唐氏綜合癥詳解綜合征

1、唐氏綜合征產(chǎn)前篩查系統(tǒng)臨床應(yīng)用手冊目錄唐氏綜合征產(chǎn)前篩查 ELISA 試劑盒技術(shù)介紹33一ELISA 檢測原理33二篩查 ELISA 試劑盒的組成及檢測流程351 “復(fù)旦”AFP、hCG 定量檢測試劑盒介紹352 AFP、hCG 檢測流程及其標(biāo)準(zhǔn)化操作36三ELISA 的質(zhì)量控制40123儀器質(zhì)控40分析中的質(zhì)控42分析后的質(zhì)控444 “復(fù)旦”的質(zhì)量保證體系46四一些常見問題的解答五實(shí)驗操作中容易出現(xiàn)及解答六酶聯(lián)免疫檢測的基本儀器配置唐氏綜合征產(chǎn)前篩查風(fēng)險估算和管理的使用及相關(guān)說明47一簡介47二統(tǒng)計原理47. 49. 51三 篩查效率的決定四 篩查效率的影響作說明52五產(chǎn)前篩查流程及相關(guān)說明

2、一產(chǎn)前篩查流程二篩查對象三抽血時間四產(chǎn)前門診五標(biāo)本六篩查結(jié)果說明七需做八隨訪病產(chǎn)前的孕婦產(chǎn)前篩查常見問題解答唐氏綜合征產(chǎn)前篩查系統(tǒng)臨床應(yīng)用手冊分子技術(shù)是“復(fù)旦”重點(diǎn)發(fā)展領(lǐng)域。隨著后組時代的到來，臨床醫(yī)學(xué)得到了極大的飛躍?！皬?fù)旦”利用自身的研發(fā)以及利用國外一流技術(shù)公司如Luminex 公司的MASA 技術(shù)和榮研公司的L技術(shù)，開發(fā)出了一系列突破性的產(chǎn)品。本次推出的唐氏綜合征產(chǎn)前篩查技術(shù)就是重要成果之一。根據(jù)國際和國內(nèi)的篩查經(jīng)驗，采取定量 ELISA 法測 1420 周孕婦母血中 AFP、hCG 水平結(jié)合篩查的方法。經(jīng)計算機(jī)統(tǒng)計學(xué)處理篩查出高危人群，可使 65%-85%以上的唐氏患者得到。最后對篩查

3、出的高危人群作羊水穿刺和核型分析。另外，AFP 還可作為神經(jīng)管缺損篩查指標(biāo)； hCG 還可作為18、13-三體綜合征指標(biāo)。操作部分，需用 ELISA（ 免疫酶標(biāo)法）篩查工作包括兩個內(nèi)容：一是試劑盒定量測量孕婦中的 AFP 和 hCG 濃度；二是統(tǒng)計學(xué)處理部分，需要綜合考慮孕齡，母血生化指標(biāo)，經(jīng)精密計算出綜合性數(shù)字，即懷有唐氏兒的概率系數(shù)。實(shí)驗臨界值為 1/275（不同地區(qū)可能存在微小差異），也就是說一個孕婦懷有唐氏患兒的系數(shù)高于 1/275 需做進(jìn)一步的。此時，高危人群為被檢孕婦的 510%，檢出率約為 85%。下面就從檢測原理入手，詳述本公司的唐氏綜合征產(chǎn)前篩查技術(shù)。一. ELISA 檢測原

4、理唐氏綜合征產(chǎn)前篩查試劑盒是采用酶聯(lián)免疫吸附法“復(fù)旦”的（ELISA）技術(shù)原理，采用二聯(lián)酶標(biāo)免疫吸附檢驗法（AFP+hCG）做唐氏綜合征的產(chǎn)前篩查。檢測時要等到孕中期（14-20 周），定量檢測孕婦中 AFP（甲和上述胎蛋白）及 hCG（絨毛膜促激素）水平，然后根據(jù)孕周、孕婦兩項指標(biāo)，通過“復(fù)旦”專業(yè)運(yùn)用統(tǒng)計學(xué)方法測算出該孕婦懷有唐氏綜。檢測過程中主要涉及 ELISA 相合征患兒的性，以確定是否需要進(jìn)行關(guān)技術(shù)，其基本原理是： 使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。 使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標(biāo)本

5、（測定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地放大反應(yīng)效果，從而使測定方法達(dá)到很高的敏感度。ELISA 可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有 3 種必要的試劑： 固相的抗原或抗體， 酶標(biāo)記的抗原或抗體， 酶作用的底物。操作示意圖及操作步驟如下（圖 1）：圖 1 雙抗

6、體夾心法測抗原示意圖 將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。 加入受檢標(biāo)本：使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時間，讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。 加酶標(biāo)抗體：使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈正相關(guān)。 加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量測定。二.篩查試劑盒的組成及檢測流程1 “復(fù)旦”AFP、hCG 定量檢測試劑盒介紹本試劑盒用于定量檢測妊娠中期（孕 14-20 周）孕婦中的 AFP 和

7、 hCG濃度，再結(jié)合孕婦的、孕周等，利用配套的計算機(jī)分析計算發(fā)病的系數(shù)，作為唐氏綜合征以及神經(jīng)管畸形的產(chǎn)前篩查指標(biāo)。本試劑盒采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），首先用 AFP 和 hCG 抗體聚苯乙烯板，然后將標(biāo)準(zhǔn)品和稀釋后的待測加入，與的抗體反應(yīng)，再加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體，經(jīng) TMB 底物顯色后計算待測標(biāo)本的濃度。光密度值，最后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線利用相應(yīng)的從上述介紹中可以看出，本試劑盒主要由以下部分組成（表 1）：表 1 “復(fù)旦盒 1” AFP、hCG 定量檢測試劑盒組分（規(guī)格：48 人份）盒 2盒 3AFP 酶標(biāo)板AFP 標(biāo)準(zhǔn)品 F 和質(zhì)控 1、2稀釋液 2 瓶濃縮液顯色液 A、B終止液AF

8、P B、C、D、E 管自封袋板架HCG 酶標(biāo)板 HCG 酶標(biāo)抗體 AFP 酶標(biāo)抗體HCG 標(biāo)準(zhǔn)品 F 和質(zhì)控 1、2說明書補(bǔ)充說明書HCG B、C、D、E 管HCG 酶標(biāo)板 HCG 酶標(biāo)抗體 AFP 酶標(biāo)抗體HCG 標(biāo)準(zhǔn)品 F 和質(zhì)控 1、2操作細(xì)則HCG B、C、D、E 管注：1盒 1 與盒 3 包裝盒顏色一樣，盒 2 包裝盒顏色為白版；2盒 1 與盒 2 組合時按以下的檢測流程操作，盒 1 與盒 3 組合時按以下改進(jìn)版操作流程操作!2檢測流程及其標(biāo)準(zhǔn)化操作本試劑盒檢測原理主要是基于 ELISA 技術(shù)，具體操作流程如下：整個檢測過程可以分為樣品前處理、ELISA 反應(yīng)、結(jié)果分析等三個步驟，下

9、面就從這三個方面詳述操作步驟：A) 樣品前處理及實(shí)驗準(zhǔn)備a) 標(biāo)本與抽取孕中期（1420 周）孕婦外周血 2ml（孕周以 B 超或末次法計算），置采內(nèi)（不加抗凝劑），室溫靜置 12 小時后 2000 轉(zhuǎn)/分離心 15 分鐘，吸取。若不檢測，標(biāo)本應(yīng)低溫凍存，檢測時應(yīng)將標(biāo)本融化后混合均勻，并避免反復(fù)凍融。標(biāo)本在 4冰箱只能存放一個。已稀釋的不宜存放。所有標(biāo)本均看作有潛在性的物品，操作和保存時按國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。b) 試劑的配制液配制將 30ml 濃縮液用 870ml 蒸餾水做 1:30 倍稀釋，搖勻備用，作為液。標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋AFP 標(biāo)準(zhǔn)品向 AFP 標(biāo)準(zhǔn)品 F 瓶中加入 1.2ml 稀釋液，混勻；

