科學(xué),2022,10(1):36.3Berglj,Tagnadttir.Innateiunityffish(vervie)J.FishShellfishIunlgy,2022,20:137.4ShnaK.hyte.Theinnateiunerespnseffinfish-AreviefurrentknledgeJ.FishShellfishIunlgy,2022,23:1127.5凌善鋒.鯽魚血清凝集素的生物學(xué)性質(zhì)研究J.生物技術(shù),2022,13(3):25.6吳超,陸承平.草魚等8種淡水魚血清凝集素作用的比擬J.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2022,27(2):79.7李海芳,常亞青,丁君.水產(chǎn)動物免疫增強(qiáng)劑的研究現(xiàn)狀及應(yīng)用前景J.水產(chǎn)科學(xué),2022,23(10):35.8溫周瑞,劉慧集,駱敏,等.中草藥對水產(chǎn)動物免疫作用研究進(jìn)展J.水利漁業(yè),2022,24(2):1.9賀麗虹,孫紹永,黃建華.多糖在水產(chǎn)動物免疫促進(jìn)方面的研究進(jìn)展J.河北漁業(yè),2022，1:1.10陳昌福,姚娟,李兆文.免疫多糖的理