一輪復(fù)習(xí) 浙科版 微生物的培養(yǎng) 學(xué)案 浙江專用

1、第32講微生物的培養(yǎng)課標(biāo)要求3.1.獲得純凈的微生物是發(fā)酵工程的基礎(chǔ)?；顒樱?1)通過配制培養(yǎng)基、滅菌、接種和培養(yǎng)等實驗操作獲得純化的酵母菌落。(2)能分解尿素的微生物的分離與計數(shù)?？键c一微生物的培養(yǎng)需要適宜條件1培養(yǎng)基為目標(biāo)微生物提供適宜的生長環(huán)境eq avs4al(提醒)培養(yǎng)基中加入的凝固劑，如瓊脂，瓊脂在培養(yǎng)基中僅作為凝固劑，不能為微生物提供能量和營養(yǎng)。2滅菌和無菌操作技術(shù)(1)滅菌(2)消毒eq avs4al(提醒)滅菌的效果比消毒要好?；铙w生物材料、操作者的手等只能消毒，而不能滅菌。(3)防腐3接種4配制可用于培養(yǎng)酵母菌的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(1)目的要求：配制液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。(

2、2)方法步驟：計算配制20%馬鈴薯浸汁制備斜面、固體和液體培養(yǎng)基制作棉塞。(1)所有的培養(yǎng)基中都要加入瓊脂。()(2)為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落。()(3)培養(yǎng)不同微生物的培養(yǎng)基成分完全一樣。()(4)獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染。()(5)滅菌相比消毒對微生物的殺滅更徹底。()(6)倒平板后，待平板冷凝之后需將其倒置。()答案：(1)(2)(3)(4)(5)(6)1培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的確定方法(1)自養(yǎng)型微生物所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)是無機物，碳源可由大氣中的CO 2提供，氮源可由含氮無機鹽提供。(2)異養(yǎng)型微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)主要是有機物，即碳源必須由含碳有機物提供，

3、氮源也主要由有機物提供，部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無機氮源。(3)幾種微生物的營養(yǎng)和能量來源微生物碳源氮源能源藍細菌CO2NHeq oal(,4)、NOeq oal(,3)等光能硝化細菌CO2NH3NH3的氧化根瘤菌糖類等有機物N2有機物酵母菌糖類、蛋白質(zhì)等有機物蛋白質(zhì)等有機物2.消毒和滅菌的比較項目條件結(jié)果常用方法應(yīng)用范圍消毒較溫和的物理、化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高溫的液體化學(xué)藥物消毒法用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源紫外線消毒法接種室、接種箱、超凈工作臺等滅菌強烈的物理、化學(xué)方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌法接種工具等干熱滅

4、菌法玻璃器皿、金屬工具等高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)基、容器等突破1無菌操作技術(shù)核心素養(yǎng)生命觀念1(2019高考江蘇卷)下列關(guān)于微生物實驗操作的敘述，錯誤的是()A培養(yǎng)微生物的試劑和器具都要進行高壓蒸汽滅菌B接種前后，接種環(huán)都要在酒精燈火焰上進行灼燒C接種后的培養(yǎng)皿要倒置，以防培養(yǎng)污染D菌種分離和菌落計數(shù)都可以使用固體培養(yǎng)基解析：選A。接種環(huán)、涂布器需進行灼燒滅菌，A錯誤。2培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實驗操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌或消毒方法依次是()化學(xué)消毒法灼燒滅菌法干熱滅菌法紫外線消毒法高壓蒸汽滅菌法巴氏消毒法ABC D解析：選A。培養(yǎng)基用高壓滅菌鍋進行高壓蒸汽滅菌；培養(yǎng)皿能耐高溫，需進行干