10、分別向 AFP 標(biāo)準(zhǔn)品 B、C、D、E 管中分別加入 3001 稀釋液；從 AFP 標(biāo)準(zhǔn)品 F 瓶中取 3001 混勻的液體加到 AFP 標(biāo)準(zhǔn)品 E 管中，混勻；從 AFP 標(biāo)準(zhǔn)品E 瓶中取 3001 混勻的液體加到 AFP 標(biāo)準(zhǔn)品D 管中，混勻；依此類推，AFP 標(biāo)準(zhǔn)品 C、B 的同上，AFP 標(biāo)準(zhǔn)品 A 即為稀釋液；注: 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋后需在短期內(nèi)用完。hCG 標(biāo)準(zhǔn)品向 hCG 標(biāo)準(zhǔn)品 F 瓶中加入 1.2ml 稀釋液，混勻；分別向 hCG 標(biāo)準(zhǔn)品 B、C、D、E 管中分別加入 3001 稀釋液；從 hCG 標(biāo)準(zhǔn)品 F 瓶中取 3001 混勻的液體加到 hCG 標(biāo)準(zhǔn)品 E 管中，混勻；從 hC

11、G 標(biāo)準(zhǔn)品E 瓶中取 3001 混勻的液體加到 hCG 標(biāo)準(zhǔn)品D 管中，混勻；依此類推，hCG 標(biāo)準(zhǔn)品 C、B 的同上，hCG 標(biāo)準(zhǔn)品 A 即為稀釋液；注: 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋后需在短期內(nèi)用完。質(zhì)控品的稀釋AFP 質(zhì)控品 1 和 2：分別加入 1.2ml 稀釋液，混勻；hCG 質(zhì)控品 1 和 2：分別加入 1.2ml 稀釋液，混勻。待測標(biāo)本的稀釋 在離心管中先加入 400ul 稀釋液，再加入 100ul 待測，混勻，得“5”液； 在離心管中先加入 450ul 稀釋液，再加入 50ul“5”液，混勻，得“50”液； 在離心管中先加入 480ul 稀釋液，再加入 20ul“50液”，混勻，得“1250”液

12、。B)ELISA 反應(yīng)a)加樣根據(jù) AFP 和 hCG 的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品以及待測標(biāo)本分別標(biāo)記兩種抗體包被板（切記不要將兩種板條搞混?。?；AFP 和 hCG 的 6 個標(biāo)準(zhǔn)品及 2 個質(zhì)控直接取 1001 加入相應(yīng)；AFP樣本加樣：取待測的“5”液 100ul 直接加入 AFP 抗體板hCG體的“1250”液 100ul 直接加入 hCG 抗樣本加樣：取待測板（改進(jìn)版加樣為待測的“5”液 100ul）將加好樣的酶標(biāo)板水平輕輕晃動以混勻樣本，然后放入自封袋，置于37水浴孵育 1 小時。b)洗板甩去液體，用稀釋好的液加滿各孔，略靜置一下，甩去板內(nèi)液體，再加入液，重復(fù)操作共 5 次，拍干。c)酶標(biāo)抗體

13、反應(yīng)將置于冰箱內(nèi)的酶標(biāo)抗體取出；將 AFP、hCG 酶標(biāo)抗體 100l/孔加入相應(yīng)注意不要將 AFP 和 hCG 酶標(biāo)抗體搞混；放入自封袋，置于 37孵育 1 小時（改進(jìn)版為 15 分鐘）；重復(fù)洗板操作。，加畢，即刻計時；d)顯色將置于冰箱內(nèi)的顯色液 A、顯色液 B 取出；將顯色液 A、顯色液 B 等體積混勻；每孔加入 100l 的混勻顯色液，加畢，即刻計時，避光、37水浴孵育12 分鐘；每孔加入 200l 終止液，終止反應(yīng)e)比色用酶標(biāo)儀于 450nm 波長，并以 630nm 波長為參考波長，光密度值（OD值）。C) 結(jié)果分析將測得的 AFP 標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品及樣本的 OD 值輸入配套的數(shù)據(jù)將

14、測得的hCG 標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品及樣本的 OD 值輸入配套的數(shù)據(jù)；c) 將樣本對應(yīng)的孕婦的（：歲）、體重（：公斤）和胎齡（單位：天）輸入配套的數(shù)據(jù)；d) 通過數(shù)據(jù)，計算唐氏綜合征或其他異常的風(fēng)險系數(shù)；風(fēng)險系數(shù)的臨界值為 1/275：當(dāng)風(fēng)險系數(shù)大于臨界值時，建議做進(jìn)一步產(chǎn)前，如抽取羊水，做羊水細(xì)胞培養(yǎng)核型分析等；或直接人工，終止妊娠；2)當(dāng)系數(shù)小于該臨界值時，說明患有唐氏綜合征的可能性較小。D) 注意事項a)b)請詳細(xì)閱讀本品說明書；每次檢測必須同時做 AFP 和 hCG 的標(biāo)準(zhǔn)曲線及質(zhì)控品，不能使用以前做過的標(biāo)準(zhǔn)曲線；c)如果一個試劑盒一次使用不完，且?guī)状螜z測時間間隔較長，建議將剩余的標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控

15、品置于低溫(0以下)冰箱冷凍保存，下一次使用前取出，融化后混勻再使用(酶標(biāo)抗體不宜低溫冷凍)；建議一個試劑盒(48 人份)一次使用完，最好不要分兩次以上使用，否則不但會造成標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控品不夠用，而且會造成浪費(fèi)(每次都要有 8作標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控品測定)，同時標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控品的反復(fù)多次凍融會對檢測d)結(jié)果造成影響；e) 如果條件允許，建議標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品做雙孔，結(jié)果以兩孔的平均值計算；f) 一次未用完的熱、光下；板條應(yīng)密封保存，貯藏及應(yīng)用時不要將試劑g) 本試劑盒體外用，每一盒應(yīng)作為整體應(yīng)用，不要將不同批號的試劑混合用，敬請在有效期內(nèi)使用；h) 脂血、嚴(yán)重黃疸及溶血或加熱滅活的標(biāo)本均有可能影響檢測結(jié)果；i

16、) 建議按產(chǎn)前技術(shù)管理辦法的有關(guān)規(guī)定，使用本品。三. ELISA 的質(zhì)量控制ELISA 的質(zhì)量控制主要包括以下 4 個方面：儀器質(zhì)控、分析過程的質(zhì)控、分析后質(zhì)控以及“復(fù)旦”的質(zhì)量保證體系（質(zhì)評），下面分別進(jìn)行詳述：1 儀器質(zhì)控為使儀器保持最佳工作狀態(tài)應(yīng)建立和校正儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），所要控制的儀器包括移液器（加樣槍），水浴箱（溫箱），洗板機(jī)和酶標(biāo)儀。ELISA 加樣量?。?-100l），其準(zhǔn)確性直接影響實(shí)驗結(jié)果，一進(jìn)行檢查。首先，吸取刻度指示量的水，萬分之一天平稱移液器般利用稱重后計算吸量是否準(zhǔn)確，一般應(yīng)在10%以內(nèi)；水浴箱經(jīng)常檢查水浴箱溫度計所示的溫度和水中（或溫箱內(nèi)）實(shí)測溫度是否一

