野外大型真菌識別、標(biāo)本采集和室內(nèi)分離實驗報告

1、野外大型真菌識別、標(biāo)本采集和室內(nèi)別離一、目的與要求1、掌握野外標(biāo)本采集的方法和考前須知2、認(rèn)識常見的大型真菌。二、實驗原理大型真菌以夏秋多雨時的七、八月份出現(xiàn)最多(春季發(fā)生的菌類 比擬少，僅盤菌目中的羊肚菌、馬鞍菌和叢耳菌等多發(fā)生于春末)， 所以此時采集標(biāo)本最為適宜。擔(dān)子菌門是一群多種多樣的真菌，約 1.6萬種。其特征：菌絲具橫隔，有單核菌絲和雙核菌絲(又稱初 生菌絲和次生菌絲)，擔(dān)抱子萌發(fā)時形成單核菌絲，單核菌絲接合， 核不結(jié)合而形成雙核菌絲。雙核菌絲時期相當(dāng)長。形成擔(dān)子、擔(dān)抱 子，在此過程中有鎖狀連合。擔(dān)子菌分為四綱:層菌Hymenomycetes, 如銀耳、木耳、靈芝、蘑菇等。腹菌綱Ga

2、steromycetes,如馬勃、 鬼筆等。銹菌綱。黑粉菌綱。泰山常見藥用蕈菌有：茯苓Poria cocos (Schw.) Wolf.、靈芝 Ganoderma lucidum (Leys, ex Fr.) Karst.、蜜環(huán)菌 Armillaria mellea (Vahl. ex Fr.) Kummer.、 脫皮馬勃 Lasiosphaera fenzlii Reich. 豬苓 Polyporus umbellatus (Pers.) Fr. 雷丸 Polyporus mylittae Cook, et Mass.、猴頭菌 Hericium erinaceus (Bull, ex Fr.

3、) Pers.、 云芝 Coriolus versicolor (Fr.) Fr.、 李艮耳 Tremella fuciformis Berk 木耳 Auricularia auricular (L. ex Hook.) Underw.、紫芝 Ganoderma japonicum (Fr.) Lloyd.、大馬勃 Calvatia gigantean (Batsch ex Pers) Lloyd. 紫色馬勃 C. lilacina (Mont, et Berk.) Lloyd.等。野外調(diào)查和標(biāo)本采集是事物分類學(xué)研究不可缺少的局部，也是系 統(tǒng)學(xué)研究的基礎(chǔ)。通過野外工作，澄清區(qū)系物種多樣性的物種

4、組成和 生態(tài)學(xué)價值，也為生物資源的可發(fā)和利用提供基礎(chǔ)資料。中國目前的各類大型真菌估計有3萬多種，其中食藥用菌接 近1000種，人工開發(fā)利用的約100種左右。特別是一些有益的野生 真菌，很多僅局限于對野生子實體進(jìn)行瘋狂采挖階段，難以進(jìn)行人工 栽培，半人工的栽培利用也少見，達(dá)不到永續(xù)利用的目的，對大型真 菌野生資源的開發(fā)研究勢在必行，而對野生真菌的采集和別離培養(yǎng)是 野生真菌資源開發(fā)的第一步，是十分基礎(chǔ)而又重要的工作。三、材料和用品平底背筐、平底手提筐、紙盒假設(shè)干個（或鋁盒、小指管假設(shè)干個, 塑料袋假設(shè)干個）、木箱12個、液浸標(biāo)本筒12個、采集刀、錘子、 鑿子、手鋸、掘根器，刨根器、相機(jī)、GPS、刻

5、度尺、鋼卷尺，濕度 計，溫度計，pH試紙，采集袋、紙袋、白紙、小紙盒、放大鏡、復(fù) 印紙、記錄本、記號筆、號牌、線或細(xì)繩、皮筋、空平培養(yǎng)皿、衛(wèi)生 紙（包裹局部標(biāo)本用）四、實驗方法與步驟1、設(shè)定大型真菌采集的時間：一般選擇春末夏初，或夏末秋初， 采集時間定在雨后2-3天，這時采集的菌類較干燥，但不老化萎縮, 有利于菌類的別離。對于采集特定菌種，那么需要根據(jù)具體的菌種情況, 確定采集時間，采集前必須了解菌類生長的生態(tài)環(huán)境：植被、植物群 落；營養(yǎng)類型（共生、寄生、腐生）：土壤的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、土壤中特 定的有機(jī)質(zhì)成分；采集地的溫度、濕度和光照等等；不同的菌種有不 同的溫性，采集的季節(jié)和地點也不同。2、采集

