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1、第39講 細(xì)胞工程考點(diǎn)二 動(dòng)物細(xì)胞工程固必備知識(shí)提關(guān)鍵能力固必備知識(shí)一、動(dòng)物細(xì)胞工程的技術(shù)手段主要有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、_、_、單克隆抗體的制備等。_是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。動(dòng)物體細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1.過(guò)程2.培養(yǎng)條件(1) 培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無(wú)菌處理培養(yǎng)液中添加一定量的_定期更換_,清除代謝產(chǎn)物一定量的抗生素培養(yǎng)液(2) 營(yíng)養(yǎng):除糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素之外,通常還需加入_等一些天然成分。血清、血漿無(wú)菌、無(wú)毒 的環(huán)境(4) 細(xì)胞代謝氣體環(huán)境三、動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)(核移植技術(shù))1.原理:_。動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性2.哺乳動(dòng)物核移植分類:_移植和體細(xì)胞
2、核移植。胚胎細(xì)胞核3.體細(xì)胞核移植過(guò)程(以高產(chǎn)奶??寺槔?.選用去核卵母細(xì)胞的原因:卵母細(xì)胞比較大,易操作;卵母細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)多,_,含有_的物質(zhì)。5.體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問(wèn)題: _ 。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富促進(jìn)核全能性表達(dá)克隆動(dòng)物普遍存在著健康問(wèn)題、表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷等四、動(dòng)物細(xì)胞融合1.動(dòng)物細(xì)胞融合原理:_。細(xì)胞膜具有流動(dòng)性2.動(dòng)物細(xì)胞融合方法:物理法(離心、振動(dòng)、電激)、化學(xué)法(聚乙二醇)和_。生物法(滅活的病毒)3.結(jié)果:形成雜交細(xì)胞。4.意義:突破了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。5.應(yīng)用:制備單克隆抗體。五、單克隆抗體的制備1.單克隆抗體的制備過(guò)程雜交瘤細(xì)胞所需抗體(2)用于疾病的診斷、治療、預(yù)防
3、。如單抗診斷試劑盒,具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn);“生物導(dǎo)彈”定向消滅癌細(xì)胞,不損傷健康細(xì)胞。2.單克隆抗體的特點(diǎn):_,并可大量制備。特異性強(qiáng)、靈敏度高3.應(yīng)用(1)在理論研究中具有重要意義。 5.核移植產(chǎn)生的克隆動(dòng)物與提供細(xì)胞核的親本性狀可能不同,其原因主要包括以下幾個(gè)方面: (1)克隆動(dòng)物的細(xì)胞質(zhì)基因來(lái)源于另一個(gè)親本,與植物組織培養(yǎng)不同(來(lái)自一個(gè)親本),即克隆動(dòng)物遺傳物質(zhì)來(lái)自兩個(gè)親本。 (2)在發(fā)育過(guò)程中可能發(fā)生基因突變、染色體變異,從而導(dǎo)致性狀改變。 (3)外界環(huán)境條件的影響引起不可遺傳的變異。下圖可表示細(xì)胞融合技術(shù)的一些過(guò)程,請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題:滅活的病毒雜交瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)基專一抗
4、體體外培養(yǎng)小鼠腹腔甲提關(guān)鍵能力考向1 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)滅活的病毒B淋巴(漿)骨髓瘤(2) 若圖示為植物體細(xì)胞雜交過(guò)程,則在甲、乙融合之前,需要用_(填工具酶)制備_。這項(xiàng)工程的意義是_。纖維素酶和果膠酶原生質(zhì)體克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙,擴(kuò)大了親本組合的范圍解析 在植物體細(xì)胞雜交過(guò)程中,需要對(duì)甲、乙細(xì)胞先用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁,然后再誘導(dǎo)甲、乙的原生質(zhì)體融合。該技術(shù)可以克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙,擴(kuò)大親本組合的范圍。(3) 由甲、乙融合得到丙細(xì)胞的基本原理是_。細(xì)胞膜具有流動(dòng)性解析 甲、乙細(xì)胞融合形成丙細(xì)胞,利用了細(xì)胞膜的流動(dòng)性。(1) 獲得食蟹猴的體細(xì)胞核移植技術(shù)難度明顯高于胚胎