17、致，允許有1 的誤差；洗板機(jī)每個廠家設(shè)置洗板后的殘留液有各自的規(guī)定（一般不超過 2l），人工扣板時，墊紙不濕，定期檢查管孔是否堵塞；酶標(biāo)儀經(jīng)常其光學(xué)部分，防止濾光片霉變，定期檢測校正，使其保持良好的工作性能。酶標(biāo)儀的校正程序和精度評價如下說明（圖 7、圖 8）。圖 7 酶標(biāo)儀校正程序濾光片波長精度檢查：將不同波長的濾光片從酶標(biāo)儀上卸下，用紫外-可見分光光度計（波長精度：0.3nm）于可見光區(qū)對每個濾光片進(jìn)行掃描，其檢測值與標(biāo)定值之差為濾光片波長精度。通道差與 差檢測：通道差檢測是取一只酶標(biāo)板小孔杯（杯底須光滑，透明，無污染以酶標(biāo)板架作載體， 將其（內(nèi)含 200ul 甲基橙溶液吸光度調(diào)至 0.5

18、00A 左右）置于 8 個通道的相應(yīng)位置，蒸餾水調(diào)零，然后置于 490nm 處連續(xù)測三次，觀察其不同通道的檢測器測量結(jié)果的一致性，可用極差值來表示。 差的測量是選擇同一廠家，同一批號酶標(biāo) 2 板條（8 96 孔）分別加入 200ul 甲基橙溶液（吸光度調(diào)至 0.100A 左右）先后置于同一通道，蒸餾水調(diào)零,于 490nm 處檢測，其誤差大小用1.96s 衡量。零點(diǎn)飄移（穩(wěn)定性觀察）：取 8 只小孔杯分別置于 8 個通道的相應(yīng)位置，均加入 200ul蒸餾水并調(diào)零，于 490nm 處每隔 30 分鐘測一次，觀察各個通道 4 小時內(nèi)吸光度的變化。注：450nm 濾光片的檢定選用溶液（校正波長為 63

19、0nm）2 分析中的質(zhì)控ELISA 實(shí)驗的結(jié)果受操作影響很大，包括加樣、溫育、洗滌、顯色、酶標(biāo)儀讀數(shù)、等每一個步驟均應(yīng)認(rèn)真負(fù)責(zé)才能充分發(fā)揮 ELISA 的，強(qiáng)特異的優(yōu)點(diǎn)。因此，必須建立檢驗項目的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)。（1） 加樣加樣應(yīng)用微量移液器（加樣槍)按規(guī)定的量加入微孔板的 1/3 處避免加在上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。每次加樣應(yīng)更換吸嘴，做到一人一吸頭，以免發(fā)生交叉污染;干吸頭預(yù)先在血清中抽吸三次。樣本稀釋，目的是為了減少非特異性反應(yīng)，所以一定要先加稀釋液后加樣本，如后面操作步驟中加二種以上試劑需振蕩混勻。圖 8 酶標(biāo)儀評價指標(biāo)精密度評價：每個通道 3 只小杯分別加入 200u

20、l 高中低 3 種不同濃度的甲基橙溶解，蒸餾水調(diào)零，于 490nm 作雙份平定，測二次（上下午各一次），連續(xù)測定 20 天。分別計算其批內(nèi)精密度，日內(nèi)批精密度,日間精密度和總精密度及相應(yīng)的 CV值。線性測定：用電子天平精確稱取甲基橙配制 5 個系列的溶液，于 490nm 平8 次，取其均值。計算其回歸方程、相關(guān)系數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)估計誤差 s，并用1.96s 表示樣品測量的誤差范圍。雙波長測定評價：取一份甲基橙溶液，分別加入 3 種不同濃度的溶血液（測定波長為 490nm，校正波長為 585nm），先后于 8 個通道檢測，每個通道測 3 次。逐一比較各組之間是否具有統(tǒng)計學(xué)差異，以 雙波長消除干擾組分的效

21、果。注：450nm 濾光片的檢定選用 溶液（校正波長為 630nm）（2）溫育抗原-抗體反應(yīng)需要在一定溫度下（37），經(jīng)過一定的時間（1 小時）才能達(dá)到反應(yīng)的平衡點(diǎn)，所以溫育時間必須足夠。ELISA 邊緣效應(yīng)（邊緣孔與中心孔反應(yīng)條件不一致）是由溫育形成的，所以溫育一般采用能使反應(yīng)液溫度迅速達(dá)到平衡的水浴法。一種放在水浴箱的隔板上；另一種是放在溫箱的濕盒里，水要浸沒至板條的 1/3 處，切不可將板條疊加放置。（3）洗滌ELISA 是靠洗滌來達(dá)到分離結(jié)合與未結(jié)合的抗原抗體復(fù)合物以及酶標(biāo)記物的目的，同時洗滌也可將非特異吸附的蛋白質(zhì)的干擾以及血球、細(xì)菌中的酶干擾清除掉。手工洗滌一般采用浸泡方法：1）甩

22、去反應(yīng)液；2）用洗滌液過洗一遍（即注滿即甩去）；3）微孔重新注滿洗液后浸泡 2-3 分鐘，間歇搖動；4）甩去液體，拍板，用紙吸干。重復(fù)以上操作至少 5 次。注意各種試劑盒的洗滌液盡量不要混用。如果采用洗板機(jī)洗板則一定要預(yù)先把板架放平，使洗板機(jī)上的每個放液和吸液纖孔都能一致地，將液體全部吸干，同時要設(shè)置一定的浸泡時間。如出現(xiàn)機(jī)洗后拍板有較多殘留液時應(yīng)再用手工洗 2 次以上。關(guān)機(jī)前要用蒸溜水沖洗管道，避免堵孔。（4）顯色一定要按照說明書規(guī)定的時間溫度（室溫避光靜置 30 分鐘）恒定反應(yīng)后終止。（5）酶標(biāo)儀判讀結(jié)果顯色反應(yīng)終止后應(yīng)立刻比色（30 分鐘內(nèi)）。本產(chǎn)品的顯色系統(tǒng)是 TMB，而 TMB 酸不

23、易終止，因此必須盡快比色以免影響結(jié)果。TMB 終止后顯黃色，測定波長為 450nm。底物的校正波長采用 630nm。（6）方式定量分析：用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋，ELISA 測定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以絕對量或表示。ELISA 的標(biāo)準(zhǔn)曲線每次都要和待測標(biāo)本做在同一塊板上。3分析后的質(zhì)控英國 Whitehead 教授建議生化檢驗工作的質(zhì)量控制分為 4 個步驟：最佳條件的變異（OCV）；常規(guī)條件的變異（RCV）；結(jié)果的統(tǒng)計（SPR）；質(zhì)量控制（EQA）。前三個步驟即室內(nèi)質(zhì)量控制（IQC）。在 GLP（good Laboratory Practice forclinical Laboratory

24、Studies，藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范）概念里 QC 即指 IQC，其定義為：由采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本室工作的可靠性，旨在監(jiān)測和控制本室常規(guī)工作的精密度，提高批內(nèi)、批間樣本檢驗的一致性，以確定檢驗是否可靠或可否發(fā)出的一項工作。而免疫測定方法的靈敏度和特異性要比生化方法高得多，因此 QC不能照搬生化模式。分為定性和定量二個方面。（1） 定性試驗定性試驗：本試劑盒的二聯(lián) ELISA 的臨床意義在于是否檢出 AFP 和 hCG，因此 QC 要保證試驗的靈敏度和特異性。使用臨界值界定法：將試劑盒所設(shè)的陰陽性對照作為內(nèi)對照指示反應(yīng)；另設(shè)臨界值、高值質(zhì)控，并用正常人作為外對照，與標(biāo)本同時檢測

