天胡荽藥材中槲皮素的薄層鑒別與含量測定

1、天胡荽藥材中槲皮素的薄層鑒別與含量測定【摘要】目的對天胡荽藥材中槲皮素進(jìn)展薄層鑒別，并建立天胡荽藥材中槲皮素的含量測定方法。方法采用薄層色譜法對天胡荽藥材中槲皮素進(jìn)展鑒別。并采用高效液相色譜法進(jìn)展含量測定，色譜柱為Dika公司Diansil182504.6，5；流動相為乙腈-0.1%磷酸4555；流速0.8l/in。檢測波長370n，柱溫25。結(jié)果薄層色譜可鑒別槲皮素。槲皮素在0.010880.1088g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9998，平均回收率為97.77%，RSD=1.00%。結(jié)論此法簡便、準(zhǔn)確，可用于天胡荽藥材的質(zhì)量控制?！娟P(guān)鍵詞】天胡荽；槲皮素；薄層色譜法；高效液相色譜法天胡荽為

2、傘形科植物天胡荽HydrtylesibthrpiidesLa.或破銅錢HydrtylesibthrpiidesLa.Var.batrahiuHaneHand.-azz.exShan的枯燥全草，具有清熱解毒、利濕之成效，用于黃疸型肝炎、膽結(jié)石、目翳1治療。天胡荽含槲皮素queretin、槲皮素-3-半乳糖苷queretin-3-galatside等黃酮類化合物2，其中槲皮素具有抗炎、抗氧化、抗癌和抗突變等多種功能3，是天胡荽藥材的有效成分之一。本實驗采用薄層色譜及高效液相色譜對天胡荽藥材中槲皮素進(jìn)展定性與定量研究，為控制天胡荽藥材的質(zhì)量提供簡便、有效的方法。1儀器與試藥Agilent1100型高

3、效液相色譜儀(自動進(jìn)樣品)，二極管陣列檢測器(DAD)；AB104-N型電子天平(德國ettler-TledGrup公司)；薄層色譜硅膠G青島海洋化工；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為重蒸鎦水；槲皮素對照品中國藥品生物制品檢定所，批號：100081-202206；10批天胡荽藥材樣品采自貴州各地，經(jīng)筆者鑒定為傘形科植物天胡荽HydrtylesibthrpiidesLa.和破銅錢HydrtylesibthrpiidesLa.Var.batrahiuHaneHand.-azz.exShan的枯燥全草。2方法與結(jié)果2.1定性鑒別2.1.1供試品溶液的制備取枯燥至恒重的天胡荽藥材粉末約3g，精細(xì)

4、稱重，置圓底燒瓶中，精細(xì)參加甲醇-25%鹽酸溶液(41)提取液75l，置水浴中加熱回流1h，濾過，將濾液水浴蒸干，用適量蒸餾水溶解，移至分液漏斗中，加醋酸乙酯30l10，10，10l萃取，合并醋酸乙酯萃取液，減壓回收醋酸乙酯至干，殘渣加甲醇3l使溶解，取上清液作為供試品溶液。2.1.2對照品溶液的制備精細(xì)稱取槲皮素對照品13.6g，置50l的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為對照品溶液。2.1.3薄層色譜法4照薄層色譜法試驗，汲取供試品溶液及槲皮素對照品溶液各10l分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸541為展開劑，置鹽酸蒸氣飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾

5、干。供試品色譜中，在與對照品相應(yīng)的位置上，顯一樣顏色的斑點。2.2HPL測定2.2.1色譜條件色譜柱為Dika公司Diansil182504.6，5；流動相為乙腈-0.1%磷酸4555；流速0.8l/in。檢測波長370n，柱溫25。進(jìn)樣量10l。理論塔板數(shù)按槲皮素計算，應(yīng)不低于5000。在此色譜條件下，槲皮素對照品、天胡荽藥材的HPL圖譜見圖12。2.2.2對照品溶液的制備精細(xì)吸勸2.1.2項下的槲皮素對照品溶液1l，置25l的容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為對照品溶液。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.2.3供試品溶液的制備取枯燥至恒重的天胡荽藥材粉末約0.5g，精細(xì)稱重，置50l具塞錐形瓶中，

