紫外分光光度計(jì)應(yīng)用

1、關(guān)于紫外分光光度計(jì)的應(yīng)用第一張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月分光光度法的特點(diǎn)1.靈敏度高2.準(zhǔn)確度高3.適用范圍廣4.操作簡便快速、應(yīng)用范圍廣第二張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月吸收光譜的分類遠(yuǎn)紫外線 波長范圍：10200nm 分析方法：真空紫外光度法近紫外線 波長范圍：200380nm 分析方法：紫外光度法可見線 波長范圍：380780nm 分析方法：比色及可見光度法第三張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月吸收光譜的分類近紅外線 波長范圍：0.782.5um 分析方法：近紅外光譜法中紅外線 波長范圍：2.55.0um 分析方法：中紅外光譜法遠(yuǎn)紅外線線 波長范圍：5.

2、01000um 分析方法：遠(yuǎn)紅外光譜法第四張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月溶液顏色與光吸收的關(guān)系互補(bǔ)色 兩種顏色的光按適當(dāng)強(qiáng)度比例混合時(shí)，可以形成白光，這兩種色光就稱為互補(bǔ)色。 黃 綠 青 | / 橙 白光 青藍(lán) / | 紅 紫紅 藍(lán)第五張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月溶液顏色與光吸收的關(guān)系白光通過溶液時(shí)，溶液沒有吸收的，該溶液呈無色透明狀。白光通過溶液時(shí)，溶液全部吸收的，該溶液呈黑色。白光通過溶液時(shí)，溶液選擇性吸收的，該溶液呈現(xiàn)被吸收波長光的互補(bǔ)色。 如：KMnO4溶液，吸綠色而呈紫紅色第六張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月光的吸收曲線將不同波長的光通過一定濃度和

3、厚度的有色溶液，分別測出它們對各種波長的吸光度，以波長為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)畫出曲線，稱為光的吸收曲線。光吸收程度最大處的波長稱為最大吸收波長。第七張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月光的吸收定律朗伯-比耳定律 光的吸收與溶液的厚度與溶液的濃度成正比。 A=kbc A-吸光度 b-溶液的厚度 c-溶液的濃度 k-比吸收系數(shù)第八張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月光的吸收定律透光率 透光率用T表示 透光率的到數(shù)的對數(shù)為吸光度 A=lg1/T比吸收系數(shù)含義 入射波長一定時(shí)，溶液濃度1%，液層厚度為1cm時(shí)的吸光度。 第九張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月光的吸收定律的適用范圍

4、各種有色的均勻溶液，一定的濃度范圍。超過一定的濃度范圍，曲線會(huì)發(fā)生正偏離或負(fù)偏離。偏離的原因1.入射光非單色光2.溶液中的化學(xué)反應(yīng)3.比耳定律的局限性 溶液濃度小于0.01mol/L的稀溶液第十張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月目視比色法工作原理 朗伯-比耳定律 : A=kbc 其中A、k、b相同，c必定相同。優(yōu)點(diǎn)1.儀器簡單，操作簡便2.液層較厚，靈敏度較高3.在特定條件下，不符合朗伯-比耳定律的溶液，仍可測定。缺點(diǎn) 準(zhǔn)確度較差第十一張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月紫外可見分光光度計(jì)主要部件 光源、單色器、吸收池、檢測器、測量系統(tǒng)部分性能 721分光光度計(jì) 波長范圍3608

5、00nm 玻璃棱鏡 讀數(shù)方式：指針式 754分光光度計(jì) 波長范圍200800nm 光柵 讀數(shù)方式：指針式 第十二張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月紫外可見分光光度計(jì)Cary-50分光光度計(jì) 波長范圍1901100nm 光柵 讀數(shù)方式：微機(jī) 具有掃描功能第十三張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月分光光度計(jì)的檢驗(yàn)與維護(hù)分光光度計(jì)的檢定周期: 一年環(huán)境要求 1.室溫應(yīng)保持在1528。 2.相對濕度應(yīng)在4565%,不應(yīng)超過75%。 3.防塵、防震、防電磁干擾。 4.防腐蝕。第十四張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月分光光度計(jì)的檢驗(yàn)與維護(hù)保養(yǎng)和維護(hù)方法 1.不用時(shí)不要開光源燈。 2.

