實驗三蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)

1、實驗三、蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)11、實驗?zāi)康氖煜さ鞍踪|(zhì)的沉淀反應(yīng)進一步掌握蛋白質(zhì)的性質(zhì)22、實驗難點與重點2.1蛋白質(zhì)沉淀的方法有哪些2.2蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)的原理33、實驗原理蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定的因素:水化膜、表面電荷加入適當試劑使蛋白質(zhì)分子處于等電點狀態(tài)或失去水化層，或者與某些試劑結(jié)合成不解的鹽后，蛋白質(zhì)的膠體溶液就不穩(wěn)定，并將產(chǎn)生沉淀。4改變蛋白質(zhì)表面的水化層及電荷的主要途徑有：改變?nèi)芤旱碾x子強度改變?nèi)芤旱膒H改變?nèi)芤旱慕殡姵?shù)改變?nèi)芤旱臏囟鹊鞍踪|(zhì)沉淀可逆與不可逆的區(qū)別5能使蛋白質(zhì)沉淀的試劑有：高濃度中性鹽 （NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl（中和蛋白質(zhì)的電荷，可逆） 這種加入鹽使蛋白質(zhì)沉

2、淀析出的現(xiàn)象稱為鹽析，用于蛋白質(zhì)分離制備有機溶劑 丙酮、乙醇 (破壞蛋白質(zhì)水膜，用于在提取DNA等時去除蛋白質(zhì)，冰浴條件沉淀蛋白質(zhì)短時間內(nèi)是可逆的，否則不可逆)重金屬鹽 Hg2+、Ag+、Pb+ （與蛋白質(zhì)中帶負電荷時，形成不易溶解的鹽,或改變蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)）生物堿試劑沉淀：三氯乙酸，苦味酸，鎢酸等（必須在溶液pH大于pI時，蛋白質(zhì)帶正電荷，可以與生物堿試劑結(jié)合）加熱變性沉淀：豆腐等電點沉淀：Glu的生產(chǎn)64、實驗步驟蛋白質(zhì)溶液1mlNaCl晶體少許，溶解，95%乙醇2ml加入混勻觀察沉淀產(chǎn)生加水沉淀是否溶解？需要先加蛋白質(zhì)溶液，再加飽和硫酸銨，否則清蛋白與球蛋白會同時析出除去球蛋白加多變成

3、鹽析，作用中和電荷，加速沉淀蛋白質(zhì)溶液5 ml加入5 ml 飽和硫酸銨溶液加入微微搖動，靜置數(shù)分鐘觀察沉淀產(chǎn)生為球蛋白過濾濾液中加硫酸銨粉末析出清蛋白，加水沉淀是否溶解？操作注意點：如加入硫酸銨粉沫過量，會有硫酸銨晶體出現(xiàn)，要與蛋白質(zhì)沉淀區(qū)分開來。7蛋白質(zhì)溶液2 ml加入1%醋酸4-5滴，加入5%鞣酸數(shù)滴加入混勻沉淀？加水沉淀是否溶解？蛋白質(zhì)溶液2 ml加入1%醋酸4-5滴，加入飽和苦味酸數(shù)滴加入混勻沉淀？加水沉淀是否溶解？pH大于pIpH小于pI時帶正電荷蛋白質(zhì)溶液2 ml加入1%醋酸鉛，至有沉淀出現(xiàn)加入加水沉淀是否溶解？蛋白質(zhì)溶液2 ml加入1%硫酸酮，至有沉淀出現(xiàn)加入加水沉淀是否溶解？85、原始數(shù)據(jù)96、問題6.1、蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀的主要原因是什么？何謂可逆沉淀和不可逆