25、。當(dāng)臨界值 S/C.O1：高值質(zhì)控；當(dāng)S/C.O10：正常人；當(dāng) A 值在 0.050.07 之間。結(jié)果有如下兩種情況（注：S 為標(biāo)本 A 值，C.O 即 Cut Off 值（陽性判定值）：失控（臨界值為靈敏度，高值為HOOK效應(yīng)）應(yīng)重做陰對照失控應(yīng)重做陽性標(biāo)本。陽性質(zhì)控性標(biāo)本；以表格式每塊板的外對照實(shí)驗結(jié)果，作為 QC 資料存檔。（2） 定量試驗定量試驗：本試劑盒最終是為了定量測定妊娠中期(孕 14-20 周)孕婦中的 AFP 和 hCG 濃度，并以此為基礎(chǔ)判斷患唐氏的概率。AFP 和 hCG 在孕婦體內(nèi)有一定的量（正常范圍），超出這個量才呈病理情況，故需定量測定。定量試驗的質(zhì)控方法可參考生

26、化常規(guī)質(zhì)控方法。在這里采取“即刻性”質(zhì)控方式?！凹纯绦浴辟|(zhì)控在開始進(jìn)行質(zhì)控時，只需要有 3 個質(zhì)控測定值即可進(jìn)行質(zhì)控。當(dāng)這組數(shù)據(jù)擴(kuò)大到 20 次有效值時就可以計算 RCV 的 X，s。具體方法如下：（1）（2）（3）先將測定值從小到大排列，X1 最小，Xn 最大；計算 X 和 s；計算 SI 上限值和下限值：SI 上限=（X 最小-X）/S， SI 下限=（X 最大-X）/S對照 SI 表(表 2)，檢查是否出控：SI 上、下限規(guī)定值，在控；SI 上、下限規(guī)定值，失控。（4）注：根據(jù)臨床定量測定室內(nèi)質(zhì)量控制工作指南中對于某些不是每天開展的項目、有效期較短的試劑盒的項目采用 Cru質(zhì)控“規(guī)定值”

27、可定為 N (2s)。行室內(nèi)表 2 SI 值表（即刻性質(zhì)控）N34567891 01 11 281 92 0N(3s)1.151.491.751.922.412.482.552.612.662.712.752.792.822.852.88N (2s)1.151.461.671.821.942.032.292.332.372.412.442.472.502.532.564“復(fù)旦”的質(zhì)量保證體系質(zhì)量保證（Quality Aprovment，QA）的內(nèi)容是質(zhì)評。質(zhì)評是一種回顧性評價，主要控制試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，也是某些定量試驗量值溯源。我們采用的評價方法

28、主要有以下兩種：發(fā)質(zhì)控物這是目前國內(nèi)外常見的形式，采用定期質(zhì)控物至各實(shí)驗室，各在規(guī)定的日期進(jìn)行檢驗，并將結(jié)果報至組織者（本公司或省級確診）。組織者通過統(tǒng)計分析，再將評價結(jié)果寄回，使其了解工作質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)問題，提高質(zhì)量?，F(xiàn)場事先不通知，本公司臨時派出到各，規(guī)定采用常規(guī)方法，檢測一組標(biāo)本，進(jìn)行評價。在對檢測進(jìn)行質(zhì)控保證之后，“復(fù)旦”的質(zhì)控保證體系最后會對評價進(jìn)行計分，計分方法如下：定性試驗：檢驗結(jié)果與預(yù)期結(jié)果一致，得 100 分，錯誤不得分，總計的得分。從全部參評的得分中求出該批質(zhì)控物平均分（X）和標(biāo)準(zhǔn)差（s），再通過公式計算出每一個的得分比值（SI）得分-平均分 X）/平均標(biāo)準(zhǔn)差（s）SI=（SI

29、 在 0.0-0.9 間為良好,1.0-1.9 間為優(yōu)秀,SI 為負(fù)值時數(shù)值越大成績越差。定量試驗SI=（測定值-預(yù)期值 X）/預(yù)期值的標(biāo)準(zhǔn)差 sSI 越小，表明越靠近靶值，成績越好。0-1.0 為優(yōu)秀,1.1-2.0 為良好,2.0為差。（SI 無正負(fù)之分）。對于質(zhì)控所反映定期對各個提出質(zhì)量改進(jìn)（Quality面：Improvement，QI）意見，質(zhì)量改進(jìn)的建議來源于（1）室內(nèi)質(zhì)控：提示實(shí)驗的精密度差，應(yīng)規(guī)范各項操作；（2）質(zhì)評：提示實(shí)驗的準(zhǔn)確性差，應(yīng)改進(jìn)設(shè)備的準(zhǔn)備或更換試劑；（3）孕婦的報怨：提示實(shí)驗的偶然誤差，應(yīng)分析實(shí)驗的質(zhì)控過程是否達(dá)標(biāo)。四一些常見問題的解答1樣品與保存：應(yīng)盡量避免溶

30、血；不用抗凝血；盡快分離；樣本在 5 天內(nèi)測定的，可放置 4冰箱；樣本保存一周以上的要在-20冰箱保存，長期保存考慮用超低溫冰箱。復(fù)溶時上下顛倒混勻，同時應(yīng)避免氣泡。2為什么“所有試劑置于冰箱（28）內(nèi)，臨用前取出使用”？酶免產(chǎn)品的特點(diǎn)之一就是受溫度的影響較大。中國地域遼闊，同一季節(jié)南北室溫溫差較大；同一地區(qū)，一年四季室溫差異也較大。為了減少誤差，規(guī)避由于各地、各季節(jié)室溫差異導(dǎo)致的影響，所以“所有試劑置于冰箱（28）內(nèi)，臨用前取出使用”，以達(dá)到反應(yīng)起始溫度一致之目的，實(shí)驗易于控制，重復(fù)性好。注：當(dāng)溫度上升 10時，反應(yīng)速率上升 24 倍。3如何理解“臨用前取出使用”？每進(jìn)行下一步實(shí)驗前 25m

31、in 左右從冰箱中取出所需試劑，其余的試劑仍然置于冰箱。4為什么“標(biāo)準(zhǔn)品稀釋后需在短期內(nèi)用完”？“短期”為多長時間？由于液體不易保存，凍干品稀釋后不穩(wěn)定，蛋白易降解，所以應(yīng)盡量在短期內(nèi)用完標(biāo)準(zhǔn)品。實(shí)驗表明標(biāo)準(zhǔn)品溶解后在 4或-20放置 2穩(wěn)定，即應(yīng)在 2用完稀釋品，不宜過長時間保存使用。5板外稀釋”與“板內(nèi)稀釋”的優(yōu)缺點(diǎn)比較“板內(nèi)稀釋”無需其他輔助耗材，可直接根據(jù)比例把樣本加入已加入稀釋液的酶標(biāo)板中，但是由于稀釋液的體積遠(yuǎn)大于樣本體積，加樣時不易分辨是否已經(jīng)加入樣品，且加入樣品后不易混勻或混勻時液體濺出孔外，容易造成交叉污染?！鞍逋庀♂尅敝傅氖窍仍陔x心管中稀釋混勻標(biāo)本，然后對照著 AFP、hC

32、G 板條加入標(biāo)本。此法既可輕易分辨是否已加樣，避免漏加、錯加，提高加樣準(zhǔn)確率，又可充分混勻樣品，唯一需要的是要耗費(fèi)一定量的離心管。對于剛開始熟悉產(chǎn)品的來說，采用“板外稀釋”較為有利，可以大大降低操作錯誤而必須重做的概率。6如何理解“37水浴孵育” ？水浴孵育有利于酶標(biāo)板整體受熱，使反應(yīng)溶液的溫度迅速達(dá)到水浴溫室，減少邊緣差異；37是指用校正過的溫度計進(jìn)行實(shí)測所得，而不是水浴箱的顯示溫度，控制溫度誤差在1以內(nèi)；7怎樣做濕盒？可在鋁制飯盒或可封閉金屬容器的底部鋪上潤濕的紗布（加入少量水），放入 37水浴鍋或恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，酶標(biāo)板密封后可放入飯盒內(nèi)，以達(dá)到避光、恒溫之目的。8為什么“37水浴孵育時須將

