栽培桃與野生桃果實發(fā)育過程中激素含量的變化

1、栽培桃與野生桃果實發(fā)育過程中激素含量的變化論文摘要：為了解決桃核開裂、發(fā)育不良等問題，本文以栽培桃和野生桃果實為試材，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法稱取0.5-1.0g新鮮植物材料假設(shè)取樣后材料不能馬上測定，用液氮速凍半小時后，保存在-20的冰箱中，加2ml樣品提取液，在冰浴下研磨成勻漿，轉(zhuǎn)入10ml試管，再用2ml提取液分次將研缽沖洗干凈，一并轉(zhuǎn)入試管中，搖勻后放置在4冰箱中。4下提取4h，3500轉(zhuǎn)/min離心8min,取上清液。沉淀中加1ml提取液，攪勻，置4下再提取1h，離心，合并上清液并記錄體積，殘渣棄去。上清液過C-18固相萃取柱。具體步驟是：80%甲醇1ml平衡柱上樣收集樣品移開樣品后用100%

2、甲醇5ml洗柱100%乙醚5ml洗柱100%甲醇5ml洗柱循環(huán)。將過柱后的樣品轉(zhuǎn)入5ml塑料離心管中，真空濃縮枯燥或用氮氣吹干，除去提取液中的甲醇，用樣品稀釋液定容一般1g鮮重用2ml左右樣品稀釋液定容，測定不同激素時還要稀釋適當(dāng)?shù)谋稊?shù)再加樣。加標(biāo)樣及待測樣：取適量所給標(biāo)樣稀釋配成：IAA1：100稀釋后是200ng/ml,ABA的最大濃度為500ng/ml,ZR標(biāo)準(zhǔn)曲線的最大濃度為100ng/ml,GA的最大濃度為10ng/ml，JA-ME的最大濃度為200ng/ml。然后再依次2倍稀釋8個濃度包括0ng/ml。將系列標(biāo)準(zhǔn)樣參加96孔酶標(biāo)板的前兩行，每個濃度加2孔，每孔50l,其余孔加待測樣

3、，每個樣品重復(fù)兩孔，每孔50l。加抗體：在5ml樣品稀釋液中參加一定量的抗體最適稀釋倍數(shù)見試劑盒標(biāo)簽,如稀釋倍數(shù)是1：2000，就要加2.5l的抗體,混勻后每孔加50l，然后將酶標(biāo)板參加濕盒內(nèi)開始競爭。競爭條件37左右0.5h。洗板：將反響液甩干并在報紙上拍凈。第一次參加洗滌液后要立即甩掉。然后再接著加第二次。共洗滌四次。加二抗：將適當(dāng)?shù)拿笜?biāo)二抗，參加10ml樣品稀釋液中比方稀釋倍數(shù)1:1000就加10l，混勻后，在酶標(biāo)板每孔加100l，然后將其放入濕盒內(nèi)，置37下，溫育0.5h。洗板：方法同競爭之后的洗板。加底物顯色：稱取10-20mg鄰苯二胺OPD溶于10ml底物緩沖液中小心勿用手接觸OP

4、D，完全溶解后加4l30%H0?；靹?，在每孔中加100l，然后放入濕盒內(nèi)，當(dāng)顯色適當(dāng)后肉眼能看出標(biāo)準(zhǔn)曲線有顏色梯度，且100ng/ml孔顏色還較淺，每孔參加50l2mol/L硫酸終止反響。比色：在酶聯(lián)免疫分光光度計上依次測定標(biāo)準(zhǔn)物各濃度和各樣品490nm處的OD值。結(jié)果計算：用于ELISA結(jié)果計算最方便的是logit曲線。曲線的橫坐標(biāo)用激素標(biāo)樣各濃度ng/ml的自然對數(shù)表示，縱坐標(biāo)用各濃度顯色值的logit值表示。Logit值的計算方法如下：B/BBLogitB/B=ln=ln1-B/BB-B其中B是0ng/ml孔的顯色值，B是其它濃度的顯色值。待測樣品可根據(jù)其顯色值的logit值從圖上查出其

