《中國(guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀-梁翠榮

1、?中國(guó)藥典?2022版二部生化藥品增修訂概況與解讀梁翠榮山東省藥品檢驗(yàn)所第一頁(yè)，共二十五頁(yè)。2022版藥典宗旨：提高藥典質(zhì)量，應(yīng)用高新技術(shù)，解決平安隱患，趕超國(guó)際水平。第二頁(yè)，共二十五頁(yè)。生化藥的定義 生化藥主要從動(dòng)、植物及微生物發(fā)酵提取的、化學(xué)合成、生物-化學(xué)半合成或用現(xiàn)代生物重組技術(shù)制得的一類藥品。 2022版藥典收載品種氨基酸及其衍生物核苷酸及其衍生物酶與輔酶多肽及蛋白類多糖及脂類第三頁(yè)，共二十五頁(yè)。增修訂概況1.凡例:增加對(duì)制法的要求2.正文:收載標(biāo)準(zhǔn)189個(gè)，增加36個(gè)，修訂144個(gè), 刪除2個(gè)。3.附錄:增加2個(gè) (1)蛋白質(zhì)含量測(cè)定法 (2)合成多肽中的醋酸測(cè)定法 修訂1個(gè) 電泳

2、法增訂第六法 等電聚焦水平板電泳法第四頁(yè)，共二十五頁(yè)。凡例制定“制法要求 的準(zhǔn)那么1.用于注射用的或直接與傷口接觸的提取類原料(凝血酶凍干粉)，應(yīng)在原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中增加“制法要求。2.其他劑型不在其相應(yīng)原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中增訂“制法要求，而由凡例統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。第五頁(yè)，共二十五頁(yè)。凡例制法項(xiàng)下主要記載藥品的重要工藝要求和質(zhì)量管理要求所有藥品的生產(chǎn)工藝應(yīng)經(jīng)驗(yàn)證,并經(jīng)國(guó)務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門(mén)批準(zhǔn),生產(chǎn)過(guò)程均應(yīng)符合GMP的要求。來(lái)源于動(dòng)物組織提取的藥品，其所用動(dòng)物種屬要明確，所用臟器均應(yīng)來(lái)自經(jīng)檢疫的健康動(dòng)物，涉及牛源的應(yīng)取自無(wú)牛海綿狀腦病地區(qū)的健康牛群；來(lái)源于人尿提取的藥品，均應(yīng)取自健康人群。上述藥品均應(yīng)有明確

3、的病毒滅活工藝要求以及質(zhì)量管理要求。直接用于生產(chǎn)的菌種、毒種、來(lái)自人和動(dòng)物的細(xì)胞、DNA重組工程菌及工程細(xì)胞,來(lái)源途徑應(yīng)經(jīng)國(guó)務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門(mén)批準(zhǔn),并應(yīng)符合國(guó)家有關(guān)的管理標(biāo)準(zhǔn)。第六頁(yè)，共二十五頁(yè)。附錄蛋白質(zhì)含量測(cè)定法凱氏定氮法福林酚法雙縮脲法2，2-聯(lián)喹啉-4，4-二羧酸法考馬斯亮藍(lán)法紫外-可見(jiàn)分光光度法第七頁(yè)，共二十五頁(yè)。 附錄注意各測(cè)定法依據(jù)的蛋白質(zhì)反響原理不同，線性范圍不同，同時(shí)由于各品種的蛋白質(zhì)性質(zhì)，結(jié)構(gòu)的迥異導(dǎo)致同品種采用不同的測(cè)定方法其結(jié)果有較大差異。不同品種應(yīng)針對(duì)自身蛋白質(zhì)特性選擇適宜的測(cè)定方法并做相應(yīng)的方法學(xué)驗(yàn)證。常用的對(duì)照品有牛血清白蛋白、人血白蛋白、酪蛋白、免疫球蛋白及各

4、品種的自身對(duì)照品。應(yīng)盡可能選用與待測(cè)品種蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)相同或相近的蛋白質(zhì)作對(duì)照品。第八頁(yè)，共二十五頁(yè)。附錄合成多肽中的醋酸測(cè)定法 為合成多肽中的醋酸檢查，提供統(tǒng)一的方法。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：C18柱 210nm檢測(cè) 流動(dòng)相A: 0.07%磷酸溶液(pH3.0) 流動(dòng)相B:甲醇 理論板數(shù)按醋酸峰計(jì)算不低于2000 梯度洗脫 1.2ml/mlin 時(shí)間(min)流動(dòng)相A(%)流動(dòng)相B(%)0595551050501020505020229552230955第九頁(yè)，共二十五頁(yè)。附錄注意對(duì)照品溶液：取冰醋酸適量，精密稱定，用流動(dòng)相A-流動(dòng)相B(95:5)的混合溶液制成約0.1mg/ml濃度可隨供試