5、細(xì)胞核移植技術(shù),原因是_,恢復(fù)其全能性較難。體細(xì)胞分化程度高解析 由于體細(xì)胞分化程度高,全能性難以恢復(fù),因此獲得食蟹猴的體細(xì)胞核移植技術(shù)難度明顯高于胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)。(2) 進(jìn)行過(guò)程時(shí),培養(yǎng)成纖維細(xì)胞所需的條件有營(yíng)養(yǎng)、氣體環(huán)境以及_、_。無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境(3) 過(guò)程中通過(guò)_,將成纖維細(xì)胞注入去核的_期的卵母細(xì)胞中。顯微操作翻譯(5) 若獲得的體細(xì)胞核移植的食蟹猴與供體食蟹猴性狀不完全相同,從遺傳物質(zhì)的角度分析其原因是_。卵母細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會(huì)對(duì)克隆動(dòng)物的性狀產(chǎn)生影響解析 從遺傳物質(zhì)的角度來(lái)說(shuō),體細(xì)胞核移植的食蟹猴與供體食蟹猴性狀不完全相同,是因?yàn)槁涯讣?xì)胞細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會(huì)對(duì)克隆動(dòng)物的
6、性狀產(chǎn)生影響??枷? 動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體既能大量增殖,又能產(chǎn)生專一的抗體解析 雜交瘤細(xì)胞具有兩種細(xì)胞的遺傳物質(zhì),既能大量增殖,又能產(chǎn)生專一的抗體。(3) 由圖可看出,單克隆抗體制備過(guò)程運(yùn)用了_和_的動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)手段。動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)解析 從圖中可看出,單克隆抗體的制備運(yùn)用了動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。(4) 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基中含有糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素等,與植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基有所不同的是,通常動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中還含有_。血清、血漿解析 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基與植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基相比,最大的不同是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基中含有血清、血漿。(5) 在動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程中
7、,需要將所選取的組織細(xì)胞離散開,以利于細(xì)胞融合,可用_處理離體組織。胰蛋白酶(或膠原蛋白酶)解析 細(xì)胞融合是指兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程,為使動(dòng)物細(xì)胞離散開來(lái),可用胰蛋白酶(或膠原蛋白酶)處理離體組織。(6) 圖中有兩次篩選過(guò)程,其中步驟的目的是篩選出_,步驟的目的是篩選出_。雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細(xì)胞解析 由于細(xì)胞融合的方式有多種,會(huì)產(chǎn)生多種融合細(xì)胞,因此需進(jìn)行多次篩選。從圖中可看出,步驟是用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞,步驟是篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。解析 培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的方法有體內(nèi)培養(yǎng)和體外培養(yǎng)。前者的優(yōu)點(diǎn)是培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單,無(wú)須配制培養(yǎng)液;后者的優(yōu)點(diǎn)是在短期內(nèi)可獲
8、得大量單克隆抗體。單克隆抗體制備過(guò)程中兩次篩選分析項(xiàng)目第一次篩選第二次篩選篩選原因誘導(dǎo)融合后會(huì)得到多種融合細(xì)胞,另外還有未融合的細(xì)胞由于小鼠在生活中還受到其他抗原的刺激,因此經(jīng)選擇性培養(yǎng)獲得的雜交瘤細(xì)胞中有能產(chǎn)生其他抗體的細(xì)胞篩選方法用特定的選擇培養(yǎng)基篩選:未融合的細(xì)胞和同種細(xì)胞融合后形成的細(xì)胞(“ ”細(xì)胞、 “瘤瘤”細(xì)胞)都會(huì)死亡,只有融合的雜交瘤細(xì)胞(“ 瘤”細(xì)胞)才能生長(zhǎng)用多孔培養(yǎng)板培養(yǎng),在每個(gè)孔中只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開始克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè),經(jīng)多次篩選得到能產(chǎn)生專一抗體的細(xì)胞群篩選目的得到雜交瘤細(xì)胞得到能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞 .(2021吉林測(cè)試)胃癌是我國(guó)發(fā)生率很高的一種惡性疾病,制備抑制胃癌細(xì)胞增殖的單克隆抗體對(duì)治療胃癌具有重要意義??刮赴﹩慰寺】贵w制備過(guò)程如下圖。(1) 抗胃癌單克隆抗體制備過(guò)程中要用到_技術(shù)。解析 單克隆抗體制備過(guò)程中要用到動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞融合(2) 甲代表_細(xì)胞。(3) 誘導(dǎo)骨髓瘤細(xì)胞與甲融合,可用的誘導(dǎo)因素有_等(寫出兩種)。聚乙二醇、滅活的病毒、電激解析 誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合,常用的誘導(dǎo)方法有物理法(電激)、化學(xué)法(聚乙二醇)、生物法(滅活的病毒)等。人的胃癌細(xì)胞(5) 在甲、丙及骨髓
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