5、所含激素濃度ng/ml的自然對數(shù)，再經(jīng)過反對數(shù)即可知其激素的濃度ng/ml。求得樣品中激素的濃度后，再計算樣品中激素的含量ng/g-fw。3次重復(fù)。2結(jié)果與分析2.1栽培桃和野生桃果實發(fā)育過程中果實鮮重、縱橫徑的變化栽培桃和野生桃果實發(fā)育過程中果實鮮重和縱橫徑的測定結(jié)果說明圖1、2，從盛花后19d開始，栽培桃果實鮮重大于野生桃，以后相差越來越大。桃核硬化過程中，栽培桃果實鮮重上升速度較快，而野生桃一直維持在一定的水平。到盛花后58d后，栽培桃果實的上升速度較野生桃高，到盛花后89d栽培桃果實是野生桃果實的2.43倍。 盛花后天數(shù) Days after full bloom (d) 盛花后天數(shù)

6、Days after full bloom (d) 栽培桃果實在整個發(fā)育過程中縱橫徑增長速度都明顯高于野生桃，特別在硬核期，野生桃果實的縱橫徑幾乎沒變化，而栽培桃果實的縱橫徑持續(xù)上升，這與鮮重變化趨勢相吻合。到發(fā)育后期，栽培桃果實橫徑幾乎等于縱徑，而野生桃差值與發(fā)育前期較一致。2.12栽培桃和野生桃果實發(fā)育過程中中、內(nèi)果皮IAA含量的變化 盛花后天數(shù) Days after full bloom 栽培桃和野生桃果實發(fā)育過程中中、內(nèi)果皮IAA含量的測定結(jié)果說明圖13，栽培桃中果皮IAA含量除在盛花后31d含量低于野生桃外，在盛花后41d前都高于野生桃，到盛花后41d后，野生桃IAA含量高于栽培桃，

7、野生桃果實在58d出現(xiàn)一個頂峰值后，迅速下降，到盛 圖1 栽培桃和野生桃發(fā)育過程中中果皮和內(nèi)果皮IAA含量的變化 Fig.1 Changes of IAA contents in mesocarp and endocarp during the development of cultivated peach and wild peach 花后73d后維持在一定水平；但對于栽培桃而言，IAA含量在盛花后41d出現(xiàn)一個頂峰值后，一直迅速下降，直到盛花后89d降到較低水平。在整個桃核發(fā)育過程中栽培桃內(nèi)果皮IAA含量都低于野生桃，與中果皮發(fā)育前期栽培桃中果皮IAA含量高于野生桃相反。栽培桃內(nèi)果皮IAA

8、含量的變化趨勢類似與野生桃，都是在發(fā)育前期含量較高，之后迅速下降，但在盛花后31d后，野生桃IAA含量下降速度減慢，到發(fā)育后期，栽培桃與野生桃內(nèi)果皮IAA含量相差較大。 盛花后天數(shù) Days after full bloom (d) 在整個桃核發(fā)育過程中栽培桃內(nèi)果皮IAA含量都低于野生桃，與中果皮發(fā)育前期栽培桃中果皮IAA含量高于野生桃相反。栽培桃內(nèi)果皮IAA含量的變化趨勢類似與野生桃，都是在發(fā)育前期含量較高，之后迅速下降，但在盛花后31d后，野生桃IAA含量下降速度減慢，到發(fā)育后期，栽培桃與野生桃內(nèi)果皮IAA含量相差較大。2.23栽培桃和野生桃果實發(fā)育過程中中、內(nèi)果皮ZR含量的變化栽培桃和野

