人抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體(MCV)酶聯(lián)免疫吸附測定

1、人抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體（V酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒使用說明書本試劑盒僅供體外研究使用、不用于臨床診斷!預(yù)期應(yīng)用法定量測定人血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中含量。實(shí)驗(yàn)原理用純化的抗原包被微孔板，制成固相載體，往微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗原、標(biāo)記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物（）顯色。在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在波長下測定吸光度（值），計(jì)算樣品濃度。試劑盒組成及試劑配制1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）2、標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）：2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至1長，l蓋好后室溫靜置大約分鐘，同時(shí)反復(fù)

2、顛倒搓動(dòng)以助溶解，其濃度為0將其稀釋為后，再做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成,樣品稀釋液直接作為空白孔。如配制標(biāo)準(zhǔn)品：?。ú灰儆冢┑纳鲜鰳?biāo)準(zhǔn)品加入含有樣品稀釋液的管中，混勻即可，其余濃度以此類推。TOC o 1-5 h z3樣品稀釋液：。4檢測稀釋液：。5檢測稀釋液：。6檢測溶液：瓶（1。臨用前以檢測稀釋液稀釋（如：檢測溶液0檢測稀釋液A），充分混勻，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（10/0孔），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制、檢測溶液B：/瓶0（1:1）0。0臨用前以檢測稀釋液稀0釋0。稀釋方法同檢測溶液A。、底物溶液：瓶。、濃洗滌液：瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀

3、釋5倍。O）4。0、終止液：1、覆膜：5張2、使用說明書：自備物品、酶標(biāo)儀（建議儀器使用前提前預(yù)熱）、微量加液器及吸頭，管、蒸餾水或去離子水，濾紙標(biāo)本的采集及保存1血清：全血標(biāo)本請于室溫放置小時(shí)或過夜后于離心分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?2或0-8保0存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2血漿：可用或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后分鐘內(nèi)于離心分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?2或0-8保0存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3其它生物標(biāo)本：請離心分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜诨虮４?，但?yīng)避免反復(fù)凍融。注：以上標(biāo)本均應(yīng)密封保存，4保存應(yīng)小于1周，-2不離應(yīng)超過1個(gè)月，-8不離應(yīng)超過2個(gè)月；標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果

4、，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。操作步驟實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫，試劑不能直接在37溶解；試劑或樣品配制時(shí)，均需充分混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。1、加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品10，0注意不要有氣泡，加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37溫育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。2棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液工作液（臨用前配制

5、），酶標(biāo)板加上覆膜，37溫育1小時(shí)。3、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-分2鐘，大約40/0每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。4每孔加檢測溶液工作液（臨用前配制），加上覆膜，溫育小時(shí)。5、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。6、每孔加底物溶液90，酶標(biāo)板加上覆膜37避光顯色（反應(yīng)時(shí)間控制在15-分3鐘0，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-孔4有明顯的梯度藍(lán)色，后3-孔4梯度不明顯時(shí)，即可終止）。7、每孔加終止溶液50，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。8立即用酶標(biāo)儀在波長測量各孔的光密度（值）。注：1、試劑準(zhǔn)備：所有試劑在使用前應(yīng)平衡至室溫，使用后請

6、立即按照說明書要求保存試劑。實(shí)驗(yàn)操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。2、加樣：加樣或加試劑時(shí)，第一個(gè)孔與最后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)溫育”時(shí)間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間（包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品）最好控制在10分鐘內(nèi)。推薦設(shè)置復(fù)孔進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。3、溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實(shí)驗(yàn)時(shí)將加上蓋或覆膜的酶標(biāo)板置于濕盒內(nèi)，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài)；同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的溫育時(shí)間和溫度。4、洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免

7、影響最后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。5試劑配制：及在使用前請手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液工作液、檢測溶液工作液請依據(jù)所需的量配制使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請精確配制標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配制（如吸取檢測溶液時(shí)，一次不要小于），以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液工作液、檢測溶液工作液。6、反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化（比如，每隔10分鐘），如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。7、底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。洗板方法1手

8、工洗板方法：將推薦的洗滌緩沖液至少注入孔內(nèi)，浸泡分鐘，吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在實(shí)驗(yàn)臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。2、自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。特異性本試劑盒可同時(shí)檢測重組或天然的人，且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。計(jì)算各標(biāo)準(zhǔn)品及樣本值扣除空白孔值后作圖（七點(diǎn)圖），如設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計(jì)算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)（對數(shù)坐標(biāo)），值為橫坐標(biāo)（對數(shù)坐標(biāo)），在對數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析，如，根據(jù)樣品值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線

9、的回歸方程式，將樣品的值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。檢測范圍：，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線請取用以下濃度值：，mmmmo最低檢測限：說明1，在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染，試劑避免受到微生物的污染，因?yàn)榈鞍姿饷傅母蓴_將導(dǎo)致出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。2，小心吸取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。請注意在吸取標(biāo)本/標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，第一個(gè)孔與最后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育”時(shí)間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。而且，洗滌不充分將影響試驗(yàn)結(jié)果。試劑盒保存：部分試劑保存于C,部分試劑保存于C,具體以標(biāo)簽上