病毒感染檢查和防治

1、關(guān)于病毒感染的檢查和防治第一張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月一、標本的采集與送檢基本原則與細菌的相似，但還要特別注意：對本身帶有雜菌或易受污染的標本，分離培養(yǎng)時應(yīng)使用抗生素。低溫保存并盡快送檢，因病毒在室溫易失去活性。血清學診斷標本應(yīng)采集發(fā)病初期和病后23w內(nèi)各一份血清，觀察其抗體的動態(tài)變化。第二張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月二、病毒的分離與鑒定（金標準）病毒的分離 1. 動物接種 2. 雞胚培養(yǎng)：按病毒種類接種不同部位 絨毛尿囊膜 天花病毒、痘苗病毒、HSV等 尿囊腔 流感病毒、腮腺炎病毒等 羊膜腔 流感病毒的初次培養(yǎng) 卵黃囊 某些嗜神經(jīng)病毒 3. 細胞培養(yǎng)：病毒分離鑒定中

2、最常用的方法。 按其生長方式分為單層培養(yǎng)和懸浮細胞培養(yǎng) 按來源、染色體特征及傳代次數(shù)等分為原代細胞、二倍 體細胞和傳代細胞系 第三張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月病毒在培養(yǎng)細胞中增殖的指標1. 細胞的變化 細胞病變效應(yīng)（cytopathic effect, CPE）：有些病毒在細胞內(nèi)增殖時可引起特有的細胞病變。 細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等； 鄰近的細胞相互融合形成巨細胞(融合細胞)如：麻疹病毒、巨細胞病毒； 在培養(yǎng)細胞中形成胞質(zhì)或核內(nèi)包涵體，如狂犬病病毒、麻疹病毒2. 紅細胞吸附(hemadsorption,HAd) 具有血凝素的病毒（流感病毒等），使受染細胞膜含有病毒血凝素抗

3、原成分，能與紅細胞結(jié)合出現(xiàn)紅細胞吸附現(xiàn)象，以檢測是否有病毒在細胞內(nèi)增殖。3.干擾現(xiàn)象(interference) 某些病毒感染細胞時不出現(xiàn)CPE、Had等變化，但能干擾在其后感染的另一病毒的增殖，從而阻抑后者所特有的CPE。4. 細胞代謝的改變 培養(yǎng)液的PH改變 第四張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月 病毒的數(shù)量與感染性測定 常用的方法：蝕斑測定法和50%組織細胞感染量（ID50或TCID50） 空斑形成單位（PFU）：可測定病毒數(shù)量，空斑（P1aque）是病毒在單層細胞中增殖并擴散而形成的不易著色的病灶區(qū)。一般是由一個感染性病毒體大量復制形成，類似細菌的菌落，稱為空斑形成單位。病毒懸液

4、中感染性病毒量以每毫升中的空斑形成單位數(shù)來表示。 50組織細胞感染量（TCID50） 是病毒毒力測定的方法，應(yīng)用不同稀釋度的病毒懸液接種動物、雞胚或細胞培養(yǎng)，引起50發(fā)生病變或死亡的最小病毒量?？梢怨烙嫴《靖腥镜膹娙醭潭燃昂俊?第五張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月 新分離病毒的鑒定病毒核酸類型的測定 DNA病毒和RNA病毒理化形狀的測定 包括病毒顆粒大小及結(jié)構(gòu)、衣殼對稱類型、有無包膜等形態(tài)學觀察 通過電鏡和免疫電鏡檢查血清學鑒定 病毒型別的最后鑒定須靠血清學方法基因測序和生化對比第六張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月三、病毒感染的血清學診斷中和試驗(neutralizing t

5、est) 病毒在活體內(nèi)或細胞培養(yǎng)中被特異性抗體中和而失去感染性的一種試驗，可用來檢查患者血清中抗體的消長情況，也可用來鑒定未知病毒或研究病毒的抗原結(jié)構(gòu)。適用于人群免疫情況的調(diào)查。 補體結(jié)合試驗(comolement fixation test, CF test) 用已知病毒可溶性補體抗原來檢測病人血清中相應(yīng)的補體抗體。血凝抑制試驗(hemagglutinatia inhibition test, HI test) 相應(yīng)的抗體與病毒結(jié)合后，阻抑了病毒表面的HA與紅細胞的結(jié)合。常用于粘病毒及乙型腦炎病毒感染的輔助診斷及流行病學調(diào)查，也可鑒定病毒的型與亞型。凝膠免疫擴散試驗 主要用于診斷HBV與乙型

6、腦炎病毒等感染。第七張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月四、病毒感染的快速診斷形態(tài)學檢查 1.電鏡和免疫電鏡檢查 2.普通光學顯微鏡檢查病毒蛋白抗原檢查 1.免疫熒光法 ( IF ) 2.固相放射免疫測定（SPRIA） 3.酶免疫測定（EIA）特異性IgM抗體的檢測檢測病毒核酸 1.核酸雜交技術(shù) 斑點雜交、DNA印跡技術(shù) 2.核酸擴增技術(shù) 聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reation,PCR)連接酶鏈反應(yīng)(ligase chain reation,LCR)反轉(zhuǎn)錄PCR (RT-PCR) 3.基因芯片技術(shù)(gene chip)第八張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月 特

