病原微生物應(yīng)急檢測

1、流行性病原微生物應(yīng)急檢測制度一、病原微生物引起的傳染病我國傳染病法規(guī)定的法定報告?zhèn)魅静》诸悾杭?、乙、?類，從數(shù)量上共有39種，主要由病毒、細菌和寄生蟲引起。(一)甲類傳染病主要鼠疫和霍亂。(二)乙類傳染病(1)病毒引起的：傳染性非典型肺炎、人感染高致病性禽流感、新型甲型 H1N1流感、麻疹、病毒性肝炎、 艾滋病、脊髓灰質(zhì)炎、流行性出血熱、狂犬病、流行性乙型腦炎。(2)細菌引起的：傷寒和副傷寒、淋病、梅毒、百日咳、白喉、流行性腦脊髓膜炎、猩紅熱、鉤端螺旋體病、布魯氏菌病、炭疽、肺結(jié)核、新生兒破傷風(fēng)。(3)寄生蟲和細菌：瘧疾、血吸蟲病、細菌性和阿米巴性痢疾。(三)丙類傳染病(1)病毒引起的主要有

2、：流行性感冒、流行性腮腺炎、急性出血性結(jié)膜炎、手足口病、風(fēng)疹及除霍亂、痢 疾、傷寒和副傷寒以外的感染性腹瀉病。(2)細菌和寄生蟲引起的：麻風(fēng)病、流行性和地方性斑疹傷寒、黑熱病、絲蟲病、包蟲病。(四)病原微生物引起的綜合征1、急性腹瀉綜合征(1)細菌性腹瀉：霍亂弧菌、志賀氏菌、大腸桿菌(腸毒素性和腸出血性)、沙門菌、空腸彎曲菌、小腸結(jié)腸耶爾森菌、艱難梭菌等。(2)病毒性腹瀉：輪狀病毒、諾如病毒、腺病毒、埃博拉和其他出血熱病毒等。(3)寄生蟲性腹瀉：痢疾阿米巴、隱抱子蟲、賈迪鞭毛蟲等。2、急性出血熱綜合征登革熱病毒、漢坦病毒、克里米亞 -剛果熱病毒、埃博拉病毒、拉薩熱病毒、馬爾堡出血熱病毒、裂谷熱

3、病 毒、南美沙粒病毒、婢傳播的黃病毒、黃熱病病毒等。3、急性黃疸綜合征A, B, E型肝炎病毒、鉤端螺旋體、黃熱病病毒等、4、急性神經(jīng)性綜合征(1)細菌性腦膜炎：腦膜炎奈瑟氏菌、鉤體、肺炎鏈球菌、嗜血流感桿菌、大腸桿菌、李斯特菌等。(2)病毒性腦炎：乙型腦炎病毒、脊髓灰質(zhì)炎、狂犬病毒、腸道病毒、婢傳播的腦炎病毒等(3)寄生蟲性腦炎：錐形蟲、瘧原蟲等。5、急性呼吸綜合征(1)細菌性：炭疽桿菌、鼠疫桿菌、百日咳桿菌、白喉桿菌、 A群鏈球菌、TB、軍團菌、支原體、衣原 體等。(2)病毒性：冠狀病毒、流感和禽流感病毒、肺綜合征漢坦病毒和腺病毒等。6、急性皮膚綜合征水痘病毒、麻疹病毒、風(fēng)疹病毒、腸道病毒

4、71、柯薩奇病毒A組16型、斑疹傷寒立克次氏體、炭疽桿菌、猴豆病毒、細小病毒 B19、基孔肯雅熱病毒等。7、急性眼綜合征腺病毒、腸道病毒、沙眼衣原體8、急性全身性綜合征炭疽桿菌、鼠疫桿菌、布氏菌、傷寒沙門菌、鉤體、 HIV、登革病毒、漢坦病毒、瘧原蟲萊姆病螺旋體。二、應(yīng)急檢測的目的和意義應(yīng)急檢測的目的和意義是1、識別暴發(fā)、確定病因2、確定傳染來源3、確定傳播鏈和流行范圍4、發(fā)現(xiàn)新的病原微生物5、提供仲裁依據(jù)三、病原微生物的特點及其應(yīng)急檢測病毒不是完整的生物體，結(jié)構(gòu)簡單，需要再電子顯微鏡下才能看清楚。電鏡是研究病毒和細胞相互作用的重要工具，但是在診斷實驗室的使用卻非常有限。要想直接用電鏡觀察檢測

5、病毒，樣品必須含有高滴度的病毒顆粒（106到107個/ ml）但也可通過樣品濃縮和使用標(biāo)記抗體提高敏感性。電鏡主要用于不可培養(yǎng)的病毒檢測，特別是病毒性胃腸炎病原體檢測。細菌的診斷相對容易，培養(yǎng)也較方便。（一）病原微生物及其抗原和核酸的檢測方法和初步結(jié)果報告時限1、分離培養(yǎng)（細菌：4872小時，病毒1428天）2、免疫熒光法（48小時）3、固相免疫分析膠體金法（3060分鐘）4、酶聯(lián)免疫分析（ELISA） （48小時）5、核酸擴增聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）（48小時）6、實時熒光 PCR （34小時）7、核酸序列分析（1624小時）8、形態(tài)學(xué)診斷（2472小時）二）血清學(xué)抗體檢測方法和初步結(jié)果報告