5、品中醋酸的含量適當(dāng)調(diào)整供試品溶液：按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法制備。醋酸峰的保存時(shí)間約在34min，采用梯度洗脫，主要是讓多肽組分從色譜柱中洗脫出來(lái)。第十頁(yè)，共二十五頁(yè)。附錄合成多肽 醋酸限度生長(zhǎng)抑素 3.0%15.0%胸腺法新胸腺肽1 不得過(guò) 5.0%鮭降鈣素 4.0%15.0%醋酸丙氨瑞林 不得過(guò) 7.5%醋酸奧曲肽 5.0%12.0%第十一頁(yè)，共二十五頁(yè)。2022版生化藥標(biāo)準(zhǔn)品種數(shù)匯總類別2005版標(biāo)準(zhǔn)（品種）2010版標(biāo)準(zhǔn)（品種）增加標(biāo)準(zhǔn)（品種）標(biāo)準(zhǔn)（品種）增長(zhǎng)%刪除氨基酸及其衍生物 42（22）52（25）10（3）23.8%（14%）核酸及其衍生物 44（10）51（11）7（1）15.

6、9%（10%）酶與輔酶 28（11）34（14）6（3）21.4%（27%）多肽、蛋白 26（11）30（13）8（3）30.8%（27%）2多糖 15（5）19（6）3（1）20.0%（20%）脂 2（1）4（2）2（1）100.0%（100.0%）總數(shù) 157（61）189（71）36（12）22.9%（19.6%）2第十二頁(yè)，共二十五頁(yè)。氨基酸及其衍生物品種與劑型 氨基酸收載品種25個(gè)較全，幾乎包含國(guó)內(nèi)外所有的氨基酸原料， 包含的劑型有片劑、注射液、膠囊劑、滴眼液、顆粒劑、 口服溶液 劑及沖洗液。工程 鑒別：?jiǎn)我话被崞贩N的標(biāo)準(zhǔn)中統(tǒng)一增訂了專屬性較強(qiáng)的TLC法， 有的品種同時(shí)用紅外光譜法

7、；氨基酸衍生物用紅外光譜法。 檢查：其他AA TLC法和HPLC法 局部品種熱原修訂為細(xì)菌內(nèi)毒素 滴眼液品種增訂滲透壓摩爾濃度 含量測(cè)定：滴定法、比色法及HPLC 法。第十三頁(yè)，共二十五頁(yè)。核苷酸及其衍生物品種與劑型 收載品種11個(gè)和劑型較全，劑型有片劑片、 含片、 咀嚼片、注射劑小針、輸液、粉針膠囊劑、乳膏劑、滴眼液、滴鼻液、顆粒劑及口服溶液劑。 工程 檢查：溶液的澄清度與顏色 有關(guān)物質(zhì) TLC法和HPLC法 殘留溶劑、 熾灼殘?jiān)?輸液、滴眼液品種增訂滲透壓摩爾濃度 復(fù)方葡萄糖輸液增訂5-羥甲基糠醛(HPLC法) 局部品種熱原修訂為細(xì)菌內(nèi)毒素 含量測(cè)定：UV及HPLC 法。第十四頁(yè)，共二十

8、五頁(yè)。鹽酸阿糖胞苷上海所起草，天津所、廣東所復(fù)核，到達(dá)國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)。增訂工程6項(xiàng)： 1.溶液的澄清度與顏色 2.含氯量電位滴定法：按無(wú)溶劑的枯燥品計(jì)算，含氯量應(yīng)為 12.4% 12.9%。 3.有關(guān)物質(zhì)HPLC法 4.殘留溶劑GC法：甲醇0.3%、乙醇0.5% 5.熾灼殘?jiān)?不得過(guò)0.5% 6.重金屬附錄 H 第二法不得過(guò)百萬(wàn)分之二十。含量測(cè)定：由UV-E法修訂為HPLC法。第十五頁(yè)，共二十五頁(yè)。有關(guān)物質(zhì)HPLC法色譜條件： C18柱 254nm檢測(cè) 流動(dòng)相A:磷酸鹽緩沖液(pH7.0 -甲醇98：2 流動(dòng)相B:磷酸鹽緩沖液(pH7.0 -甲醇70：30測(cè)定方法：加校正因子的主成分自身對(duì)照法 能看