7、異性預(yù)防與治療 特異性防治是應(yīng)用獲得性免疫的原理，給機體注射或服用病原微生物抗原（包括類毒素）或特異性抗體以達到預(yù)防和治療的目的。這種方法稱為人工免疫(artifical immunization)。 人工免疫分為人工主動免疫和人工被動免疫。 人工主動免疫(artifical active immunization)：將疫苗及類毒素（抗原）接種于人體，使機體主動產(chǎn)生獲得性免疫力。主要用于預(yù)防。 人工被動免疫(artifical passive immunization)：輸入含有特異性抗體的免疫血清、純化免疫球蛋白抗體或細胞因子等免疫制劑，使機體立即獲得特異性免疫力的過程第九張，PPT共十七頁

8、，創(chuàng)作于2022年6月一、人工主動免疫疫苗 1. 死疫苗(killed vaccine) 用物理或化學方法將其殺死病原微生物，但仍保持其抗原性的一種生物制劑。如霍亂、百日咳、傷寒、鉤端螺旋體疫苗等。 2. 活疫苗(living vaccine) 通過毒力變異或人工選擇發(fā)而獲得的減毒或無毒株，或從自然界篩選得到的毒力弱毒或無毒株經(jīng)培養(yǎng)后制成的疫苗亦稱減毒疫苗(attenuated vaccine) 。如BCG、鼠疫、脊髓灰質(zhì)炎等減毒活疫苗。死疫苗和活疫苗各有優(yōu)缺點，見下表。 3. 新型活疫苗 第十張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月活疫苗與死疫苗的比較區(qū)別點活疫苗死疫苗制品特點減毒或無毒的疫

9、苗死菌，仍保持免疫原性制備方法通過非正常培養(yǎng)減毒株通過物理化學方法使病原體失活接種次數(shù)1次23次接種量量小量大接種反應(yīng)可在體內(nèi)增殖，類似于在體內(nèi)不增殖，可出現(xiàn)發(fā)熱、全輕型感染或隱性感染身或局部腫痛等反應(yīng)免疫的類型體液免疫和細胞免疫體液免疫免疫效果較好，維持長(15年)較差，維持短(0.51年)毒力回升有可能不可能安全性對免疫缺陷者有危險安全性好疫苗穩(wěn)定性相對不穩(wěn)定相對穩(wěn)定保存不宜保存，4存活2w，宜保存，4存活1年真空凍干可長期保存生產(chǎn)和成本生產(chǎn)較復雜，成本高生產(chǎn)簡單，成本低第十一張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月 4. 基因工程疫苗 利用基因工程方法獲得帶有病原體保護性抗原表位的目的基

10、因，將其導入原核或真核表達系統(tǒng)，表達該種保護性抗原，提純后研制成疫苗。 5. 重組載體疫苗 將編碼某一蛋白抗原的基因轉(zhuǎn)入減毒的病毒或細菌而制成的疫苗。 6. 合成疫苗 根據(jù)病原體抗原的氨基酸序列合成的多肽作為疫苗。 7. 亞單位疫苗 利用微生物的某種表面結(jié)構(gòu)成分（抗原）制成不含有核酸、能誘發(fā)機體產(chǎn)生抗體的疫苗，稱為亞單位疫苗 。 8. DNA疫苗 第十二張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月 9. 轉(zhuǎn)基因植物疫苗 將編碼某一病原體保護性抗原的基因轉(zhuǎn)入植物并在植物中表達，當人們吃這些植物性食物的同時，完成一次預(yù)防接種。10. 治療疫苗 以治療為目的的一種新興疫苗。第十三張，PPT共十七頁，創(chuàng)作

11、于2022年6月病毒感染的治療 抗病毒化學試劑 1. 核苷類藥物： 無環(huán)鳥苷(阿昔洛韋)、丙氧鳥苷(庚昔洛韋)、阿糖腺苷、疊氮胸苷、雙脫氧肌苷、拉米呋定等。 作用機制：抑制病毒基因復制模擬核苷成分摻入病毒基因組競爭病毒復制酶抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄2. 非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑 nevirapine(第一個新合成的非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，1996年獲準用于治療HIV )、 pyridone 第十四張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月3. 蛋白酶抑制劑 賽科納瓦(saquinavir) 1995年批準的第一個蛋白酶抑制劑 英迪納瓦(indinavir) 1996年批準的新一代蛋白酶抑制劑，用于HIV4.其他抗病毒藥物 金剛烷胺(amantadine)和 甲基金剛烷胺(rimantadine)：主要用于治療甲型流感。 甲酸磷霉素(phosphonoformic acid,PFA)：可抑制多種皰疹病毒。第十五張，PPT共十七頁，創(chuàng)作于2022年6月 干擾素和干擾素誘生劑的應(yīng)用干擾素