33、酶標(biāo)板置于密封袋內(nèi)” ？1為了防止加入的液體蒸發(fā)；2水浴時防止板部附有水滴，對酶標(biāo)儀讀數(shù)造成影響9為什么酶聯(lián)免疫反應(yīng)須準(zhǔn)確計時？如何準(zhǔn)確計時？酶聯(lián)免疫反應(yīng)對于時間、溫度較為敏感，時間差異會對最后的顯色造成較大的影響，為了保證實(shí)驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，須注意準(zhǔn)確計時。準(zhǔn)確計時是指加完最后一孔，即刻計時，放入水浴鍋；計時一到即刻取出進(jìn)行下一步實(shí)驗操作。10試劑盒儲藏應(yīng)注意什么？試劑盒在和儲藏過程中都應(yīng)該保持 28的冷藏溫度。主要是因為試劑盒中的酶遇高溫會變性，導(dǎo)致酶的失活。此外，酶標(biāo)抗體在反復(fù)的升、降溫過程中也容易失活，導(dǎo)致效價降低，不利于測定。11原試劑盒與改進(jìn)版試劑盒對于篩查結(jié)果有何不同？這兩者對于篩

34、查結(jié)果無任何不同！對于同一標(biāo)本兩種試劑測出的風(fēng)險系數(shù)是一致的，只是兩者在風(fēng)險系數(shù)的具體數(shù)值上略有不同，但完全不影響高低危的判斷。五實(shí)驗操作中容易出現(xiàn)及解答1顯色太弱：孵育時間或者溫度不夠；顯色反應(yīng)時間太短；所用配制緩沖液的蒸餾水有問題（水質(zhì)不純含有較多的金屬離子或雜質(zhì)等）。2測定的重復(fù)性差（相同樣本 2 次測定結(jié)果不一致）這是典型的由測定操作引起，包括以下多種情況：加樣本及試劑量；不一致；加樣過快，導(dǎo)致液體飛濺發(fā)生污染；加錯樣本；加樣本及試劑時，加在上部非區(qū)；不同批號試劑盒中組分混用；孵育時間、洗板、顯色時間不一致；污染雜物（掉有異物）；酶標(biāo)儀濾光片不正確；標(biāo)本未完全凝固即加入，反應(yīng)出現(xiàn)蛋白凝

35、固或殘留血細(xì)胞，易出現(xiàn)假陽性反應(yīng)等。3白板（陽性對照不顯色） 漏加或錯加酶結(jié)合物；洗板液配制中出現(xiàn)問題，如量筒不干凈，含酶抑制物（如疊氮鈉）等。漏加顯色劑 A 或 B；終止液當(dāng)顯色液使用。4全部板孔均有顯色洗板不干凈；顯色液變質(zhì)；底物受酶污染；洗板液受酶等污染。由于酶聯(lián)免疫反應(yīng)受溫度、反應(yīng)時間的影響較大，再加之屬微量反應(yīng)系統(tǒng)，故需規(guī)范操作，操作越規(guī)范實(shí)驗數(shù)據(jù)就越準(zhǔn)確、越可靠。六酶聯(lián)免疫檢測的基本儀器配置移液器：1000l 、200l 、40 或 50l 移液器、200 或 300l 排槍誤差： 10以內(nèi)（以稱檢查）水浴箱：設(shè)置溫度 37，允許有1的誤差；經(jīng)常檢查水浴箱的顯示溫度和實(shí)測溫度是否一

36、致?；蚝銣嘏囵B(yǎng)箱：（內(nèi)置“濕盒”）設(shè)置溫度 37，允許有1的誤差；經(jīng)常檢查水浴箱的顯示溫度和實(shí)測溫度是否一致。洗板機(jī)（選配）：要求機(jī)器設(shè)置殘留液2ul。酶標(biāo)儀：經(jīng)常其光學(xué)部分，防止濾光片霉變，定期檢測校正 。電腦（預(yù)裝 2000 或 XP 系統(tǒng)）：用于連接酶標(biāo)儀，安裝和使用唐氏綜合征產(chǎn)前篩查系統(tǒng)。漩渦混合器（選配）：用于充分混勻待測標(biāo)本。唐氏綜合征產(chǎn)前篩查風(fēng)險估算和管理的使用及相關(guān)說明一簡介在運(yùn)用 ELISA 技術(shù)進(jìn)行篩查之后，還需要將實(shí)驗數(shù)據(jù)結(jié)合孕婦相關(guān)信息通過統(tǒng)計進(jìn)行綜合分析，通過整合各個生化指標(biāo)對系數(shù)的影響程度并根據(jù)統(tǒng)計學(xué)原理計算出綜合的系數(shù)。醫(yī)生和最后要根據(jù)系數(shù)的高低來決定是否需要做進(jìn)

37、一步的產(chǎn)前。下面就對“復(fù)旦”公司的唐氏綜合征產(chǎn)前篩查風(fēng)險估算和管理進(jìn)行簡要介紹。唐氏綜合征產(chǎn)前篩查風(fēng)險估算和管理是國家“十五”重點(diǎn)攻關(guān)項目成果。唐氏綜合征產(chǎn)前篩查風(fēng)險估算和管理不僅可以收集孕婦的信息，配合“甲胎蛋白、絨毛膜促激素定量檢測試劑盒（ELISA）”的使用還可以性，同時可以計算生神經(jīng)管缺損、18三體、計算孕婦生唐氏綜合征患兒的13三體等常見遺傳病患兒的可能性。它支持現(xiàn)行的 Windows95 至 Windows XP的各操作系統(tǒng)，由篩查中心設(shè)定、標(biāo)準(zhǔn)曲線查詢、病案數(shù)據(jù)查詢、數(shù)據(jù)同步、數(shù)據(jù)庫備份、參數(shù)設(shè)定及關(guān)于幫助七個功能塊組成，操作界面友好，功能強(qiáng)大。而且本公司還定期對進(jìn)行優(yōu)化、升級，

38、以確保為用戶提供最好的服務(wù)。二統(tǒng)計原理篩查的生物學(xué)原理是指標(biāo)在正常和唐氏妊娠時有量的差異。而篩查的基本技術(shù)原理則是把正常孕婦與唐氏患兒妊娠時篩查指標(biāo)的濃度差別通過統(tǒng)計學(xué)處理而轉(zhuǎn)換成系數(shù)。ikelihood method）。首先，要定量地測量最常用統(tǒng)計學(xué)方法是似然估計生化指標(biāo)在“正?！奔啊疤剖稀比后w中的濃度值。這樣，針對任何一個測得的濃度都可計算出該濃度值出自“正常”或“異?！比后w的可能性。具體計算方法是：得到某一濃度值在正?；虍惓Ｈ后w中出現(xiàn)的可能性之比，又叫做 Gaussian高度比。如下圖（圖 9）所示，假設(shè)一分析物（如 hCG）的濃度值分別在異常（2）和正常（1）人群中呈正態(tài)分布，兩個群體

