分子鎮(zhèn)痛-未來疼痛治療的新策略

1、 分子鎮(zhèn)痛 未來疼痛治療的新策略1慢性疼痛神經(jīng)病理性疼痛癌 痛炎癥痛等 由實際的或潛在的組織損傷引起的一種不愉快的感覺和情感經(jīng)歷（IASP定義） 由于各種原因(如骨質(zhì)增生,慢性軟組織傷以及惡性腫瘤等)所致的長期(數(shù)周、數(shù)月或數(shù)年)不愈的疼痛疼 痛慢性疼痛2疼痛傳導通路3藥物治療：阿片類藥物、 NSAIDs、抗精神 病藥物等物理治療：光療、水療、冷熱療、針刺等手術治療：選擇性的神經(jīng)阻滯、神經(jīng)損毀術等慢性疼痛治療策略分子鎮(zhèn)痛新策略4轉基因細胞移植鎮(zhèn)痛疫苗鎮(zhèn)痛靶向毀損鎮(zhèn)痛近幾年我們的研究5 轉基因細胞移植鎮(zhèn)痛6鞘內(nèi)轉基因細胞移植（腦啡肽原基因）鎮(zhèn)痛分子（腦啡肽）外源基因修飾細胞株轉基因細胞移植鎮(zhèn)痛7

2、轉基因細胞移植鎮(zhèn)痛我們的研究經(jīng)歷的三階段細胞移植轉基因細胞移植病毒轉基因治療8嗜鉻細胞 免疫反應生存期短來源困難細胞移植9微囊化嗜鉻細胞細胞移植10優(yōu)點 免疫隔離減少免疫抑制劑的應用，保護植入細胞免遭受機體排斥缺點 1.微囊制作復雜，成功率不高 2.微囊內(nèi)死亡的細胞會污染正常產(chǎn)物 3.囊膜破裂 4.微囊纖維包裹，影響了微囊對外環(huán)境的敏感性和 鎮(zhèn)痛物質(zhì)的釋放 微囊化嗜鉻細胞細胞移植11轉基因細胞移植鎮(zhèn)痛12轉基因細胞移植優(yōu)點 可取自自體或同種異體，組織相容性好 非腫瘤細胞，無致瘤性存在的問題 細胞生存時間 基因表達的可控性13解決細胞來源問題 永生化細胞永生化 利用轉基因技術將外源性的永生化基因

3、轉入到靶細胞并穩(wěn)定整合到靶細胞基因組中，獲得穩(wěn)定表達的轉化細胞，從增殖危機中逃逸，從而獲得無限增殖能力14我們構建的永生化細胞永生化神經(jīng)膠質(zhì)細胞永生化神經(jīng)前體細胞15基因修飾永生化細胞鎮(zhèn)痛人前腦啡肽原基因修飾永生化神經(jīng)膠質(zhì)細胞，大鼠蛛網(wǎng)膜下腔移植后，具有良好的鎮(zhèn)痛效果腺相關病毒攜帶人前腦啡肽原基因修飾永生化神經(jīng)前體細胞，蛛網(wǎng)膜下腔移植后，具有良好的鎮(zhèn)痛效果16基因表達的可控性非可控性表達模式可控性表達模式17Tet-on誘導表達系統(tǒng) 解決基因表達可控性問題 tet-on表達系統(tǒng)目的基因TRErtTACMV18可控性轉基因細胞移植鎮(zhèn)痛19+Dox-Dox+Dox永生化膠質(zhì)細胞中強力霉素調(diào)節(jié)腦啡肽

4、分泌20誘導表達后大鼠腦脊液中腦啡肽含量明顯增加注：與SNI組和SNI/Control組相比 *P0.05 與SNI/hPPE/Dox(-)組相比，#P0.05誘導表達后21誘導hPPE基因表達后鎮(zhèn)痛效果評價注： SNI/hPPE/Dox(+)組和SNI/hPPE/Dox(-)組相比， * P0.05誘導表達后結果提示 具有良好的可控性鎮(zhèn)痛效果22病毒轉基因鎮(zhèn)痛結果提示 蛛網(wǎng)膜下腔注射病毒后，具有良好的可控性鎮(zhèn)痛效果23優(yōu)點操作簡單，容易實現(xiàn)外源基因表達效率高缺點慢病毒應用于基因治療，暫無長期臨床觀察，因此有病毒的生物安全性擔憂病毒轉基因鎮(zhèn)痛24成 果發(fā)表文章 1. Xuebi T, Gong

5、ming W, Yuke T, et al. An improved Tet-on system for expression in neurons delivered by a single lentiviral vector. Hum Gene Ther. 2009, 20:113123. 2. Xu Y，Tian XB，Tian YK, et al. Lumbar transplantation of immortalized enkephalin-expressing astrocytes attenuates chronic neuropathic pain. Eur J Pain.