9、出雜質(zhì)3個(gè)尿嘧啶、尿苷、阿糖尿苷對(duì)鹽酸阿糖胞苷峰的相對(duì)保存時(shí)間分別為0.55 、1.14 、1.62；校正因子分別為2.9 、1.72 、1.54；未知雜質(zhì)2個(gè)，對(duì)鹽酸阿糖胞苷峰的相對(duì)保存時(shí)間約為0.38 、0.43的校正因子均為1.72 ；其他雜質(zhì)峰的校正因子均按1.1計(jì)算。計(jì)算公式：限度：尿嘧啶、尿苷均不得過(guò)0.1%；阿糖尿苷不得過(guò)0.3%；其他單個(gè)雜質(zhì)不得過(guò)0.1%；所有雜質(zhì)總和不得過(guò)0.3%。 第十六頁(yè)，共二十五頁(yè)。酶與輔酶品種與劑型 收載品種14個(gè)，劑型有片劑片、 腸溶片、注射劑(小針、粉針)、膠囊劑(軟膠囊、膠囊) 、顆粒劑。 工程 檢查：溶液的澄清度與顏色 有關(guān)物質(zhì) (純度、高分

10、子物質(zhì))HPLC法(分子排組色譜法) 局部品種熱原修訂為細(xì)菌內(nèi)毒素 效價(jià)測(cè)定：每1mg的效價(jià)不得少于XX單位，修訂為每1 mg中XX 酶的活力不得少于XX單位。 如抑肽酶,按枯燥品計(jì)算,每1mg的效價(jià)不得少于3.0單位,修訂 為按無(wú)水物計(jì)算,每1mg抑肽酶的活力不得少于3.0單位。第十七頁(yè)，共二十五頁(yè)。抑肽酶該品種由上海藥檢所起草Chp2005、Bp2022/Ep6.0、USP32版均收載，本版繼續(xù)收載，但依據(jù)USP作了三個(gè)方面的修訂。有效控制抑肽酶產(chǎn)品的純度，使標(biāo)準(zhǔn)的制定到達(dá)或超過(guò)國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)。1.檢查高分子蛋白USP32 關(guān)鍵是采用三根串聯(lián)Gel色譜柱TSK-G4000SWXL柱 柱溫35 2

11、80nm檢測(cè) 流動(dòng)相:3mol/L醋酸溶液 流速1.0ml/min, 二聚體112 加熱2小時(shí))相對(duì)RT0.9，別離度1.0，拖尾因子2.5。 限度：高分子蛋白R(shí)T抑肽酶峰的總量不得大于1.0%。2.檢查去丙aa-去甘aa-抑肽酶和有關(guān)物質(zhì) 參照USP32采用新增附錄毛細(xì)管電泳法：我國(guó)第一個(gè)用該法上藥典的品種。3.檢查N-焦谷氨酰-抑肽酶和有關(guān)物質(zhì)參照USP32 色譜柱：TSK-GEL IC-Cation-SW 柱溫40 210nm檢測(cè) 柱溫：40 流動(dòng)相：A磷酸鹽緩沖液 B磷酸鹽-硫酸銨緩沖液 梯度洗脫 相對(duì)RT0.9，別離度1.0，拖尾因子2.0。 限度：不得大于1.0%；單個(gè)未知雜質(zhì)不得

12、大于0.5%；未知雜質(zhì)總和不得大于1.0%第十八頁(yè)，共二十五頁(yè)。多肽及蛋白類品種與劑型 收載品種13個(gè)，少局部為臟器提取的激素、肽類。平安性無(wú)法保障的品種如垂體后葉粉、注射液等刪除。合成肽類藥品，純度較高、質(zhì)量?jī)?yōu)良，大局部質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與國(guó)際接軌。劑型多為注射劑。工程 高分子蛋白 有關(guān)物質(zhì) 相關(guān)蛋白 蛋白質(zhì)就是由多個(gè)氨基酸殘基組成的多肽鏈。一般以51個(gè)aa殘基，分子量為5778的胰島素劃分,高于此分子量的稱為蛋白,小于此的為肽) 含量測(cè)定：HPLC法，局部肽和小分子蛋白中的生物活性、生 物鑒別由化學(xué)測(cè)定法代替。 金屬離子：原子吸收光譜法 平安性檢查：細(xì)菌內(nèi)毒素、異常毒性、微生物限度、過(guò)敏等。第十九頁(yè)

13、，共二十五頁(yè)。胰島素ChP2022版依據(jù)USP33、EP6.0標(biāo)準(zhǔn)，參照2005版分別對(duì)來(lái)源、性狀、鑒別 、檢查項(xiàng)下含量測(cè)定項(xiàng)、活性檢查作了修訂和補(bǔ)充 該品種江蘇所起草，中檢所復(fù)核1.鑒別：由HPLC法改為肽圖分析,經(jīng)V8酶水解胰島素,對(duì)其分子碎片 中的肽圖進(jìn)行分析,該法能確定不同種屬的胰島素,專屬性強(qiáng)。2相關(guān)蛋白：參照USP32、EP6.0由聚丙烯酰胺凝膠電泳改為別離度 較好的HPLC法，214nm檢測(cè) 梯度洗脫 限度：A21脫酰胺胰島素5.0%，其它相關(guān)蛋白5.0%。3.高分子蛋白：將一般柱色譜改為分子排阻色譜，色譜條件與系統(tǒng)適 用性試驗(yàn)均與ChP2005重組人胰島素標(biāo)準(zhǔn)一致。 限度：保存