9、生桃中、內(nèi)果皮在發(fā)育過程中ZR含量變化顯示圖24，盛花后9d，桃中果皮ZR含量顯著高與野生桃，高達(dá)野生桃的2倍之多，之后栽培桃迅速下降，野生桃迅速上升，在盛花后19d到73d之間野生桃中果皮ZR含量略高于栽培桃，之后，野生桃ZR略有上升，而栽培桃卻下降，到盛花后89d野生桃ZR含量明顯高于栽培桃；栽培桃與野生桃中果皮ZR含量變化趨勢相反。野生桃ZR含量變化曲線接近于拋物線，前期含量較低，隨后迅速上升，之后平緩下降，到盛花后58d下降速度變快，到盛花后73d維持在一定的水平；對于栽培桃而言，中果皮ZR含量變化曲線呈下降趨勢，中果皮發(fā)育前期到達(dá)最大值，隨后迅速下降，到盛花后19d略有上升后，又開始

10、下降，到盛花后58d維持在一定水平，隨后又有所下降。在內(nèi)果皮整個發(fā)育過程中，栽培桃內(nèi)果皮ZR含量都略高于野生桃，與中果皮在發(fā)育前、中期栽培桃ZR含量略低于野生桃相反。兩類桃果實內(nèi)果皮ZR含量變化較接近，都是在盛花后19d含量最高，隨后迅速下降，到盛花后58d維持在一定水平。栽培桃中果皮ZR含量顯著高與野生桃，高達(dá)野生桃的2倍之多，之后栽培桃迅速下降，野生桃迅速上升，在盛花后19d到73d之間野生桃中果皮ZR含量略高于栽培桃，之后，野生桃ZR略有上升，而栽培桃卻下降，到盛花后89d野生桃ZR含量明顯高于栽培桃；栽培桃與野生桃中果皮ZR含量變化趨勢相反。野生桃ZR含量變化曲線接近于拋物線，前期含量

11、較低，隨后迅速上升，之后平緩下降，到盛花后58d下降速度變快，到盛花后73d維持在一定的水平；對于栽培桃而言，中果皮ZR含量變化曲線呈下降趨勢，中果皮發(fā)育前期到達(dá)最大值，隨后迅速下降，到盛花后19d略有上升后，又開始下降，到盛花后58d維持在一定水平，隨后又有所下降。2.34栽培桃和野生桃果實發(fā)育過程中中、內(nèi)果皮GA3含量的變化栽培桃和野生桃中、內(nèi)果皮發(fā)育過程中GA3含量的變化動態(tài)圖35說明，盛花后31d前，中果皮栽培桃GA3含量高于野生桃，在此之后的發(fā)育過程中，栽培桃中果皮含量一直低于或接近與野生桃；栽培桃和野生桃中果皮GA3含量的變化曲線不一致，栽培桃GA3含量在整個中果皮發(fā)育中，呈緩慢下

12、降趨勢，但在盛花后41d出現(xiàn)一個小的低谷值；而對于野生桃而言，其變化曲線接近于拋物線，發(fā)育前期含量較低，隨后開始迅速上升，在盛花后31d到達(dá)較高值，一直持續(xù)到盛花后41d，隨后開始迅速下降，到盛花后73d后，有略有上升。在桃核整個發(fā)育過程中，栽培桃內(nèi)果皮中GA3含量明顯低于野生桃，特別在發(fā)育后期，差異更顯著。兩類桃果實內(nèi)果皮GA3含量的變化曲線較接近，都呈下降趨勢，但野生桃下降速度較慢，特別在下降過程中出現(xiàn)了一段稍有上升的階段，更減緩了下降的速度。降速度較慢，特別在下降過程中出現(xiàn)了一段稍有上升的階段，更減緩了下降的速度。2.45栽培桃和野生桃果實發(fā)育過程中中、內(nèi)果皮ABA含量的變化 盛花后天數(shù)