6、 2008, 12(4):525-33. 3. An K, Tian YK, et al. Immortalized Rat Astrocyte Strain Genetically Modified by Rat Preprogalanin Gene. Journal of Huazhong of University Science and Technology Med Sci, 2005, 25(2): 144-146.安珂, 田玉科, 楊輝, 高峰, 王鵬. 猿腎病毒40大T抗原基因永生化大鼠星形膠質(zhì)細胞株的構建. 中華麻醉學雜志, 2004, 24(11): 838-841.楊輝,

7、田玉科, 王鵬, 安珂, 高峰, 吳小兵, 梅偉. 重組人前腦啡肽原基因腺相關病毒載體的構建. 中華麻醉學雜志, 2005, 25(1): 34-36.高峰, 田玉科, 楊輝, 安珂, 張傳漢. 猿腎病毒40大T抗原基因永生化大鼠神經(jīng)前體細胞株的構建. 中華麻醉學雜志, 2005, 25(8): 597-600. . . . . . . 25疫 苗 鎮(zhèn) 痛26疫 苗 原 理體液免疫 抗原識別 B細胞活化、增殖與分化 合成分泌抗體并發(fā)揮效應抗原抗體27疫苗的應用傳染病1. During等構建的疫苗AAV/NR1，產(chǎn)生NR1抗體，可用于腦缺血和癲癇 的治療 2. Schenk等研究發(fā)現(xiàn)，A42多肽

8、疫苗可誘導產(chǎn)生抗體，治療AD疫苗應用于慢性癌痛？神經(jīng)系統(tǒng)疾?。耗X缺血、癲癇、阿爾茨海默病 （Alzheimer disease,AD） 28鎮(zhèn) 痛 疫 苗疼痛NR2BNR2B拮抗劑 NR2B siRNA以NR2B為靶點，將NR2B作為抗原誘導機體產(chǎn)生NR2B抗體，拮抗NR2B或下調(diào)其表達，用于癌痛治療NMDA受體2B亞基NR2B疫苗29構建NR2B全基因鎮(zhèn)痛疫苗NR2B重組腺病毒 recombinant adenovirus 5- mediated NR2B (rAd5/NR2B)質(zhì)粒pDC515/NR2B轉染293細胞鎮(zhèn)痛疫苗rAd5/NR2B30NR2B全基因鎮(zhèn)痛疫苗NR2B特異性抗體鎮(zhèn)痛

9、疫苗rAd5/NR2BNR2B多肽31大鼠免疫后產(chǎn)生NR2B抗體的滴度“ ”加強免疫的時間3212NR2B 180kDa-actin 42kDa3與空白對照組和病毒空載體組比較，*P0.05大鼠免疫后脊髓NR2B表達下調(diào)1：空白對照組2：病毒空載體對照組3：病毒疫苗免疫組33大鼠免疫后鎮(zhèn)痛效果評價與術前比較，P0.05；與空白對照組和病毒空載體組相比，* P0.05鎮(zhèn)痛疫苗可發(fā)揮超前鎮(zhèn)痛作用結果提示免疫后34表 位 疫 苗表位疫苗 表位：抗原表位（epitope） 抗原被抗體識別的特異性位點抗體多肽抗原抗體表位抗原抗體35表 位 疫 苗NR2B多肽NR2B表位基因NR2B表位疫苗rAd5/eN