39、之間有。如果測得濃度接近正常群體的平均值，則說明從正常人群中測到這一數(shù)值的可能性（圖中用 N1 的高度表示）要大于從異常人群中測到該數(shù)值的可能性（用 A1 的高度表示）；如果測得濃度接近異常群體的平均值，則說明從異常人群中測到這一數(shù)值的可能性（圖中用 A2 的高度表示）要大于從正常人群中測到該數(shù)值的可能性（用 N2 的高度表示）。圖 10 篩查假陽性率和系數(shù)之間的關(guān)系圖 10 中正常和唐氏兩個群體有很大的，正常人和唐氏的那部分為假陽性，而唐氏和正常人群的部分則是假。這個圖給兩個啟示：篩查指標(biāo)越多，越準(zhǔn)確，兩個群體的部分就越少，篩查成功率也就越高；如果不再增加篩查指標(biāo)，提高唐氏檢測率的唯一辦法就

40、是讓的正常孕婦接受產(chǎn)前診斷（提高假陽性率）。三 篩查效率的決定因為篩查的根本是正常和唐氏孕婦群體之間生化指標(biāo)的濃度差，所以生化指標(biāo)的濃度是篩查的。以下為一些對篩查成功率有較大影響的：定量檢測法很顯然，用來篩查的試劑和方法一定要能對孕婦生化指標(biāo)的濃度進(jìn)行非常精確的定量測量（如酶聯(lián)免疫吸附法，放射免疫法，或時間免疫分辨法等）。不能用半定量的方法（如免疫金標(biāo)法等）。半定量的方法是規(guī)定一個指標(biāo)的一個濃度閾值，大于閾值就為篩查陽性。這種方法是不夠精確的，因為它所給出的只是一個指標(biāo)的濃度值，而不是綜合了多個指標(biāo)的系數(shù)。臨床醫(yī)生需要得到綜合性的系數(shù)來指導(dǎo)是否需要做進(jìn)一步的產(chǎn)前。沒有系數(shù)，就不是有效篩查。人群

41、特異性的正常值 如圖 9 所示，一個有效的篩查指標(biāo)一定是在正常和唐氏孕婦群體有顯著的濃度差異。所以篩查的前提是知道正常群體篩查指標(biāo)的分布情況。不知道正常情況下的濃度范圍，就不能知道該指標(biāo)是否有所偏差，也就沒有辦法識別唐氏妊娠了。不同的種族有不同的生化指標(biāo)濃度分布模式。如果沒有針對性地使用同一個（白人的）濃度分布曲線就會導(dǎo)致篩查成功率的下降：的假陽性率會是白人的 2.5 倍，而亞洲人的假陽性率為白人的 2/3。所以，國外的試劑和不是不可以使用，但是在大規(guī)模使用以前，一定要做中國群體特異性的濃度，把群特異性的各孕周正常值輸入作為參考。嚴(yán)格的講，每個篩查中心所覆蓋的人群不同，使用的設(shè)備不同，操作不同

42、等都會影響篩查效率。所以，本有一個非常好的功能，就是可以經(jīng)過一段時間使用以后把在某個篩查中心得到的正常值輸入，這樣可以進(jìn)一步提高篩查成功率。試劑的配套常用的定量測量方法是酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），不同廠抗體和酶標(biāo)二抗不同，所以對抗原（AFP，家生產(chǎn)的試劑盒因為所用的hCG 等）的親和性也不一樣。因此，如果用不同廠家生產(chǎn)的試劑盒來測量同一個的篩查指標(biāo)的話，得到的結(jié)果也會有很大的差別。因此，篩查中心在選擇定量檢測試劑時還一定要注意和的配套問題。胎齡的準(zhǔn)確判別圖 11 顯示用末次法和超聲波法判定胎齡對唐氏篩查準(zhǔn)確性的影響。用超聲波定胎齡比較準(zhǔn)確，所以孕周特異性正常值的分布比較集中，正態(tài)分布曲線峰

43、值高而鋒底窄；用末次法定胎齡則誤差比較大，正態(tài)分布曲線峰值低而峰底寬。因此，以 uE3 一項篩查指標(biāo)為例，末次法定胎齡時的篩查成功率為 28%，而用超聲波法則可達(dá)到 37%。自己在國內(nèi)開展篩查的統(tǒng)計也顯示，末次法與用超法相比胎齡相差兩周以上的占 20%。顯然，胎齡誤差電腦就會用不同孕周的正常值來估算風(fēng)險，結(jié)果一定是誤差很大。胎齡不準(zhǔn)，再好的試劑和都無法給出準(zhǔn)確的風(fēng)險估算。圖 11 胎齡判定方法對篩查成功率的影響四 篩查效率的影響上述四點(diǎn)篩查效率的決定是系統(tǒng)性的，對篩查結(jié)果影響較大的主要因素。其中任何一項都會給篩查結(jié)果帶來不可挽回的影響。除了上述系統(tǒng)性的決定影響以外，還有一些與孕婦自身情況相關(guān)的

44、影響。包括：體重，吸煙史，史，雙胎妊娠，和前次妊娠史等。體重對篩查成功率的影響實(shí)際上是對濃度的影響。體重過重的孕婦，血容量大，篩查指標(biāo)的相對濃度就低。比如，體重每增加 20 公斤，AFP 濃度就下降 17%, uE3 下降 7%, hCG 濃度下降 16%。AFP 濃度下降會導(dǎo)致唐氏系數(shù)增高；但由于體重增加而同時造成的 hCG 濃度降低會使唐氏的風(fēng)險系數(shù)降低，兩系數(shù)的影響不超過 1%。所以體重對唐氏篩查個結(jié)果會相互抵消大部分，對的綜合影響并不很大。不過，中包括體重一項并不，又不增加任何實(shí)驗開銷，所以把體重也考慮在系數(shù)計算中了。有吸煙史的孕婦篩查指標(biāo)和一般群體也有不小的差別。吸煙對各指標(biāo)的影響程

45、度和性質(zhì)都有不同。吸煙者 hCG 含量比非吸煙群體低 18%,對 E3 和 AFP對吸煙因的影響很有限，分別比非吸煙群體低 4%和高 3%。素也有適當(dāng)?shù)目紤]。研制出的的孕婦篩查指標(biāo)的濃度較正常群體低。AFP 低患胰島素依賴型10%,uE3 低 7%,而 hCG 的濃度則在兩個群體間無顯著差異。雙胎妊娠篩查指標(biāo)的濃度一般是單胎妊娠的兩倍，所以在中對濃度和系數(shù)都有不同的處理。國外多次妊娠史和生過的孕婦篩查指標(biāo)和一般孕婦有微小差異。的對這些進(jìn)行了歸納，但是目前還沒有進(jìn)行有針對性的調(diào)節(jié)。五作說明“唐氏綜合征產(chǎn)前篩查風(fēng)險估算和管理”是專門為中國孕婦設(shè)計的唐氏綜合征產(chǎn)前篩查，該與唐氏綜合征產(chǎn)前篩查試劑配套

46、使用。該軟件所有的算法和功能都是根據(jù)本公司多年的研發(fā)、臨床驗證以及參考了許多國內(nèi)外的專業(yè)文獻(xiàn)得出的；而應(yīng)用主要是根據(jù)從孕婦那里得到的具體數(shù)據(jù)進(jìn)行風(fēng)險計算和病案管理。具體說明見用戶手冊。安裝界面說明1. Windows 升級程序的安裝首次安裝本需要升級如下 Windows 相關(guān)程序，這些升級程序你可以在自動安裝界面找到。這些程序是 Windows 的升級程序，與本公司無關(guān)。升級到 IE6.0：安裝 IE 5.01 或以上版本安裝 dotnet 框架：安裝.NET Framework 1.0 或以上版本升級數(shù)據(jù)庫組件：安裝Data Acs Components 2.6 或以上版本提示：在安裝本以前

