細(xì)胞技術(shù)方法與傳代方法

1、關(guān)于細(xì)胞技術(shù)方法和傳代方法第一張，PPT共十頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞的傳代方法培養(yǎng)細(xì)胞的方法主要講2方面問題：第二張，PPT共十頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞計(jì)數(shù)培養(yǎng)的細(xì)胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長良好，所以要進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)結(jié)果以每毫升細(xì)胞數(shù)表示。細(xì)胞計(jì)數(shù)的原理和方法與血細(xì)胞計(jì)數(shù)相同。血細(xì)胞計(jì)數(shù)器：手工計(jì)數(shù)細(xì)胞Coulter計(jì)數(shù)儀：人工計(jì)數(shù)第三張，PPT共十頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞計(jì)數(shù)：1、將血球計(jì)數(shù)板及蓋片擦拭干凈，并將蓋片蓋在計(jì)數(shù)板上。2、將細(xì)胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計(jì)數(shù)板之間。3、靜置3分鐘。第四張，PPT共十頁，創(chuàng)作于2022年6月4、鏡下觀

2、察，計(jì)算計(jì)數(shù)板四大格細(xì)胞總數(shù)，壓線細(xì)胞只計(jì)左側(cè)和上方的。然后按下式計(jì)算：細(xì)胞數(shù)/ml4大格細(xì)胞總數(shù)/ 410000注意：鏡下偶見由兩個(gè)以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)，應(yīng)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)算，若細(xì)胞團(tuán)占10%以上，說明分散不好，需重新制備細(xì)胞懸液。第五張，PPT共十頁，創(chuàng)作于2022年6月根據(jù)細(xì)胞生長的恃點(diǎn)，傳代方法有3種：1懸浮生長細(xì)胞傳代 離心法傳代：離心（1000轉(zhuǎn)/分）去上清，沉淀物加新培養(yǎng)液后再混勻傳代。 直接傳代法：懸浮細(xì)胞沉淀在瓶壁時(shí)，將上清培養(yǎng)液去除l2一23，然后用吸管直接吹打形成細(xì)胞懸液再傳代。細(xì)胞傳代方法第六張，PPT共十頁，創(chuàng)作于2022年6月2半懸浮生長細(xì)胞傳代（Hela細(xì)胞） 此類細(xì)

3、胞部分呈現(xiàn)貼壁生長現(xiàn)象，但貼壁不牢，可用直接吹打法使細(xì)胞從瓶壁脫落下來，進(jìn)行傳代。3貼壁生長細(xì)胞傳代 采用酶消化法傳代。常用的消化液有0.25的胰蛋白酶液。第七張，PPT共十頁，創(chuàng)作于2022年6月貼壁生長細(xì)胞傳代方法：1 吸光培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液2 加入1-2 ml 0.25的胰蛋白酶液(以消化液能覆蓋整個(gè)瓶底為準(zhǔn)）靜置2-10 min（顯微鏡下動(dòng)態(tài)監(jiān)測）。3 吸去胰蛋白酶液，加入培養(yǎng)液。4 用吸管吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液，反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，形成細(xì)胞懸液。第八張，PPT共十頁，創(chuàng)作于2022年6月5 離心，細(xì)胞沉淀用培養(yǎng)液制成懸液。5 吸取1/101/40細(xì)胞懸液，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。6 加適量新鮮培養(yǎng)液于接種了細(xì)胞懸液的新培養(yǎng)瓶內(nèi)。7 將后者放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。