6、不要拆開單色器，單色器是儀器的核心部分。 3.吸收池用后，立即洗凈，防止擦傷。 4.光電器件應(yīng)避免強(qiáng)光照射和受潮積塵。 5.儀器的工作電壓應(yīng)保持在220v10%，必要時(shí)配備溫壓器。第十五張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月分光光度法分光光度法兩種形式利用物質(zhì)本身對紫外或可見光的的吸收進(jìn)行測定生成有色化合物即“顯色”以后測定第十六張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月顯色反應(yīng)顯色反應(yīng)分為兩類絡(luò)合反應(yīng)氧化還原反應(yīng)其中絡(luò)合反應(yīng)是主要的顯色反應(yīng)第十七張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月顯色反應(yīng)的要求選擇性好靈敏度高有色化合物的離解常數(shù)要小有色化合物組成要恒定顯色劑有顏色時(shí)，要求有色化合

7、物與顯色劑的顏色差別要大，以減小試劑空白顯色反應(yīng)的條件要易于控制第十八張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月顯色劑無機(jī)顯色劑 硫氰酸鹽、鉬酸銨、過氧化氫有機(jī)顯色劑 鄰菲羅琳、雙硫腙、鉻天青S等第十九張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月反應(yīng)條件的選擇顯色劑的用量 顯色劑應(yīng)是過量的，保證顯色反應(yīng)的完全。但是顯色劑過量太多，容易引起副反應(yīng)，造成結(jié)果偏差。第二十張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月反應(yīng)條件的選擇溶液的酸度 1.溶液的酸度不同，顯色化合物的組成和顏色可能不同。 2.溶液的酸度變化，顯色劑的顏色可能發(fā)生變化。 3.溶液的酸度過高，降低配合物的穩(wěn)定性。溶液的酸度過低，會(huì)引起金

8、屬離子水解。第二十一張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月反應(yīng)條件的選擇溫度的影響 室溫進(jìn)行顯色的、加熱顯色 溫度對光的吸收和顏色的深淺都有影響顯色時(shí)間 1.立即顯色，放置后顏色穩(wěn)定 2.放置一定時(shí)間后，進(jìn)行比色 3.立即顯色，放置后顏色逐漸褪去第二十二張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月反應(yīng)條件的選擇溶劑 有機(jī)溶劑常會(huì)降低有色化合物的離解度，從而提高顯色反應(yīng)的的靈敏度 常用溶劑的波長下限（10mm池） 水205nm 乙醇 95% 204nm 乙晴 190nm 苯280nm甲醇205nm 乙醚215nm 氯仿245nm 四氯化碳245nm丙酮330nm第二十三張，PPT共三十四頁，創(chuàng)

9、作于2022年6月共存離子的干擾與試劑生成有色化合物干擾離子本身有顏色與試劑反應(yīng)，生成配合物無顏色，消耗大量顯色劑，使被測離子顯色反應(yīng)不完全與被測離子結(jié)合成離解度小的另一種化合物，使被測離子與顯色劑不反應(yīng)第二十四張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月干擾的消除方法控制溶液酸度加入掩蔽劑利用氧化還原反應(yīng)改變干擾離子的價(jià)態(tài)選擇適當(dāng)?shù)膮⒈热芤哼x擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL采用適當(dāng)?shù)姆蛛x方法除去干擾離子利用導(dǎo)數(shù)光譜法、雙波長法等新技術(shù)第二十五張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月參比溶液的選擇參比溶液的作用：用于分光光度計(jì)的吸光度調(diào)零溶劑參比 水或有機(jī)溶劑試劑參比 不加試樣的試劑試液參比 不加顯色劑的試液其他

10、參比 試樣+掩蔽劑+顯色劑+其他試劑第二十六張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月測定條件的選擇入射光波長的選擇 入射光波長的選擇從靈敏度和選擇性兩個(gè)方面來選擇。 靈敏度最高應(yīng)是最大吸收波長 選擇性最高應(yīng)是干擾最小的吸收波長第二十七張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月測定條件的選擇吸光度范圍的控制 最適宜吸光度范圍0.20.8 透光率為（15%65%）調(diào)節(jié)最適宜吸光度的方法 1.調(diào)節(jié)溶液濃度 2.使用厚度不同的吸收池 第二十八張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月定量分析工作曲線法 4個(gè)以上的濃度，以空白溶液為參比，在選定的波長下，分別測定吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱座標(biāo)，繪制工作曲線。 工作曲線為 y=a+bx x為標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，y為吸光度，b為直線斜率，a為直線截距，a和b稱為回歸系數(shù)第二十九張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月工作曲線法工作曲線的好壞可以用相關(guān)系數(shù)r來表示相關(guān)系數(shù)越接近1線形關(guān)系越好。一般的光度分析方法r0.999曲線強(qiáng)制過原點(diǎn)時(shí)曲線演變?yōu)?y=bx當(dāng)更換標(biāo)準(zhǔn)溶液、試劑重配時(shí)應(yīng)重新繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線第三十張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月標(biāo)準(zhǔn)對照法即采用一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液，與原點(diǎn)構(gòu)成工作曲線計(jì)算公式為 c樣= A樣/A標(biāo) c標(biāo)注意標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸光度應(yīng)控制在0.40.8以內(nèi)較好第三十一張，PPT共三十四