6、時限1、ELISA檢測感染早期IgM抗體（48小時）2、ELISA檢測感染急性期和恢復(fù)期IgG抗體（48小時）3、病毒抗體中和試驗測定急性期和恢復(fù)期中和抗體（7天）4、血球凝集抑制檢測病毒抗體（48小時）5、試管凝集試驗檢測細菌抗體（48小時）6、間接血球凝集抑制試驗檢測病毒抗體（48小時）7、補體結(jié)合試驗（2448小時）（三）選擇檢驗方法需考慮的因素1、疑似病原微生物感染的病理學(xué)知識2、病人感染的病程和采樣時間3、各種方法對疑似病原微生物感染的適用性4、可用于檢測標(biāo)本類別（四）實驗室結(jié)果的意義和解釋1、病原微生物感染的實驗室診斷需要多方面的信息，包括：對可疑病原體的致病機理的理解，對感染階段

7、 的認識，被感染者的年齡和免疫狀況等。2、病原微生物分離培養(yǎng)的成功與多個因素有關(guān)，包括：選擇適當(dāng)?shù)臉?biāo)本，仔細收集標(biāo)本以最大限度收集到 致病因子，標(biāo)本的運輸必須盡量保持病原體活性，減少污染菌的增殖等。3、如果從疑似病人的標(biāo)本中分離到目標(biāo)細菌和病毒，可以確診。4、如果在疑似病人的標(biāo)本中檢測到目標(biāo)細菌和病毒核酸，可以確診。5、如果目標(biāo)病原微生物感染的中和抗體或IgG抗體或其他方法測定的抗體滴度穩(wěn)定維持在高水平，或者出現(xiàn)陽轉(zhuǎn)血清抗體滴度，或是恢復(fù)期血清的抗體滴度比急性期有4倍或4倍以上的增長，則表明病人確有感染相應(yīng)病原體。6、如病人血清或腦脊液標(biāo)本中檢測到目標(biāo)病原微生物感染的IgM抗體陽性，表示有近期

8、感染、7、如果腦脊髓液標(biāo)本或血清IgM抗體檢測陰性，可能是因為患者體內(nèi)的抗體還沒達到可被檢測的濃度，需結(jié)合發(fā)病和采樣日期，進一步對患者的血清標(biāo)本進行檢測。三、應(yīng)急檢測標(biāo)本的采集和運輸（一）標(biāo)本的選擇1、為了說明病原體與某種特殊疾病的關(guān)系，標(biāo)本應(yīng)盡可能取自靶器官2、許多病原微生物感染的臨床癥狀可以用來確定靶器官，以取得適當(dāng)?shù)臉?biāo)本3、分離立克次氏體的標(biāo)本種類有限，主要是血液和內(nèi)臟組織（二）采樣器材1、無菌、耐低溫、密閉帶螺口蓋的容器。包括尿杯和一次性離心管（1550ml）,適于盛裝24mlVTM的標(biāo)本收集管，25ml血清收集管2、無菌棉簽和專用采樣拭子3、無菌玻珠（直徑5mm）每管加34個玻璃珠，

9、以便于將結(jié)合在拭子上的細胞釋放出來4、注射器配26和27號針頭，用于吸取囊泡液5、含抗凝劑的血液收集管（三）病毒運輸液（VTM ）1、運輸液可以防止標(biāo)本干燥，在標(biāo)本收集和接種的間隔期內(nèi)有助于保持病毒活性，同時延緩污染菌的增殖。2、使用的VTM有多種配方，VTM既可在實驗室自行配制，也可以購買商品化的，盡管綜合性的研究不多，但使用不同的 VTM對選擇的病毒的回收檢測結(jié)果沒有顯著影響。（四）細菌運送培養(yǎng)基1、維持活力，不增菌的非營養(yǎng)性半固體培養(yǎng)基2、四種主要運送培養(yǎng)基：Stuarts Cary-Blair、Amies、 STGG（五）標(biāo)本收集1、出現(xiàn)臨床癥狀后盡可能早地采集標(biāo)本，最好在沒有進行抗病

10、毒和抗生素治療之前采集。2、最易分離到病毒的時間是發(fā)病后 3天內(nèi)，5天以后分離到病毒的機會將大大降低。病例死亡后應(yīng)盡快采集尸解標(biāo)本。3、收集立克次氏體培養(yǎng)標(biāo)本應(yīng)盡量無菌。4、詳細詢問病史，包括發(fā)病日期、臨床表現(xiàn)、近期暴露史、動物和節(jié)肢動物接觸史和叮咬史、近期到流行 區(qū)的旅行史和疫苗接種史。5、用于細菌血培養(yǎng)的標(biāo)本應(yīng)盡早采集，并注意無菌操作。（六）標(biāo)本的運送、接收與保存1、專人負責(zé)標(biāo)本運輸2、新鮮的臨床采集標(biāo)本應(yīng)在 4c條件下24小時內(nèi)運送至實驗室；未能 24小時內(nèi)送至實驗室的，應(yīng)置-70 C或以下保存3、凍存的標(biāo)本應(yīng)使用干冰或液氮送檢，低溫送至實驗室4、標(biāo)本核對無誤后置-70C冰箱保存，并做好