6、精細(xì)參加甲醇-25%鹽酸溶液(41)提取液25l，稱定重量，置水浴中加熱回流1h，放冷，稱重，用提取液補足減失的重量，搖勻，濾過，精細(xì)汲取續(xù)濾液5l至25l量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45)濾過，取續(xù)濾液,即得供試品溶液。2.2.4線性關(guān)系考察精細(xì)汲取槲皮素對照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0l，進(jìn)樣，測定峰面積，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，槲皮素進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)展線性回歸分析，線性回歸方程:Y=6442.9X-1.4915，r=0.9998，結(jié)果說明槲皮素在0.010880.1088g進(jìn)樣量與峰面積的線性關(guān)系良好。2.2.5精細(xì)度實驗汲取對照品溶液10l，連

7、續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖，結(jié)果槲皮素峰面積的RSD為0.19%。2.2.6穩(wěn)定性實驗取同一供試品溶液，分別在0，2，4，6，8，10h進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果槲皮素峰面積的RSD為1.15%。說明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。2.2.7重復(fù)性實驗取同批藥材5份，精細(xì)稱定，按“2.2.3項下供試品溶液制備方法制備并測定，槲皮素平均含量為0.11%，RSD為0.96%。2.2.8加樣回收率實驗取含量天胡荽粉末5份，每份約0.25g，精細(xì)稱定，分別精細(xì)參加一定量的槲皮素對照品溶液，按“2.2.3項下方法制備并測定，結(jié)果回收率平均值為97.77%，RSD為1.00%。2.2.9樣品含量測定精細(xì)汲取對照品溶液與

8、10批天胡荽藥材供試品溶液各10l，按上述色譜條件測定，測定峰面積積分值,按外標(biāo)法計算槲皮素的含量。結(jié)果見表1。表1樣品中槲皮素的含量略3討論通過實驗發(fā)現(xiàn)，在槽內(nèi)先參加展開劑，再在展開缸內(nèi)用小燒杯盛上鹽酸，然后進(jìn)展薄層板預(yù)飽和30in，再展開，其色譜斑點圓而集中，別離度較好。天胡荽藥材除了含有槲皮素外，還有多種黃酮苷，本文以鹽酸和硫酸作為水解酸進(jìn)展了比擬，還對水解酸的濃度、溶劑和提取時間進(jìn)展了考察。結(jié)果本文所用的條件較好。曾對甲醇-水5050、甲醇-0.1%磷酸5050、乙腈-水4555等流動相進(jìn)展考察，發(fā)現(xiàn)上述條件不夠理想。采用乙腈-0.1%磷酸4555作為流動相，槲皮素色譜峰可以到達(dá)基線別

9、離，峰形對稱、鋒利。1990年版?廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)?收載天胡荽和破銅錢為天胡荽藥材的來源品種，而2022年版?貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)?只收載天胡荽為天胡荽藥材的來源品種，同時槲皮素的含量測定結(jié)果說明，天胡荽和破銅錢兩種植物在成分含量上有明顯的差異。因此，天胡荽和破銅錢兩種植物的枯燥全草能否同時作為天胡荽藥材使用有待商榷。在?廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)?1990年版與?貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)?2022年版中1，5，只對藥材性狀與粉末鑒別作了規(guī)定，本實驗首次對天胡荽藥材中槲皮素進(jìn)展薄層鑒定與含量測定，可作為天胡荽藥材質(zhì)量控制的有效方法?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳.廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)1990版S.南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社，1992，27:152.2張?zhí)m，張德志.天胡荽的研究進(jìn)展J.現(xiàn)代食品與藥品雜志，2022，17(1):15.3俞一心，