5、熱滅菌；接種環(huán)可用灼燒滅菌達到迅速、徹底的滅菌效果；實驗操作者的雙手可用化學(xué)藥劑進行消毒，如用酒精擦拭；空氣可用紫外線消毒法來消毒；為了不破壞牛奶的營養(yǎng)成分，可采用巴氏消毒法對其進行消毒。突破2微生物的實驗室培養(yǎng)核心素養(yǎng)科學(xué)探究3(2020浙江7月選考)下列關(guān)于微生物培養(yǎng)及利用的敘述，錯誤的是()A利用尿素固體培養(yǎng)基可迅速殺死其他微生物，而保留利用尿素的微生物B配制培養(yǎng)基時應(yīng)根據(jù)微生物的種類調(diào)整培養(yǎng)基的pHC酵母菌不能直接利用糯米淀粉發(fā)酵得到糯米酒D適宜濃度的酒精可使醋化醋桿菌(醋酸菌)活化解析：選A。利用尿素固體培養(yǎng)基篩選尿素分解菌時，尿素固體培養(yǎng)基并不能直接殺死其他微生物，而是其他微生物不

6、能以尿素為氮源，無法在尿素固體培養(yǎng)基中存活，A錯誤。4(2022舟山模擬)下表表示某培養(yǎng)基的配方，下列敘述正確的是()成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4伊紅美藍蒸餾水含量10 g10 g2 g0.4 g0.065 g1 000 mLA.從用途看，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基B培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是蛋白胨C該培養(yǎng)基沒有提供維生素等營養(yǎng)D該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到合適的pH后就可以接種使用答案：B事實概述類1牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法，與煮沸消毒法相比，這兩種方法的優(yōu)點是_。答案：在達到消毒目的的同時，營養(yǎng)物質(zhì)損失較少2分離培養(yǎng)酵母菌通常使用_(填“LB液體”“MS”或“馬鈴

7、薯蔗糖”)培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基應(yīng)采用_滅菌法滅菌。若將酵母菌劃線接種在平板上，培養(yǎng)一段時間后可觀察到菌落，菌落的含義是_。答案：馬鈴薯蔗糖高壓蒸汽由一個細胞分裂形成的、肉眼可見的、有一定形態(tài)構(gòu)造的子細胞集團原因分析類3在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？_，原因是_。答案：不能空氣中的微生物可能在皿蓋和皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，從而造成污染4培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻至60 時，才能倒平板的原因是_。答案：倒平板時高于60 則會燙手，低于60 時若不及時操作，瓊脂會凝固5采用下表配方配制的培養(yǎng)液分離果膠酶產(chǎn)生菌時，該表X處的成分應(yīng)是_(填“葡萄糖”

8、或“果膠”)，不選另一種成分的原因是_。K2HPO4MgSO4NaNO3FeSO4XH2O0.1 g0.5 g3 g0.01 g2 g加至1 L答案：果膠大多數(shù)微生物以葡萄糖作為碳源，不具有選擇作用開放思維類6經(jīng)多次規(guī)范操作、重復(fù)實驗，平板上均出現(xiàn)_的菌落，初步證明鮮牛奶中存在金黃色葡萄球菌，但鮮牛奶供應(yīng)商仍認為此菌并非鮮牛奶所攜帶，因此，要對本操作進行完善，完善的方案是_。答案：金黃色葡萄球菌為增強實驗結(jié)論的嚴(yán)謹(jǐn)性，應(yīng)增加空白對照組考點二純凈的目標(biāo)微生物可通過分離和純化獲得1對目標(biāo)微生物分離和純化的方法(1)平板劃線法(2)稀釋涂布平板法2微生物的數(shù)量測定(1)稀釋涂布平板法(2)顯微鏡計數(shù)

9、法3選擇培養(yǎng)基(1)不同自然環(huán)境中生活著的微生物代謝類型不盡相同。(2)許多微生物的代謝方式并不唯一。(3)培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的濃度及比例都會影響微生物的生長。(4)選擇培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中添加(或減去)某種化學(xué)成分，使得只有某些特定的微生物能夠生長，其他微生物均不能生長。4能分解尿素的微生物的分離與計數(shù)(1)原理當(dāng)培養(yǎng)基中只有尿素作為氮源時，只有能分泌脲酶的微生物才能在該培養(yǎng)基中生長。它們可以通過脲酶將尿素降解為氨，作為其生長的氮源。微生物分解尿素產(chǎn)生的氨會使培養(yǎng)基的堿性增強，若在培養(yǎng)基中加入在酸性情況下呈黃色、堿性情況下呈紅色的酚紅指示劑，就可根據(jù)菌落周圍是否出現(xiàn)紅色區(qū)域，進一步鑒定尿素分解菌