47、，希望您確定您的電腦中安裝了以上程序。如果您的電腦未升級以上程序，將不能安裝本。以后如需重新安裝唐氏篩查，以上升級程序不必重新安裝。2. 使用說明查看本幫助文檔3. 安裝唐氏風(fēng)險估算即本的安裝，點(diǎn)擊界面中的“安裝唐氏風(fēng)險估算”，按照操作提示進(jìn)行安裝。1. 退出安裝完畢后對出此界面產(chǎn)前篩查流程及相關(guān)說明一產(chǎn)前篩查流程重新測定風(fēng)險二篩查對象所有孕婦均需參加產(chǎn)前篩查三抽血時間于 14-20 周抽血進(jìn)行孕中期篩查四產(chǎn)前門診在孕婦進(jìn)行孕期檢查時，及時了解孕產(chǎn)婦個人史、既往史、孕產(chǎn)史。同時，向其宣傳參加產(chǎn)前篩查預(yù)防遺傳病發(fā)生的重要性，并指導(dǎo)孕婦如何參加產(chǎn)前篩查。孕婦同意參加產(chǎn)前篩查之后，開單醫(yī)生應(yīng)詳細(xì)詢問

48、并準(zhǔn)確填寫有關(guān)孕婦的下列產(chǎn)前險隨訪B 超核準(zhǔn)孕周繼續(xù)妊娠低風(fēng)險險標(biāo)本產(chǎn)前檢查門診孕婦產(chǎn)前篩查實(shí)驗數(shù)據(jù)：（1）出生日期（2）體重（3）末次日期（公歷）（4）是否吸煙（5）是否雙胞胎或多胞胎（6）是否胰島素依賴型（7）是否有異常妊娠史（8）聯(lián)系方法在計算風(fēng)險率時必須考慮到某些特殊人群，這些人群包括是否胞胎，是否吸煙，是否胰島素依賴型以及是否為人工受孕。必須十分注意對胞胎的孕婦進(jìn)行解釋，因為其標(biāo)志物濃度比單胞妊娠高，當(dāng)估算風(fēng)險率時就不能用單胞胎的正常 MOM 值作參考。目前并沒有足夠有關(guān)雙胞胎或三胞胎的正常標(biāo)志物水平的資料可供參考，因此對雙胞胎或三胞胎妊娠的產(chǎn)前篩查仍然不可靠。對于患有胰島素依賴型的

49、孕婦來說，其體內(nèi)標(biāo)志物濃度相對平均水平要低，假定患兒的與正常的下降水平是一致的，可以用通常的方法來計算。另有資料表明，通過人工方法使受孕的孕婦同自然受孕的孕婦相比，其標(biāo)記物水平不一致，因此在對這些孕婦進(jìn)行解釋篩查結(jié)果時要值得注意。五標(biāo)本抽取孕中期（1420 周）孕婦外周血 2ml（孕周以 B 超或末次法計算），置采內(nèi)（不加抗凝劑），室溫靜置 12 小時后 2000 轉(zhuǎn)/分離心 15 分鐘，吸取。若不檢測，標(biāo)本應(yīng)低溫凍存，檢測時應(yīng)將標(biāo)本融化后混合均勻，并避免反復(fù)凍融。標(biāo)本在 4冰箱只能存放一個。已稀釋的不宜存放。所有標(biāo)本均看作有潛在性的物品，操作和保存時按國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。六篩查結(jié)果說明篩查結(jié)果

50、分為險和低風(fēng)險，與臨床檢驗上的陽性和結(jié)果有區(qū)別。險表示孕婦生的可能性較高，要引起高度警覺，但也沒有必要過分，更不能說已經(jīng)明確，而是需要建議孕婦進(jìn)行產(chǎn)前。做超聲波檢查確定孕周數(shù)，如仍然出現(xiàn)險，再進(jìn)一步進(jìn)行羊水穿刺和細(xì)胞檢查；低風(fēng)險表示孕婦生的可能較小，可以繼續(xù)妊娠，但不能完全排除生的可能性。七需做病產(chǎn)前的孕婦（1）產(chǎn)前篩查為險的孕婦（2）35 歲以上的高齡孕婦（3）有反復(fù)史的孕婦（4）曾經(jīng)懷過愚型兒的孕婦（5）夫婦一方患有性代謝疾病或已生過病兒的孕婦（6）過無腦兒等神經(jīng)管畸形患兒的孕婦（7）有遺傳性疾病史的孕婦（8）發(fā)育遲緩的孕婦八隨訪隨訪是篩查環(huán)節(jié)中最重要的步驟。為了確認(rèn)經(jīng)產(chǎn)前篩查的孕婦所生的

51、新生兒是否為愚型或神經(jīng)管畸形，每一個新生兒都要由新生兒科的?？漆t(yī)生加以確認(rèn)，并將確認(rèn)結(jié)果定期反饋到產(chǎn)前篩查中心。另外，對懷孕期間、引產(chǎn)及發(fā)生新生兒的孕婦都要爭取對進(jìn)行尸檢，明確原因。準(zhǔn)確的隨訪結(jié)果，可用于修篩查方案和篩查截斷值，進(jìn)而提高篩查檢出率。產(chǎn)前篩查常見問題解答1 問：為什么需要進(jìn)行產(chǎn)前篩查答：科學(xué)的產(chǎn)前篩查可以有效的避免出生缺陷的發(fā)生，這對于家庭、提高國家素質(zhì)都有著實(shí)際意義。2000 年國家正式出臺了出生缺陷干預(yù)工程，為了家庭的和社會的發(fā)展，請在中孕期（14-20 周）進(jìn)行產(chǎn)前篩查。2 問：誰會出生“愚型兒”答：其實(shí)，懷孕的孕婦每一個人都有機(jī)會生出“愚型兒”。它的發(fā)生具有偶然性、隨機(jī)性

52、，事前毫無癥兆，沒有史，沒有明確的毒物接觸史，發(fā)生率會隨孕婦的增高而升高。但要注意的是，雖然說高齡產(chǎn)婦生出“愚型兒”的機(jī)會比較高，卻有 85%以上的愚型兒是由小于 35 歲以下之年輕孕婦所生。因此，說每一個懷孕的孕婦都有可能生出愚型兒?。?）產(chǎn)品的檢測精度是多少3 問：已出生的“愚型兒”是否可以治療？答：目前為止，對“愚型兒”的治療仍然為力。防止此類疾病發(fā)生的辦法，就是在懷孕期間進(jìn)行產(chǎn)前篩查和必要的產(chǎn)前，盡早發(fā)現(xiàn)并采取相應(yīng)措施（如終止妊娠）。4 問：母血產(chǎn)前篩查對有無影響？答：母血產(chǎn)前篩查對是無性的、無任何影響的檢測方法。它只是從母親身上抽取2ml 靜脈血，通過測定中的某些特定標(biāo)志物，間接地判

53、斷患愚型的可能性。5 問：產(chǎn)前篩查的最佳時間及針對病種？答：孕中期（14-20）周測定 AFP/HCG，21-三體綜合征及開放性神經(jīng)管畸形、18-三體綜合征風(fēng)險率。6 問：唐氏綜合征篩查陽性結(jié)果的意義？答：篩查陽性結(jié)果表示綜合征的險。當(dāng)風(fēng)險率大于截斷值（1/275），結(jié)果為篩查陽性。大約每 100 個孕婦會有 5 個得到陽性結(jié)果。值得注意的是，不可因險而枉加判斷狀況，需建議險孕婦進(jìn)行遺傳，并根據(jù)的具體情況決定是否通過產(chǎn)前來確診。7 問：神經(jīng)管畸形篩查陽性結(jié)果的意義？答：篩查陽性結(jié)果表示懷神經(jīng)管畸形的險。當(dāng) AFP 水平大于同孕周正常水平的 2.5倍時，為篩查陽性。值得注意的是，不可因險而枉加判