11、相應(yīng)的記錄（七）標(biāo)本的盛裝1、盛裝標(biāo)本的容器應(yīng)堅固、密封、無菌2、容器的材料要求“兩耐三防”：耐高（低）溫耐高壓、防水、防破損、防泄漏3、容器上貼規(guī)范的標(biāo)簽以利于識別4、樣品的有關(guān)表格和/或說明應(yīng)單獨放置于防水的袋子里以防發(fā)生污染，不要綁在容器外 （八）容器的外包裝1、外包裝內(nèi)有吸水性材料和干冰、熱水袋等保溫性材料2、外包裝上應(yīng)有生物安全標(biāo)識（九）標(biāo)本的接收1、大規(guī)模接收標(biāo)本的實驗在專用房間或區(qū)域進行2、接收由2人同時完成，接收人員應(yīng)受過防護培訓(xùn)。明確所操作標(biāo)本的潛在健康危害，采取防護措施。3、檢查容器的外觀和標(biāo)簽是否完整、標(biāo)簽與內(nèi)容物：是否相符、是否有污染及容器是否破損等， 并登記標(biāo)本接收登

12、記表，記錄處置方法。4、對于容器破損、有液體外滲或懷疑污染的樣品，可以拒絕接收，囑其再次采集樣品送檢。（十）標(biāo)本包裝的打開1、標(biāo)本應(yīng)在生物安全柜中打開包裝，同時備有適當(dāng)?shù)南緞┮员闾幚砜赡艹霈F(xiàn)的標(biāo)本泄漏。2、操作人員應(yīng)穿防水的防護服，戴生物安全專用口罩、眼罩和手套。（十一）標(biāo)本的保存一一專人負責(zé)保存1、保存者需對照標(biāo)本送檢單，核對標(biāo)本數(shù)量、送檢狀態(tài)、標(biāo)本編號，并填寫標(biāo)本保存登記表。2、不同標(biāo)本按照不同存放要求分類存放，同時填寫標(biāo)本存放登記表。5種常見標(biāo)本分別是血培養(yǎng)標(biāo)本、血清標(biāo)本、尿液標(biāo)本、痰標(biāo)本和鼻咽拭子標(biāo)本。（一）血培養(yǎng)標(biāo)本1、用70%乙醇擦拭血液培養(yǎng)瓶，分別包裝后于室溫環(huán)境下立即送往實驗

13、室（冬季需保溫）；如果不能及時送檢，置于室溫，勿放冰箱2、標(biāo)本接收單位在接到標(biāo)本后， 首先應(yīng)檢查血培養(yǎng)物狀態(tài)及運輸溫度記錄，確認溫度記錄無誤血培養(yǎng)物狀態(tài)良好后及時進行培養(yǎng)（二）血清標(biāo)本1、新鮮的血清標(biāo)本可在4c條件下運輸，冷凍的血清標(biāo)本需在保持凍存的狀態(tài)下運輸2、需長期保存的標(biāo)本應(yīng)置于-70C冰箱（三）尿液標(biāo)本1、新鮮標(biāo)本在4c條件下運輸，冷凍的標(biāo)本需在保持凍存的狀態(tài)下運輸2、標(biāo)本接收單位在接到標(biāo)本后，首先應(yīng)檢查標(biāo)本狀態(tài)，填寫標(biāo)本接收登記表，并立即進行尿抗原檢測3、需長期保存的標(biāo)本應(yīng)置于-70C冰箱（四）痰標(biāo)本1、采用專用采痰盒采集痰液，并注意送檢期間的安全防護2、標(biāo)本需及時送檢以避免干燥，不能及時送檢者可暫存4 c冰箱內(nèi)12小時。不可在室溫下放置過長時間3、標(biāo)本接收單位在接到標(biāo)本后，首先應(yīng)檢查痰標(biāo)本狀態(tài)，填寫標(biāo)本接收登記表，確認痰標(biāo)本狀態(tài)良好后及時進行培養(yǎng)4、接收標(biāo)準(zhǔn)，目測：黃色、灰色、血性、鐵銹色、渾濁、稠厚呈現(xiàn)團塊狀的標(biāo)本為合格標(biāo)本；而無色透明0.1ml痰液用接0.1ml痰液用接10個/低倍視野種環(huán)均勻涂布成2 x 2cm大小的涂膜，在顯微鏡下合格痰標(biāo)本的涂片鏡檢，鱗狀上皮細胞 白細胞25個/低倍視野，或兩者比例小于 1 : 2.5為合格標(biāo)本，可進行細菌培養(yǎng)（五）鼻咽拭子標(biāo)本1、未能24小時內(nèi)送至實驗室的，應(yīng)置-70 C或以下保存2、凍存的標(biāo)