10、R2B鎮(zhèn)痛作用篩選NR2B表位36大鼠免疫后產(chǎn)生NR2B抗體的滴度37大鼠免疫后脊髓NR2B表達下調(diào)NB2B-actin1：空白對照組2：表位疫苗免疫組3：載體對照組與空白對照組和載體對照組比較，*P0.0538大鼠免疫后鎮(zhèn)痛效果評價NR2B表位疫苗能夠更加有效地誘發(fā)免疫反應，產(chǎn)生良好的鎮(zhèn)痛效果結果提示與術前比較，P0.05；與空白對照組和病毒空載體組相比，* P0.05“”免疫時間免疫后39表 位 疫 苗優(yōu)點 提高免疫效應 特異性強缺點 過程復雜 表位篩選困難40NR2B作用廣泛疼痛認知功能運動功能神經(jīng)元凋亡突觸可塑性NR2B41疫苗的安全性評價檢測大鼠海馬及脊髓神經(jīng)元的凋亡Morris水迷

11、宮檢測大鼠的認知功能認知檢測海馬長時程增強(LTP)現(xiàn)象突觸以大鼠游泳速度評價其運動功能凋亡疫苗結果提示 鎮(zhèn)痛疫苗不會引起大鼠脊髓及海馬神經(jīng)元的凋亡增 加，也不會損害大鼠的認知功能和運動功能，但是 會削弱海馬CA1區(qū)LTP的產(chǎn)生與維持運動鎮(zhèn)痛疫苗的安全性有待更進一步研究！42 rAd5/NR2B鎮(zhèn)痛疫苗現(xiàn)已申請發(fā)明專利 （ 專利申請?zhí)?2.7）發(fā)表文章： 1. Wang GM,Tian YK,et al.Gene Ther,2007,14(24):1681-7. 2. Wang GM,Tian YK,et al.Chin Med J(Engl), 2007,120(8): 643-7. 3.

12、王公明,田玉科,等.中華麻醉學雜志,2007,27(8):699-702. 4. 陳建平,田玉科,等.中華麻醉學雜志,2006,26(10):948-951. 5. 陳建平,田玉科,等.中華麻醉學雜志,2007,27(12):1100-1103. 6. 王公明,田玉科,等.中華麻醉學雜志,2008,28,9:783-786. 成 果43靶向細胞毀損鎮(zhèn)痛44分子靶向治療分子靶向治療受體靶向技術有的放矢一種以細胞受體、關鍵基因和調(diào)控分子為靶點的新型治療45下行易化系統(tǒng)延髓頭端腹內(nèi)側核（RVM） 腦干下行抑制/易化系統(tǒng)下行易化系統(tǒng) 阿片受體陽性易化神經(jīng)元受體神經(jīng)元46靶 點阿片受體阿片受體陽性易化神

13、經(jīng)元細胞膜表面特異性表達阿片受體以阿片受體為靶點，特異性損毀易化神經(jīng)元可阻斷疼痛的下行易化系統(tǒng)，達到鎮(zhèn)痛的目的阿片受體47受體靶向技術自殺基因配體偶聯(lián)物(免疫偶聯(lián)物) 實現(xiàn)治療的靶向性配體48內(nèi)嗎啡肽-caspase3耦聯(lián)體耦聯(lián)體結合阿片受體內(nèi)吞吞噬體形成耦聯(lián)體裂解凋亡內(nèi)嗎啡肽Caspase-349靶向毀損鎮(zhèn)痛RVM區(qū)注射受體陽性神經(jīng)元特異性表達caspase3受體陽性神經(jīng)元凋亡鎮(zhèn)痛作用內(nèi)嗎啡肽Caspase-3結果提示 區(qū)注射后具有良好的鎮(zhèn)痛效果50受體靶向毀損鎮(zhèn)痛優(yōu)點 靶向性強 鎮(zhèn)痛效果確切（安全性有待進一步研究）缺點 工藝復雜，成本高轉染率低51成 果發(fā)表文章1. Cao F，Tian

14、YK,et al. Regulation of spinal neuroimmune responses by prolonged systemic morphine treatment in a rat model of cancer induced bone pain. Brain Res .（ Revision ）2.肖興鵬,田玉科,等. 第四軍醫(yī)大學學報, 2008, 29(24).3.曹菲,田玉科,等. 中華麻醉學雜志, 2008, 28(6). 4.曹菲,田玉科,等. 中國組織工程研究與臨床康復, 2007, 50(11).5.許愛軍,田玉科,等. 中國疼痛醫(yī)學雜志, 2008, 14(3).52展望有待解決的問題安全性其他生物學功能臨床未來疼痛治療的新策略希望與困難并存53致謝國家自然科學基