54、斷狀況，需建議險孕婦通過詳細(xì)的超聲波檢查，或羊膜腔穿刺來確診。8 問：篩查結(jié)果的意義？答：如果唐氏綜合征的風(fēng)險率小于截斷值（1/275），AFP 水平小于 2.5 倍同孕周正常值，篩查結(jié)果為，表示綜合征或神經(jīng)管畸形的可能性非常小，將不被建議做產(chǎn)前。9 問：假、假陽性產(chǎn)生原因及解決方法答：假、假陽性產(chǎn)生原因：假陽性：對孕婦進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果顯示為高危病例但實(shí)際其妊娠為非唐氏患兒的病例；假：檢測結(jié)果顯示為正常但實(shí)際其妊娠是唐氏患兒的病例。假陽性率：假陽性/（真陽性+假）100%。+假陽性）100%；假率：假/（真的產(chǎn)品是根據(jù)指標(biāo)在正常和唐氏妊娠時有量的差異的原理，在篩查時測得孕婦中生化指標(biāo)的濃度（

55、AFP、hCG），然后將其通過統(tǒng)計學(xué)處理而轉(zhuǎn)化成系數(shù)。根據(jù)統(tǒng)計學(xué)方法，針對任何一個測得的濃度都可計算出該濃度值出自“正?！被颉爱惓！比后w的概率，即該孕婦情況屬于 “正?！被颉爱惓！比焉锏母怕?。如圖正常和唐氏兩個群體有很大的，正常人和唐氏的那部分為假陽性，而唐氏和正常人群的那部分為假。假陽性率定為 5%，此時的風(fēng)根據(jù)數(shù)萬例的中國孕婦臨床實(shí)驗結(jié)果，險系數(shù)為 1/275，檢出率最高在 85%左右。解決方法：假陽性：經(jīng)公司產(chǎn)品檢測結(jié)果為高危妊娠的孕婦，不建議其直接做人工，而建議其做羊水穿刺等進(jìn)一步確診，并且在確診過程中還可能發(fā)現(xiàn)神經(jīng)管缺損等其他異常妊娠。：假病例的實(shí)際發(fā)生率為 1/5*1/750=1/

56、3750。本產(chǎn)品的假假現(xiàn)象類似于藥物使用中的不良反映，是的現(xiàn)象，并且本產(chǎn)品是通過國家藥品監(jiān)督管理局（SDA）新藥生產(chǎn)批件，是國內(nèi)外唯一獲批產(chǎn)品。其假于國家規(guī)定的合法范圍。率是屬10 問：系統(tǒng)的重要參數(shù)答：檢出率80假陽性率（高危比例）5風(fēng)險系數(shù) Cutoff（截斷值）值1/27511 問：每次實(shí)驗都需要做標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品嗎答：是的，每次實(shí)驗都要求同時做標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品，不論一次檢測 1 份還是 40 份。標(biāo)準(zhǔn)品是定量的依據(jù)，質(zhì)控品是實(shí)驗準(zhǔn)確的保證。12 問：為什么將 cutoff 設(shè)在 1275的統(tǒng)計數(shù)據(jù)，將 cutoff 設(shè)在 1275 時，假陽性率恰為 5。答：根據(jù)這樣可以減少高危孕婦進(jìn)行羊膜

57、腔穿刺時的風(fēng)險（進(jìn)行羊膜腔穿刺的率為0.3-0.4%，即 1/3001/250）；因此，該產(chǎn)品的臨界值的確定是合理的。13問：優(yōu)勢是什么？其他產(chǎn)品是否可以使用的？答：的是基于數(shù)萬例中國孕婦臨床數(shù)據(jù)研發(fā)的。從法律角度，的已申請計算機(jī)著作權(quán)，也就是說該受法律保護(hù)的。復(fù)旦擁有該的全部權(quán)利。從產(chǎn)品角度，研究表明，在篩查過程中的主要參數(shù)都是具有人種特異性的，也就是說不同人種這些參數(shù)值是不同的。這些參數(shù)會極大的影響到最終的篩查結(jié)果。中的所有參數(shù)都是基于群，是“復(fù)旦”歷時三年統(tǒng)計了數(shù)萬例中國孕婦信息得到的，是完全的。由此得到的篩查結(jié)果才是最真是可靠的。其次，內(nèi)的所有參數(shù)都是基于與該相配套的試劑盒，同時的試劑

58、盒是一體的，因此的具有專一性，也就是說使用的軟件就只能使用的產(chǎn)品。應(yīng)用該而使用其他試劑盒會產(chǎn)生極其嚴(yán)重的后果，如漏檢率的增加。對于這些復(fù)旦不承擔(dān)任何責(zé)任。14 為什么采用二聯(lián)行篩查，而不是三聯(lián)答：增加 uE3 這個檢測指標(biāo)可以將檢出率提高 5 個百分點(diǎn)。但由于 uE3 的生產(chǎn)成本較高，增加該檢測指標(biāo)會使整個產(chǎn)品的成本增加 100，從而造成最終檢測費(fèi)用的大幅增加。產(chǎn)前篩查的目的是什么？就是希望可以造福，公司在研發(fā)本產(chǎn)品的時候就考慮到中國的國情不希望出現(xiàn)因為孕婦負(fù)擔(dān)不起篩查費(fèi)用而產(chǎn)下唐氏綜合征患兒的情況。因此選擇采用性價比最高的二聯(lián)行篩查。當(dāng)然，公司也正在研發(fā)新一代的篩查產(chǎn)品，是針對高端人群的，采

59、用了的 MASA 技術(shù)，主要是在早孕期加入 PAPPA 的檢測，然后中孕期采用 AFPhCGuE3，再結(jié)合 B 超檢測，這樣檢出率可以達(dá)到 95，而假陽性率（高危比例）僅有 5。復(fù)旦地址：生物浦東科技園區(qū)路 308 號：201203：-120958953355-110558953355-113058953355-1129傳真：ds：唐氏綜合征產(chǎn)前篩查系統(tǒng)目錄目錄2摘要4常用術(shù)語5第一章 唐氏綜合征概述4及其發(fā)病原因4一唐氏綜合征的二唐氏綜合征的臨床表現(xiàn)5三唐氏綜合征產(chǎn)生的遺傳學(xué)背景61減數(shù)不分離62細(xì)胞為嵌合體73易位8第二章唐氏綜合征產(chǎn)前篩查的重要意義10一唐氏的社會危害10二唐氏給家庭和社

60、會帶來的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)10第三章 國內(nèi)外唐氏產(chǎn)前篩查方法研究12一唐氏產(chǎn)前篩查發(fā)展史.二唐氏產(chǎn)前篩查方法研究 .1侵入性檢查122非侵入性檢查13三小結(jié)錯誤！未定義書簽。第四章 唐氏綜合征產(chǎn)前的技術(shù)發(fā)展.一 熒光原位雜交技術(shù)261 絨毛組織和羊水細(xì)胞的 FISH .2 孕婦外周血中細(xì)胞檢測 .二 引物介導(dǎo)的原位標(biāo)記28三PCR 擴(kuò)增特異性片段28唐氏綜合征產(chǎn)前篩查系統(tǒng)介紹18第五章一出生缺陷干預(yù)工程相關(guān)知識背景18二唐氏綜合征產(chǎn)前篩查系統(tǒng)介紹191 系統(tǒng)的和簡介202 唐氏綜合征產(chǎn)前篩查系統(tǒng)系數(shù)測算原理及影響. 21三其它同類產(chǎn)品情況介紹271時間分辨熒光272化學(xué)發(fā)光免疫測定法273免疫金標(biāo)法28