10、。在相同培養(yǎng)條件下，圓形紅色區(qū)域愈大，表明這種菌利用尿素的能力愈強。eq avs4al(提醒)尿素為該培養(yǎng)基的唯一氮源，只有能產(chǎn)生脲酶的微生物才能將尿素分解為氨，供自身利用，其他微生物由于缺少氮源而無法生長繁殖。(2)方法步驟1選擇培養(yǎng)基的制作方法2兩種純化細菌的方法的比較項目平板劃線法稀釋涂布平板法純化原理通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面將菌液進行一系列的梯度稀釋，稀釋度足夠高時，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞主要步驟平板劃線操作系列稀釋操作和涂布平板操作接種工具接種環(huán)涂布器3.平板劃線法操作的注意事項(1)灼燒接種環(huán)之后，要待其冷卻后才能

11、蘸取菌液，以免溫度太高殺死菌種。(2)在作第二次及以后的劃線操作時，總是從上一次劃線的末端開始劃線，這樣才能使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而減少，最終得到由單個微生物繁殖而來的菌落。(3)劃線時最后一次的劃線不要與第一次的劃線相連。(4)劃線力度要適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。(5)平板劃線操作中幾次灼燒接種環(huán)的目的項目第一次劃線前灼燒每次劃線前灼燒劃線結(jié)束后灼燒目的避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物殺死上一次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使每次劃線的菌種均來自上一次劃線的末端殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免菌種污染環(huán)境和感染操作者4.微生物的分離與計數(shù)實驗中對照組和重復(fù)組的設(shè)置及作用(1

12、)兩種對照組的設(shè)置及作用判斷培養(yǎng)基中“是否有雜菌污染”，需將未接種的培養(yǎng)基同時進行培養(yǎng)。判斷選擇培養(yǎng)基“是否具有篩選作用”，需設(shè)置LB固體培養(yǎng)基進行接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目，進行對比得出結(jié)論。(2)重復(fù)組的設(shè)置及作用：為排除偶然因素對實驗結(jié)果的干擾，在每一稀釋度下宜設(shè)置至少3個平板作重復(fù)組，用“平均值”代入計算公式予以計算菌落數(shù)。突破1微生物的選擇培養(yǎng)核心素養(yǎng)生命觀念1(2022杭州期末)下列有關(guān)土壤中尿素分解菌的分離和培養(yǎng)的敘述，正確的是()A培養(yǎng)基中以尿素作為唯一氮源，該培養(yǎng)基是鑒別培養(yǎng)基B微生物培養(yǎng)常用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法C細菌合成的脲酶能將尿素分解成氨，

13、氨會使培養(yǎng)基的酸性增強，pH降低D若上述培養(yǎng)基被雜菌污染，則培養(yǎng)基上會有多種雜菌菌落出現(xiàn)答案：B2某研究小組從黃色短桿菌(能合成L亮氨酸)中篩選L亮氨酸缺陷型(不能合成L亮氨酸)突變菌株，實驗流程如下圖所示?；卮鹣铝袉栴}：(1)培養(yǎng)基滅菌常用的方法是_。(2)過程的接種方法是_。過程接種時，先將滅菌后的金絲絨與培養(yǎng)皿A中的菌落接觸一次，然后像蓋印章一樣將菌種連續(xù)接種到培養(yǎng)皿B和C的培養(yǎng)基表面，這種接種方法便于將來比較培養(yǎng)皿B、C中菌落的差異，原因是_。(3)培養(yǎng)皿A、B、C中的培養(yǎng)基都要使用固體培養(yǎng)基，原因是_。若培養(yǎng)皿B的培養(yǎng)基中含有L亮氨酸，培養(yǎng)皿C的培養(yǎng)基中不含L亮氨酸，培養(yǎng)一段時間后菌