6、、形態(tài)觀察與記錄：野外采集時要特別注意保持子實體 各局部的完整，保護(hù)容易脫落的菌環(huán)、菌托和鱗片等附屬物。為了采 得完整標(biāo)本，要用小鏟挖掘，不得用手拔，以免損壞基部。采集地上生的傘菌類和盤菌類時，可用手輕輕拔出或用掘根器采 集，注意一定要保持標(biāo)本的完整性；對于樹干和腐朽樹木上的菌類， 可用采集刀連帶一局部樹皮剝下，有時可用手鋸或枝剪截取一段樹枝。 腐生于樹干、樹枝、樹樁上大型真菌采集方法也一樣，采到的標(biāo)本應(yīng) 標(biāo)好號，根據(jù)標(biāo)本大小放入適合的蠟紙袋中，外表粘滑的種類要用蠟 紙袋，隨后再放入硬紙質(zhì)采集盒內(nèi)。對于大型木栓質(zhì)標(biāo)本如靈芝，可 用白紙包好，直接放入標(biāo)本籃中帶回室內(nèi)處理。標(biāo)本較多時，應(yīng)采集 不同

7、發(fā)育期的個體，特別注意采集幼蕾作為分類材料。對于采集的標(biāo)本，要按照標(biāo)本的不同質(zhì)地分別包裝，以免損壞和 喪失。肉質(zhì)、膠質(zhì)、蠟質(zhì)和軟骨質(zhì)的標(biāo)本需用光滑而潔白的紙制作成 漏斗形的紙袋包裝，把菌柄向下，菌蓋在上，保持子實體的各局部完 整，然后，再分別將包好的標(biāo)本放入塑料桶或筐內(nèi)。木質(zhì)、木栓質(zhì)、 革質(zhì)和膜質(zhì)的標(biāo)本，采集后用舊報紙分別包好。采集時要求立即進(jìn)行紀(jì)錄，肉質(zhì)菌類干后其色澤、氣味、大小、形態(tài)等都有變化，假設(shè)新鮮時不記錄將會影響鑒定的準(zhǔn)確性，甚至無法 鑒定，必須把標(biāo)本的形態(tài)大小、顏色、附屬物、著生位置等作詳細(xì)的 記錄。子實體采集時形態(tài)要完整。最好用照相機(jī)將菌類的生態(tài)環(huán)境, 子實體發(fā)育的不同階段一起拍

8、攝。某些菌類的菌蓋或菌柄受傷后易變 色（如牛肝菌的某些種），有的菌類有乳汁流出，乳汁顏色有些還會 變化（如乳菇屬中某些種），有的菌類還具有特殊氣味，這些均應(yīng)詳 細(xì)記錄。3、選擇別離用的培養(yǎng)基：的菌類可以查閱有關(guān)文獻(xiàn)，根據(jù) 別人報道的培養(yǎng)基進(jìn)行配置，不知道的菌類那么要做兩方面的準(zhǔn)備，一 是多配幾種不同的培養(yǎng)基，二是將采集地的生長基質(zhì)挖出來煮汁加入 一定的葡萄糖和瓊脂，配成培養(yǎng)基，或在普通培養(yǎng)基中加入要別離菌 株的子實體水煮汁（當(dāng)然要求采集的子實體較多），別離成功后再摸 索合適的培養(yǎng)基。比方紅菇和乳菇類在PDA培養(yǎng)基上基本不生長， 在其子實體上菌絲生長極快；硬皮馬勃、碳球菌和一些外生菌根菌在 PD

9、A培養(yǎng)基上生長也很差；培養(yǎng)基用水也不能含糊，最好用蒸儲水, 因為不同地方水質(zhì)不一樣，會影響到菌種成活率，同時，城市用水往 往含有一些漂白劑類物質(zhì)，對菌絲的生長有一定的影響，培養(yǎng)基是分 離的關(guān)鍵，雖然有局部的大型真菌可能在實驗室條件下不能生長，但 多種準(zhǔn)備能提高我們獲得野生菌株菌種幾率；常用的培養(yǎng)基有PDA 培養(yǎng)基和MMN培養(yǎng)基（菌根真菌培養(yǎng)基）。4、別離方法：根據(jù)不同的菌類、標(biāo)本的情況，采用不同的別離 方法。（1）小型薄傘菌的別離：如鬼傘類、花褶傘、小皮傘、微皮傘 等小型傘菌，柄細(xì)長，菌肉層薄采用常用的組織別離法不易成功，一 般采用菌褶貼附法：首先，選擇較合適的子實體（剛成熟為好），在 無菌操