14、時(shí)間小于胰島素的所有峰面積之和1.0%。4.鋅檢查：由比色法該為原子吸收光譜法。5.增加細(xì)菌內(nèi)毒素、微生物限度檢查。6.含量測(cè)定：用HPLC法代替生物活性測(cè)定法?？紤]到胰島素生物活性的重 要性，原料在檢查項(xiàng)中增加生物活性測(cè)定，參考USP32，動(dòng)物數(shù)減半，生物統(tǒng)計(jì)簡(jiǎn)化，作為限度實(shí)驗(yàn)，使該法常規(guī)測(cè)定時(shí)既能省時(shí)、省力、省本錢(qián)，又能有效控制質(zhì)量。第二十頁(yè)，共二十五頁(yè)。多糖及脂類糖類主要分類 單糖(簡(jiǎn)單的多羥基醛或酮如六碳糖(葡萄糖、果糖)、五碳糖(核糖) 聚糖(單糖縮合而成)，20個(gè)單糖結(jié)構(gòu)以下的為低聚糖,蔗糖、麥芽糖等, 20個(gè)以上的為多糖。純多糖：右旋糖酐、香菇多糖； 雜多糖：肝素、硫酸軟骨素、透

15、明質(zhì)酸等。品種與劑型 多糖類 硫酸軟骨素鈉、片、膠囊 肝素鈉、注射液、乳膏 右旋糖酐鐵、片、注射液 右旋糖酐20、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液 右旋糖酐40、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液 右旋糖酐70、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液 脂類 前列地爾、注射用前列地爾 多烯酸乙酯、軟膠囊第二十一頁(yè)，共二十五頁(yè)。增修訂工程金屬離子：原子吸收光譜法有關(guān)物質(zhì)：HPLC比活 肝素鈉150U/mg170U/mg含量測(cè)定：HPLC、GC比旋度 肝素鈉不小于+35 不小于+50殘留溶劑輸液品種增訂滲透壓摩爾濃度復(fù)方葡萄糖輸液增訂5-羥甲基糠醛UV法甲氧基苯胺值第二十二頁(yè)，共二十五頁(yè)。硫酸軟骨素鈉中檢所起草 該品種質(zhì)量指

16、標(biāo)有顯著性提高,含量測(cè)定從原來(lái)比色法的40%左右，直提至90%口服。用專一性強(qiáng)且靈敏的酶解法，分解硫酸軟骨素成A、B、C，再用離子色譜法別離硫酸軟骨素成B、C和A，按外標(biāo)法，以峰面積之和計(jì)算，使硫酸軟骨素含量為90%105% 。靈敏度優(yōu)于USP 和EP，光電滴定法，因無(wú)專屬性，其它多糖混雜，使硫酸軟骨素含量偏高。含量測(cè)定：離子色譜法 色譜條件：強(qiáng)陰離子交換柱 232nm檢測(cè) 梯度洗脫 流動(dòng)相A:水(稀鹽酸調(diào)pH值至3.5 流動(dòng)相B: 2mol/L氯化鈉溶液(稀鹽酸調(diào)pH值至3.5 酶解法：供試品用水制成100mg/ml溶液，取100l，加Tris(pH8.0)緩沖液800l，再加硫酸軟骨素AB

17、C酶用Tris(pH8.0)緩沖液制成1單位/ml溶液液100l， 37水浴反響1小時(shí)，100 加熱5分鐘，冷卻，離心20min(10000r/min)，取上清液，濾過(guò)，進(jìn)樣20l。另取硫酸軟骨素對(duì)照品，同法操作。第二十三頁(yè)，共二十五頁(yè)。甲氧基苯胺值測(cè)定原理 油脂中的不飽和脂肪酸，被氧化成過(guò)氧化物，過(guò)氧化物進(jìn)一步分解生成醛類或酮類，醛類或酮類可與對(duì)甲氧苯胺反響生成在350nm有吸收的物質(zhì)。測(cè)定方法避光快速操作 精密稱取供試品約0.50g(W)，置25ml量瓶中，用異辛烷稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取供試品溶液5ml置具塞試管中，再精密參加0.25%4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液臨用新配1ml，加塞，振搖，避光放置10分鐘；另精密量取異辛烷5ml代替供試品溶液，同法操作，制成試劑空白溶液。以試劑空白溶液作空白，在350n