14、落生長情況如圖所示，研究人員應(yīng)該從培養(yǎng)皿_(填“B”或“C”)中選取目的菌落。答案：(1)高壓蒸汽滅菌法(2)稀釋涂布平板法培養(yǎng)皿B、C中的菌種接種位置相同(3)便于觀察菌落特征和分離目的菌株B突破2微生物的分離與計數(shù)核心素養(yǎng)科學(xué)探究3(2022浙江紹興高二期末)下列有關(guān)能分解尿素的微生物的分離與計數(shù)實驗的敘述，正確的是()A實驗中采集的土樣經(jīng)高溫滅菌后，可以用于制取土壤稀釋液B分離土壤中能分解尿素的微生物時，應(yīng)選擇以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基C測定土壤樣品中的活菌數(shù)目，常用顯微鏡計數(shù)法D接種土壤微生物稀釋液時，平板劃線法通過連續(xù)劃線的操作使微生物均勻分布解析：選B。在分離土壤中的尿素分解菌實驗中

15、，采集的土樣經(jīng)高溫滅菌后，土樣中的微生物被殺死，再制取土壤稀釋液接種并培養(yǎng)，不會得到菌落，A錯誤；分離土壤中能分解尿素的微生物時，應(yīng)選擇以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，只有能利用尿素的微生物才能生長繁殖，B正確；測定土壤樣品中的活菌數(shù)目，常用稀釋涂布平板法，顯微鏡計數(shù)法是將活菌和死菌一同計數(shù)，C錯誤；接種土壤微生物稀釋液時，稀釋涂布平板法的操作使微生物均勻分布，D錯誤。4尿素容易保存，是目前使用量較大的一種化學(xué)氮肥，尿素分子并不能直接被農(nóng)作物吸收，只有被尿素分解菌分解成氨之后，才能被植物利用。下圖是從土壤中分離、計數(shù)尿素分解菌的過程，有關(guān)分析正確的是()A若過程稀釋了10倍，則乙錐形瓶里盛有9 mL

16、無菌水B的接種方法可用平板劃線法或稀釋涂布平板法Ca、b、c培養(yǎng)基可以用LB固體培養(yǎng)基D若過程稀釋了10倍，a、b、c培養(yǎng)基上的菌落數(shù)依次為57、58、56個，則10 g土樣中的尿素分解菌數(shù)量為5.7109個解析：選D。過程加入了2 mL菌液，若稀釋了10倍，則乙錐形瓶里應(yīng)盛有18 mL無菌水，A錯誤；平板劃線法不能計數(shù)，的接種方法不能用平板劃線法，B錯誤；酵母浸膏和蛋白胨均可提供氮源，a、b、c培養(yǎng)基應(yīng)以尿素為唯一氮源，C錯誤；a、b、c培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)為57個，10 g土樣加入90 mL無菌水相當(dāng)于稀釋了10倍，則由題圖可知，共稀釋了1106倍，根據(jù)稀釋涂布平板法的計算公式，每克樣品中

17、的菌株數(shù)(570.1)1065.7108(個)，所以10 g土樣可含有尿素分解菌5.7109個，D正確。原因分析類1在涂布平板時，滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量不宜過多的原因是_。答案：培養(yǎng)基表面的菌懸液會出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積，影響分離效果2為了篩選可分解尿素的細菌，在配制培養(yǎng)基時，應(yīng)選擇_(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素NH4NO3”)作為氮源，不選擇其他兩組的原因是_。答案：尿素其他兩組都含有NH4NO3，能分解尿素的細菌和不能分解尿素的細菌都能利用NH4NO3，不能起到篩選作用3在實驗中，研究者每隔24 h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，并選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止_。答案：因培養(yǎng)時間不足導(dǎo)致遺漏細菌數(shù)目4對細菌計數(shù)時往往會產(chǎn)生實驗誤差，稀釋涂布平板法計數(shù)的值比實際值_，原因是_；顯微計數(shù)法計數(shù)的結(jié)果比實際值_，原因是_。答案：偏小當(dāng)兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落偏大顯微鏡下無法區(qū)分細胞的死活，計數(shù)時包括了死細胞5我國的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)是每1 000 mL飲用水中大腸桿菌不得超過3個，在培養(yǎng)基上每1 000 mL合格飲用水形成的菌落數(shù)卻大于了3個，原因是_。答案：飲用水中還有其他細菌，形成的菌落數(shù)遠大于3個6某同學(xué)計劃統(tǒng)計污水池中目的菌的總數(shù)，他選用104、105、106稀釋液進行平板劃線，每種稀釋液都設(shè)置了3個培養(yǎng)皿，從設(shè)計實驗的角度看，還