10、作臺上取下一片菌褶（局部菌褶也行），貼附于平板上蓋下方 中央，正對培養(yǎng)基，然后將培養(yǎng)平板正放，于培養(yǎng)箱中靜止放置2小 時到一天，再倒扣放置培養(yǎng)，一發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上有菌絲生長，立即轉(zhuǎn)管 培養(yǎng)，原理是：抱子通過彈射后很容易掉入培養(yǎng)基中，而雜菌因粘著 力不能脫離菌褶上。這種方法要求子實體新鮮，采集到別離最好不超 過2小時，一方面可保證菌褶能黏附于菌蓋上，另一方面可保證其上 雜菌不易脫離。（2）菌肉厚實的菌類的別離：這些菌類一般較易別離，別離一 般采用組織別離法。（3）耳類等膠質(zhì)菌別離法：要注意幾個方面：1）對于菌肉厚實 的菌類可直接取子實體內(nèi)部的菌肉組織，但要多部位挑取菌肉組織, 每個部位多做幾個培養(yǎng)，

11、以提高菌種成活率。2）很多的菌類菌肉薄， 菌柄中空或易遭蟲害，那么采用與膠質(zhì)菌類相同的實驗方法進(jìn)行組織分 離，盡可能挑取子實體的干凈部位，用0.2%的升汞作外表消毒，消 毒時間視組織塊的厚薄而定，一般30秒到2分鐘即可，消毒后用滅 菌的蒸儲水多洗幾次，當(dāng)然次數(shù)越多越好（一般3-5次，目的是把 殘留的升汞溶液洗干凈，或稀釋掉；細(xì)菌是不可能去的太干凈，只有 通過在培養(yǎng)基內(nèi)加入相應(yīng)的抗生素抑制其生長，根據(jù)實驗經(jīng)驗，加入 的抗生素的量要比推薦劑量稍微大一點才行。3）培養(yǎng)過程中要隨時 觀察，對于產(chǎn)生附有霉菌的組織塊要隨時剔出，盡可能在沒有產(chǎn)生抱 子前去除，以免影響其他菌塊的生長。并注意隨時進(jìn)行轉(zhuǎn)接生長的

12、菌 種，防止在后期被污染。（4）平伏型菌類的別離：主要是一些非褶菌類，一般緊貼與基 質(zhì)上生長，難以采用組織別離法別離，泡子產(chǎn)生于外表，少且雜菌含 量多，對于這類菌的別離采用基質(zhì)別離法合適。具體方法是：先將要 材料外表消毒，別離器具消好毒，用鑲子和解剖刀將材料外表的平伏 子實體除去，在子實體生長部位（子實體去除處）取黃豆大小的基質(zhì)， 接入合適培養(yǎng)基中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)既可，這種方法鑒定很重要, 獲得雜菌的可能性較大。5、別離菌種的初步鑒定：判定生長的菌落是否就是別離菌株的 菌種需要豐富的真菌知識，一般來講，大型真菌的菌落一般很少產(chǎn)生 無性抱子（極少數(shù)種類除外）；絲狀，毛絨狀，有的形成菌絲束，爬

13、行于菌落外表和管壁；膠質(zhì)菌類菌落有些特殊，有的菌絲不興旺，氣 生菌絲少或沒有。外表呈現(xiàn)粉末狀，菌落帶各種鮮艷的顏色的一般為 霉菌，細(xì)菌菌落多膿狀；大型真菌生長一般較慢，而霉菌生長快，這 也是一個判定依據(jù)；肯定不是的要及早清除，對于實在不能判定的那么 通過分子方法進(jìn)行鑒定。別離工作考前須知：（1）不同的菌類有不同的生長習(xí)性，與其熟悉的野外條件相比， 人為的培養(yǎng)條件（培養(yǎng)基，生物因素和環(huán)境因素）等發(fā)生了很大的變 化，因而萌芽時間，菌絲生長速度均會有所不同，一些菌類，萌芽的 時間可能長些，生長的速度可能很慢，對沒污染，也沒生長的菌類組 織不要過早拋棄。（2）有的菌類，當(dāng)有細(xì)菌污染時，能加速菌絲的萌發(fā)和生長， 對于僅有細(xì)菌污染的別離平板，一般不主張過早拋棄，有的真菌向外