13、 Days after full bloom 栽培桃和野生桃果實中、內(nèi)果皮發(fā)育過程中ABA含量的變化曲線說明圖46，盛花后9d，栽培桃果實中果皮ABA含量顯著高于野生桃；隨后，栽培桃果實ABA含量迅速下降，而野生桃果實ABA含量急劇上升，到盛花后19d，栽培桃ABA含量稍低于野生桃；之后，栽培桃果實ABA含量平穩(wěn)上升，而野生桃果實ABA含量略有下降，在盛花后31d到41d之間栽培桃果實ABA含量又高于野生桃；之后，野生桃果實ABA含量快速提高，栽培桃ABA含量急劇下降，從盛花后58d開始，栽培桃果實ABA含量一直都低于野生桃。兩類型桃果實ABA含量的變化曲線不一致，野生桃果實屬于雙峰曲線，兩頂

14、峰值出現(xiàn)時間分別為 圖4 栽培桃和野生桃發(fā)育過程中中果皮和內(nèi)果皮ABA含量的變化 Fig.4 Changes of ABA contents in mesocarp and endocarp during the development of cutivated peach and wild peach 盛花后第19d和盛花后58d；對于栽培桃而言，屬于單峰曲線，盛花后41d到達(dá)最高值。在桃果實內(nèi)果皮整個發(fā)育過程中，栽培桃內(nèi)果皮ABA含量均高于野生桃。二者桃果實內(nèi)果皮ABA含量的變化趨勢較一致，都是在發(fā)育初期含量較高，隨后急劇下降，到盛花后31d減到較低，一直持續(xù)到硬核期開始。 3.討論3.1

15、野生桃和栽培桃果實發(fā)育過程中激素含量變化曲線的比擬桃果實發(fā)育大致可分為三個階段，第一階段為桃果實迅速生長階段，主要是桃果實細(xì)胞數(shù)量的增加；第二階段為桃果實緩慢生長階段，主要是桃核變硬化階段；第三階段為桃果實的第二次迅速生長階段，主要是桃果實果肉細(xì)胞體積增大階段。野生桃果實發(fā)育過程中，中果皮IAA、ZR、GA3含量的變化趨勢大體上較一致，先上升后下降。在桃果實發(fā)育第階段呈上升階段，這些激素不僅促進(jìn)細(xì)胞分裂，而且協(xié)同調(diào)運同化物到果實中，促進(jìn)果實增大，有利于幼果縱徑的伸長；到盛花后41d左右到達(dá)最高值，即進(jìn)入桃果實發(fā)育的第階段臨界期，內(nèi)果皮開始木質(zhì)化時，這些激素含量隨之開始下降，類似與甜櫻桃果實發(fā)育

16、中過程內(nèi)源激素的變化；到盛花后73d左右開始上升，即進(jìn)入桃果實發(fā)育的第階段，桃果實迅速上升激素含量迅速上升，說明這些激素共同調(diào)控桃果實中果皮的整個發(fā)育過程。對于ABA而言，在發(fā)育前期先升高，到盛花后19d升到較高值，并且維持了一段時間，到盛花后41d又開始繼續(xù)上升，到盛花后58天升到最高值d升到最高值，隨后又有所下降。對于野生桃果實內(nèi)果皮而言，IAA、ZR、GA3和ABA在整個內(nèi)果皮發(fā)育過程中，呈下降趨勢，但GA3在盛花后41d出現(xiàn)一個頂峰后，才緩慢下降。對于栽培桃而言，中果皮IAA、ZR、GA3含量的變化態(tài)勢與野生桃不一致，在發(fā)育開始時這些激素含量都較高，盛花后19d降到較低，隨后開始上升。

17、但以后發(fā)育階段，這三種激素的變化情況有點差異，IAA和ZR含量到盛花后41d到達(dá)最高值，隨后開始下降，IAA含量一直持續(xù)下降，但ZR下降到盛花后58d，到盛花后73d略有上升后又開始下降；對于GA3而言，在盛花后31d就到達(dá)最大值，到盛花后41d出現(xiàn)第二個谷值，隨后開始上升，到盛花后58d出現(xiàn)第二個峰值，隨后又開始下降，到盛花后73d維持在一定的水平上。說明栽培桃果實中果皮在發(fā)育過程中，各激素之間的相互協(xié)調(diào)性不像野生桃果實那樣。ABA也類似與前3個激素的變化態(tài)勢，先下降后上升，到盛花后41d到達(dá)最高值后，開始急劇下降，到盛花后58d維持在一定的水平。對于栽培桃內(nèi)果皮而言，這4個激素也都是呈下降

