芥菜中總黃酮的提取及其對羥自由基的清除作用研究

1、芥菜中總黃酮的提取及其對羥自由基的去除作用研究【摘要】目的討論芥菜中總黃酮的提娶鑒別方法及對羥自由基去除作用，以充分利用芥菜植物資源，防止資源的浪費。方法采用超聲波乙醇浸提法從芥菜中提取黃酮類物質(zhì)，對所提取的黃酮類物質(zhì)進展驗證，并用分光光度法測定含量，用芥菜總黃酮對羥自由基去除作用進展實驗。結(jié)果測得樣品中總黃酮的含量=0.4450g/l，回收率為100.7%，其純度和產(chǎn)率均較高。結(jié)論該方法采用全物理過程，無任何污染，是提取芥菜中黃酮類物質(zhì)的有效途徑。芥菜總黃酮提取液對Fentn體系產(chǎn)生的H自由基有很好的去除作用?！娟P(guān)鍵詞】超聲波提取芥菜總黃酮鑒別自由基去除ExtratinfTtalFlavne

2、frBragiajuneassandItsEffetsnSavengingfHydrxylRadialsAbstrat：bjetiveTakeuseftheresuresfBragiajuneass，avidastingandapprahtheextratinfttalflavannefBragiajuneassanditseffetsnsavengingfhydrxylradials.ethdsTheflavnidsereextratedbyethanlastheslventfrBragiajuneassithultrasniaveandethanlextratin.Usingspetrph

3、tetrytextratandhektheflavnefBragiajuneass.ResultsTheeffetfextratsfBragiajuneasssavengingfhydrxylradialsasstudiedBythisethdgettingthedensityfthettalflavnefBragiajuneassas=0.4450g/landtheratefreveryas100.7%.Theuteandthepurityftheflavneereallveryhigh.nlusinThisethdisapurelyphysialpressandhasntanyplluti

4、n.ItisanidealaytextrattheflavnefBragiajuneass.TtalflavnefrBragiajuneasshaseffetsnsavengingnhydrxylradials.Keyrds：Ultrasniavetreatent；Bragiajuneass；Ttalflavne；Identifiatin；Hydrxylradial；Savenging芥菜Bragiajuneass又名芥、雪里蕻、皺葉芥、黃芥，為十字花科植物芥菜BrassiajuneaL.zern.etss油芥菜BrassiajuneaL.zern.etss.Var.grailisTsenet

5、Lee的嫩莖葉。我國各地均有栽培。春季采嫩葉洗凈，民間常用之做腌菜。芥菜性味辛、溫。歸肺、胃、腎經(jīng)。具有利氣豁痰、溫中健脾、驅(qū)風散血、消腫止痛等成效。主治寒痰咳嗽、胸膈不利、胃寒少食、腹瀉、感冒風寒及跌打損傷、關(guān)節(jié)疼痛等癥1。目前有研究說明2：芥菜中含黃酮苷、酸性樹脂、鞣質(zhì)等，其中黃酮類等有效成分對治療冠心并老年性癡呆、腦血栓、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和去除自由基、抑菌、抗癌等方面有顯著效果，無毒副作用，并以此開發(fā)出多種藥品和保健食品。當前國內(nèi)外對于芥菜中黃酮類化合物的研究還相對缺乏。目前有用乙醇抽提法提取芥菜中的黃酮類物質(zhì)的報道3，但是，該方法提取的時間較長、工藝較復(fù)雜、提取效率較低。近年來，超聲技術(shù)應(yīng)

6、用于提取植物中的生物堿、苷類、生物活性物質(zhì)、動物組織漿的毒質(zhì)等研究已有報道4，5，說明其具有耗能低、效率高、不破壞有效成分的特點。很多研究說明，利用超聲波產(chǎn)生的強烈振動、高的加速度、強烈的空化效應(yīng)、攪拌作用等，可加速植物材料中的有效成分進入溶劑，從而增加有效成分的提取率，縮短提取時間，并且還可防止高溫對提取成分的影響5，但超聲技術(shù)應(yīng)用于提取芥菜中黃酮類物質(zhì)的研究尚未見報道。本文報道用超聲波提取芥菜總黃酮、鑒別及提取物總黃酮對羥自由基去除作用。1儀器與試劑1.1儀器KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器超聲工作頻率40kHz，江蘇省昆山市超聲儀器；UV-755B紫外可見分光光度計上海分析儀器總廠；Z

7、F-I型三用紫外分析儀(上海顧村光電儀器廠)；SHB-III循環(huán)水式多用真空泵鄭州長城科工貿(mào)。1.2試劑95%乙醇AR；亞硝酸鈉AR；硝酸鋁AR；氫氧化鈉AR；三氯化鋁AR；鹽酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；乙酸鎂AR；鎂粉AR；正丁醇AR；蘆丁標準品中國藥品生物制品檢定所；雙氧水AR；硫酸亞鐵AR；水楊酸AR；芥菜，采自廣西百色市。2方法與結(jié)果2.1總黃酮成分提取取新穎芥菜，烘干，粉碎。稱取芥菜粉末6g，加80l95%乙醇，用超聲波提取2.5h，抽濾。濾渣再加80l95%乙醇，用超聲波提取2.5h，抽濾，合并濾液，減壓回收乙醇至濾液僅剩25l為止，放置250l容量瓶中，用60%乙

