包頭醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)與微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)之實(shí)驗(yàn)3 空氣中細(xì)菌的檢測(cè)與消毒劑消毒效果評(píng)價(jià)

1、實(shí)驗(yàn)3 空氣中細(xì)菌的檢測(cè)與消毒劑消毒效果評(píng)價(jià)目的要求1.掌握沉降平板法的原理。2.掌握消毒效果的評(píng)價(jià)方法，了解常用消毒劑的使用范圍和適用濃度。器材和試劑1培養(yǎng)基及試劑 普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、50液態(tài)滅菌普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、1：500的84消毒液、無(wú)菌生理鹽水2其他 滅菌100ML三角燒瓶（含玻璃珠）、滅菌平皿、無(wú)菌1ml、10ml吸管、滅菌試管、消毒棉簽、滅菌55空心規(guī)格板、火柴、蠟筆、試管架、噴霧器、酒精燈、恒溫水浴箱。步驟和方法一、空氣中細(xì)菌的檢測(cè)1.沉降平板法的原理：利用微生物氣溶膠粒子受重力作用沉降到敞開的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，對(duì)空氣中細(xì)菌進(jìn)行采樣計(jì)數(shù)。2.方法：1）于室內(nèi)四角及中央各放營(yíng)養(yǎng)瓊

2、脂平板（或血瓊脂平板）一個(gè)，于同一時(shí)間揭開皿蓋，暴露20分鐘。置370C孵育24h。2）計(jì)數(shù)5各平板菌落總數(shù)并算出每立方米空氣中所含細(xì)菌數(shù)。參考表1作出評(píng)價(jià)。 50000N每立方米空氣中的細(xì)菌數(shù)= AtA:所用平皿面積（cm2）。T：暴露于空氣的時(shí)間（分鐘）。N：培養(yǎng)后，平皿上菌落數(shù)。表1 居室內(nèi)空氣衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)評(píng)價(jià)參考標(biāo)準(zhǔn) 夏季標(biāo)準(zhǔn)（個(gè)/m3） 冬季標(biāo)準(zhǔn)（個(gè)/m3）空氣評(píng)價(jià) 細(xì)菌總數(shù) 綠色和溶血性鏈球菌 細(xì)菌總數(shù) 綠色和溶血性鏈球菌清潔空氣 1500 16 4500 24污染空氣 1500 36 7000 36 二、物體表面消毒及效果評(píng)價(jià)：1.消毒前的采樣：選擇可能被污染的對(duì)象（如桌面、墻面）

3、放上滅菌55空心規(guī)格板，取一支無(wú)菌棉簽用生理鹽水浸濕，在規(guī)格板的空心處，有順序的涂擦，然后將棉簽放入盛有25ml生理鹽水的三角燒瓶中，制成原液，充分混勻，備用。 2.消毒后的采樣：選擇與消毒前污染程度差不多的部位，用裝有84消毒液的噴霧器噴霧消毒，待干（20分鐘左右），用上述同樣方法采樣，并制成原液備用。3.將消毒前后的樣品用無(wú)菌生理鹽水做1：10、1：100、1：1000、1：10000的倍比稀釋4用無(wú)菌操作的方法取不同稀釋度液體1ml注于直徑90mm的無(wú)菌平皿，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平行樣，做一個(gè)空白對(duì)照，然后加入已融化并冷卻至50的營(yíng)養(yǎng)瓊脂15ml ,立即在平面上向同一方向平穩(wěn)轉(zhuǎn)動(dòng)，使之混勻，

4、待凝固后翻轉(zhuǎn)平板。1ml標(biāo)本中活菌數(shù)=全平板cfu稀釋倍數(shù)5.菌落計(jì)數(shù)方法：1）平板菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。記下各平板上的菌落數(shù)后，應(yīng)求出同一稀釋度的平均菌落數(shù)，供下一步計(jì)算時(shí)應(yīng)用。2）在求同一稀釋度的平均數(shù)時(shí)，若其中一個(gè)平板有較大片狀菌落時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。3）若片狀菌落不足平板一半，而其余中菌落數(shù)分布均勻，則計(jì)數(shù)后乘2代表全平板菌落數(shù)，然后再求該稀釋度的平均菌落數(shù)。6.不同稀釋度平均菌落數(shù)的確認(rèn)：1）應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30-300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表例1）。2）若有兩個(gè)稀釋度其生長(zhǎng)之菌落數(shù)均在

5、30-300，則應(yīng)視二者之比如何來(lái)決定，若其比值小于2，應(yīng)報(bào)告平均數(shù)。 若其比值大于2則報(bào)告其中較小的數(shù)字（見(jiàn)表例2和3）。3）若所有平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表例4）。4）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表例5）。5） 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30-300之間，其中一部分大于300或小于30時(shí)，則以最接近30或300的平均菌 落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之 （見(jiàn)表例6）。6）若所有稀釋度的菌落數(shù)均不可計(jì)數(shù)，則以最高稀釋倍數(shù)無(wú)法計(jì)數(shù)報(bào)告之（例7）。表2 稀釋度選擇及細(xì)菌總數(shù)報(bào)告方法例子 稀釋液及

6、菌落數(shù) 相鄰稀釋度菌落數(shù)在 菌落總數(shù) 報(bào)告方式 10-1 10-2 10-3 30-300間的比值 （cfu/ml） （cfu/ml）1 1,365 164 20 16，400 16，000或1.6*1042 2,760 295 46 1.6 37，750 38，000或3.8*1043 2,890 271 60 2.2 27，100 27，000或2.7*1044 不可計(jì) 4，650 513 513，000 510，000或5.1*1055 27 11 5 270 270或2.7*1026 不可計(jì) 305 12 30，500 31，000或3.1*1047 不可計(jì) 不可計(jì) 不可計(jì) 10-3無(wú)法計(jì)數(shù)7)所有稀釋度均未見(jiàn)菌落：則報(bào)告小于10，而不報(bào)告0.6.菌落數(shù)報(bào)告方式： = 1 * GB3 菌落數(shù)100時(shí)按實(shí)數(shù)報(bào)告，未見(jiàn)菌落數(shù)者報(bào)告為小于10. = 2 * GB3 菌落數(shù)100時(shí)，采用兩位有效數(shù)字，在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入法計(jì)算，也用10的指數(shù)表示。 = 3 * GB3 在報(bào)告菌落數(shù)為“無(wú)法計(jì)數(shù)”時(shí)，應(yīng)注明待檢標(biāo)本的稀釋倍數(shù)。具體報(bào)告方式見(jiàn)表。根據(jù)消毒前后的菌落數(shù)，求出消毒前后細(xì)菌減