18、趨勢，且下降曲線較一致。3.2野生桃和栽培桃果實發(fā)育過程中激素含量的比擬影響內(nèi)果皮發(fā)育的好壞主要是第一階段糖分的積累和第二階段桃核木質(zhì)素的沉積，而糖分的積累與木質(zhì)素的沉積與果實內(nèi)激素含量之間具有密切的關(guān)系。本實驗結(jié)果說明，IAA和GA3含量在硬核前期即盛花后41d前內(nèi)果皮整個發(fā)育過程中，根本上都是野生桃內(nèi)果皮IAA和GA3含量較高于栽培桃，到盛花31d后，野生桃IAA含量下降速度減慢，栽培桃與野生桃內(nèi)果皮IAA含量相差更大，到內(nèi)果皮硬核初期，即在盛花41d時，野生桃內(nèi)果皮的激素含量高達(dá)栽培桃的1.5倍。相反地，ZR含量在整個內(nèi)果皮發(fā)育過程中，野生桃含量低于栽培桃，推測有可能導(dǎo)致野生桃內(nèi)果皮分裂

19、細(xì)胞數(shù)量較少，而栽培桃分裂細(xì)胞數(shù)量較多，需要更多營養(yǎng)，究其原因，有待深入探討。野生桃果實內(nèi)果皮ABA含量在發(fā)育初期較栽培桃高，有利于糖分的運輸，到后期，與栽培桃果實相差較少，硬核根本結(jié)束。rm.ou-nian,LIUyue中果皮兩種激素含量較低，這樣，在發(fā)育前期，有利于光合同化物向內(nèi)果皮分配和糖分的積累有利于光合同化物向內(nèi)果皮分配，促進(jìn)糖分的積累；栽培桃內(nèi)果皮IAA含量的變化趨勢類似與野生桃，都是在發(fā)育前期含量較高，之后迅速下降，但在盛花后31d后，野生桃IAA含量下降速度減慢，到發(fā)育后期，栽培桃與野生桃內(nèi)果皮IAA含量相差較大，在盛花41d時，野生桃內(nèi)果皮的激素含量是栽培桃的？倍。前人研究說

20、明生長素是調(diào)節(jié)木質(zhì)化過程Pesquetetal.,2005的重要激素，而桃核開裂的原因是內(nèi)果皮不能正常木質(zhì)化，本實驗結(jié)果說明了在桃核硬化時期，野生桃內(nèi)果皮的生長素含量要遠(yuǎn)高于栽培桃，從而有利于木質(zhì)化過程，沒有裂核現(xiàn)象的發(fā)生。同時，桃果實發(fā)育前期，野生桃果實中果皮IAA、GA3和ZR含量都低于栽培桃，這樣，在野生桃發(fā)育前期，有利于光合同化物向內(nèi)果皮分配，促進(jìn)糖分的積累；前人研究說明生長素是調(diào)節(jié)木質(zhì)化過程的重要激素，而桃核開裂的原因是內(nèi)果皮不能正常木質(zhì)化。在內(nèi)果皮整個發(fā)育過程中，栽培桃內(nèi)果皮ZR含量都略高于野生桃，與中果皮在發(fā)育前、中期栽培桃ZR含量略低于野生桃相反。相反地，兩類桃果實內(nèi)果皮ZR含量變化較接近，都是在盛花后19d含量最高，隨后迅速下降，到盛花后58d維持在一定水平。而栽培桃果實情況正好相反，有較少的光合同化物運輸和分配到桃核，不利于木質(zhì)素根底物