8、醇稀釋至刻度，得樣品液。2.2測定方法根據(jù)以蘆丁為對照品測定芥菜中總黃酮的含量，參加鋁離子試劑，同時控制適宜pH值，使黃酮化合物與鋁鹽形成絡(luò)合物，在可見光區(qū)能獲得穩(wěn)定的特征吸收峰。2.3定量實驗-總黃酮的含量測定2.3.1波長的選擇取樣品液適量，在0.30l5%亞硝酸鈉溶液存在的堿性條件下，經(jīng)硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比液在420700n波長范圍測定絡(luò)合物的吸光度，絡(luò)合物于510n波長處有最大吸收，故測定時選用此波長。2.3.2標準曲線的繪制分別精細汲取蘆丁對照液0.10g/l0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00l于10.00l容量瓶中，分別參加5%亞硝酸鈉溶

9、液0.30l，搖勻，靜置6in；再加10%硝酸鋁溶液0.30l，搖勻，靜置6in；再加4%氫氧化鈉溶液4.00l，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12in，以試劑作空白參比液，于510n處測吸光度。結(jié)果見表1。表1紫外可見分光光度計測定蘆丁對照液吸光度結(jié)果略根據(jù)表1得回歸方程：A=-0.0221+13.7578，r=0.9999。2.3.3提取物含量的測定精細汲取樣品液1.00l，置10.00l容量瓶，按標準曲線的制備方法測定吸光度,A=0.368，根據(jù)回歸方程：A=-0.0221+13.7578，r=0.9999計算樣品中總黃酮的含量=0.4450g/l。2.3.4回收率實驗精細量取樣品液

10、1.00l，參加標準蘆丁對照品1.00l0.10g/l，同前樣品測定操作方法測定吸光度，求出回收率為100.7%。2.4定性實驗-總黃酮的鑒別2.4.1顏色反響紫外光下呈色反響：取該樣品溶液點在濾紙上，在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈灰褐色并有熒光斑點。濃氨水反響：取該樣品溶液點在濾紙上，將濾紙在氨水上方熏30s，立即在紫外光下觀察，呈極明顯的黃褐色熒光斑點。三氯化鋁反響：取樣品溶液點在濾紙上，滴加三氯化鋁乙醇溶液，吹干。在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈黃色熒光斑點。乙酸鎂反響：取樣品溶液點在濾紙上，滴加1%乙酸鎂甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黃色斑點。鹽酸-鎂粉反響：取乙醇提取液1l于試管中加鎂

11、粉，再參加濃鹽酸數(shù)滴1次參加，在泡沫處呈紫紅色。2.4.2紙層析取樣品溶液10l點在濾紙上。用正丁醇醋酸水=415體積比為展開劑，上行展開5h，取出晾干。噴1%氯化鋁乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可見熒光斑點。2.5總黃酮提取物對H去除作用參照Fentn反響的方法建立反響體系模型6，利用H22與Fe2+混合產(chǎn)生H，但由于H具有很高的反響活性，存活時間短，假設(shè)在反響體系中參加水楊酸，就能有效地捕捉H，并產(chǎn)生有色產(chǎn)物。反響式如下：H22+Fe2+Fe3+H+H-該產(chǎn)物在510n處有強吸收，假設(shè)在此反響體系中參加具有去除H功能的被測物，便會與水楊酸競爭H，從而使有色產(chǎn)物生成量減少，采用固定反響時間法，

12、在一樣體積的反響體系(8.8l/LH221l，9l/LFe2+ll，9l/L1l水楊酸-乙醇溶液)參加一系列不同濃度的芥菜總黃酮提取液，并以蒸餾水為參比，與試劑空白液比擬，在510n處測量各濃度下的吸光度，便能測定被測物(總黃酮)對H的去除作用，其去除率計算公式：去除率()=A0-AxA0100%以實驗的提取液作為樣品，分別取不同體積的樣品定容到101分別測其對H的去除作用。從圖1中可看出，芥菜總黃酮提取液對由Fentn體系產(chǎn)生的H有一定的去除作用，隨著芥菜總黃酮提取液濃度的增加，對H自由基的去除才能也增強，說明當黃酮類物質(zhì)的濃度增加時，其去除率也增大。3討論實驗結(jié)果說明，本實驗方法工藝簡單，

13、回收率為100.7%，利用本文所提供的超聲波提娶純化方法而得到的黃酮類物質(zhì)其純度較高。超聲波可以強化乙醇浸提法，到達省時、高效、節(jié)能的目的，此方法采用全物理過程，無任何污染，是一條理想的提取黃酮類物質(zhì)的途徑，具有廣闊的應(yīng)用前景。黃酮類化合物是一大類天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分。在自然界中最常見的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃醇、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷及新黃酮類等6。天然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，能通過血腦屏障，能進入脂肪組織，進而表達出如下功能：消除疲勞、保護血管、防動脈硬化、擴張毛細血管、疏通微循環(huán)、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大腦及其

14、他臟器細胞的功能。黃酮類化合物具有抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管疾并抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、治療骨質(zhì)疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用7，8。近年來，世界上掀起了植物藥開發(fā)的熱潮，植物藥以其天然低毒的特點倍受青睞，而黃酮類化合物以其廣譜的藥理作用引人矚目。本實驗結(jié)果說明，芥菜中含有較為豐富的黃酮，其提取物總黃酮對羥自由基具有很好的去除作用。因此，有廣泛的開發(fā)和利用價值，值得綜合利用，加強資源開發(fā)?！緟⒖嘉墨I】1吳文青，李正軍.食用本草.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2022：65.2夏杏洲，張輝，魏傳晚.榕樹葉中黃酮類化合物的提取條件研究J.食品研究與開發(fā),2002,23(5):35.3謝麗玲，朱炎坤.葉芥菜中總黃酮含量測定的研究J.儀器儀表與分析監(jiān)測，2000，3：61.4劉祥義.超聲波提取元寶