下載本文檔
版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、實驗二十五 測定葉綠素a和b的方法及其計算時間:2021.01.01創(chuàng)作歐陽美一目的要求:熟悉在未經(jīng)分離的葉綠體色素溶液中測定葉綠素a和 b的方法及其計算。二實驗原理:如果混合液中的兩個組分,它們的光譜吸收峰雖然有 明顯的差異,但吸收曲線彼此有些重疊,在這種情況下要分 別測定兩個組分,可根據(jù)Lambert-Beer定律,通過代數(shù)方 法,計算一種組分由于另一種組分存在時對光密度的影響, 最后分別得到兩種組分的含量。如圖z-4葉綠素a和b的吸收光譜曲線,葉綠素a的最 大吸收峰在663nm,葉綠素b在645nm,吸收曲線彼此又有 重疊。圖z-4葉綠素a和b的吸收光譜曲線橫坐標為波長(mn),縱坐標為
2、比吸收系數(shù)根據(jù)Lambert-Beer定律,最大吸收光譜峰不同的兩個組 分的混合液,它們的濃度C與光密度0D之間有如下的關 系:0Dl=Ca kal+Cb kbl(1)0D2=Ca ka2+Cb kb2(2)式中:Ca為組分a的濃度,g/LoCb為組分b的濃度,g/Lo0D1為在波長入1 (即組分a的最大吸收峰波長)時,混 合液的光密度0D值。0D2為在波長入2 (即組分b的最大吸收峰波長)時,混 合液的光密度0D值。koi為組分a的比吸收系數(shù),即組分Q當濃度為lg/L 時,于波長X 1時的光密度0D值。kb2為組分b的比吸收系數(shù),即組分b當濃度為lg/L 時,于波長入2時的光密度0D值。ka
3、2為組分a (濃度為lg/L),于波長入2時的光密度 0D值。kbl為組分b (濃度為lg/L),于波長入1時的光密度0D值。從文獻中可以查到葉綠素a和b的80%丙酮溶液,當濃度為lg/L時,比吸收系數(shù)k值如下:波長(nm)葉綠素a葉綠素b66382.049.2764516.7545.60將表中數(shù)值代入上式(1)、(2),則得:0D663二82. 04X5+9. 27XCb 0D645二 16. 75X5+45. 60XCb經(jīng)過整理之后,即得到下式:5二0.0127 OD663-0.00269 0D645Cb=0.0229 0D645-0.00468 0D663如果把Ca, Cb的濃度單位從原
4、來的g/L改為mg/L,則上式可改寫為下列形式:Ca=12.70D663-2.690D645Cb二22. 90D645-4.680D663CT二 Ca+Cb=8.02 0D663+20. 210D645(5)(5)式中CT為總葉綠素濃度,單位為mg/Lo利用上面(3)、(4)、(5)式,即可計算出葉綠素a和b及總葉綠素的濃度(mg/L)。附注一般大學教學實驗室所用的分光度計多為721型,屬 低級類型,其單色光的半波寬要比中級類型的751型寬得多,而葉綠素3和b吸收峰的波長相差僅18nm (663-645nm),難以達到精確測定。此外有時還由于儀器本身的 標稱波長與實際波長不符,測定的正確性就更
5、差,不適用于 測定。751型有時也由于波長不夠準確,會帶來一定誤差??捎萌~綠素對波長進行校正。為校正儀器波長所需的葉綠素a和b的需要量很少,用 紙層析法很快就能分離制得。取植物葉子約lg,用乙瞇提取 葉綠體色素,再用毛細管將色素溶液畫在3mm厚濾紙上使成 一宜線,為使分離效果好,一般重復點樣一次即可。然后于 密閉容器中進行上行層析,溶劑為含有0.5%丙酮的石油瞇。 層析結束,用剪刀小心地剪下藍綠色的葉綠素a和黃綠色的 葉綠素b,注意剪時盡量避開分層不清晰的色區(qū)。最后分別 浸于80%丙酮中,洗下葉綠素a和b。三 實驗器材與試劑:1.實驗儀器 高級型分光光度計、 離心機、臺天平、剪刀、研缽、漏斗、
6、移液管。2實驗試 劑 丙酮、碳酸鈣。3.實驗材料 植物葉片。四 操作步驟: 1、色素的提?。喝⌒迈r葉片,剪去粗大的葉脈并剪成碎 塊,稱取0. 5g放入研缽中加純丙酮5ml,少許碳酸鈣和石 英砂,研磨成勻漿,將勻漿轉入量筒中,并用適量80%丙酮 洗滌研缽,用80%丙酮定容至10ml,吸取2. 5ml加入有 10ml80%丙酮的量筒中,過濾,濾液備用。2、測定光密度: 取上述色素提取液4ml,轉入比色杯中,以80%丙酮為對 照,分別測定663nm. 645nm處的光密度值。3、按公式(3)、(4)、(5)分別計算色素提取液中葉綠素a、葉綠素b、及葉綠素a+b的濃度。再根據(jù)稀釋倍數(shù)分別計算每g 鮮重葉片中色素的含量?!咀⒁馐马棥?由于植物葉子中含 有水分,故先用純丙酮進行提取,以使色素提取液中丙酮的 最終濃度近似80%。2.由于葉綠素a. b的吸收峰很陡,儀 器波長稍有偏差,就會使結果產(chǎn)生很大的誤差,因此最好能 用波長較正確的高級型分光光度計。五作業(yè):1、試比較陰 生植物和陽生植物的葉綠素a
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 山西傳媒學院《施肥原理與技術》2023-2024學年第一學期期末試卷
- 山西財經(jīng)大學華商學院《編輯設計》2023-2024學年第一學期期末試卷
- 幼兒園小班安全不亂吃東西
- 山東中醫(yī)藥大學《材料成形技術基礎英》2023-2024學年第一學期期末試卷
- 山東政法學院《廣告策劃》2023-2024學年第一學期期末試卷
- 應急處置洗消
- 消防代驗收合同范例
- 采購仔豬合同范例
- 山東藝術設計職業(yè)學院《網(wǎng)絡取證》2023-2024學年第一學期期末試卷
- 2004用工合同范例
- 充電站建設方案書-圖文
- 2024三年級英語下冊閱讀理解課件人教精通版三起
- 2023九年級數(shù)學下冊 第三章 圓7 切線長定理教案 (新版)北師大版
- 10kV架空線路專項施工方案
- 西門子燃機介紹課件學習課件
- (必會)高級美發(fā)師近年考試真題題庫(含答案)
- 2024年個人工作總結政治思想方面
- 產(chǎn)品問題履歷表
- 碼頭施工合同范本
- 第5課 推動高質(zhì)量發(fā)展【2023年秋版】
- 2023年版《安寧療護實踐指南(試行)》解讀課件
評論
0/150
提交評論