微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)經(jīng)典版課件

1、微生物的類群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌單細(xì)胞的動(dòng)植物如草履蟲、單細(xì)胞藻類等微生物包含了除植物界和動(dòng)物界以外的所有生物無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞細(xì)菌、藍(lán)藻原核細(xì)胞課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用1.提供營(yíng)養(yǎng)和條件2.防止污染一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)1.基本成分：思考：微生物“吃”什么？碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽碳源無(wú)機(jī)碳源：有機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物氮源無(wú)機(jī)氮源：有機(jī)氮源：NH4、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有機(jī)物為異養(yǎng)型微生物提供碳源、氮源、能源概念：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需

2、求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)1.基本成分：碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽2.特殊營(yíng)養(yǎng)：維生素、堿基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、氧氣的需求：4.種類：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有無(wú) 凝固劑瓊脂分離 鑒定工業(yè) 生產(chǎn)化學(xué)成分：物理性質(zhì)：天然培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基類型配制特點(diǎn)主要應(yīng)用物理性質(zhì)固體培養(yǎng)基加入瓊脂較多微生物的分離、計(jì)數(shù)等半固體培養(yǎng)基加入瓊脂較少觀察微生物運(yùn)動(dòng)、鑒定菌種、保藏菌種等液體培養(yǎng)基不加入瓊脂工業(yè)生產(chǎn)，連續(xù)培養(yǎng)化學(xué)組成合成培養(yǎng)基由已知成分配制而成，培養(yǎng)基成分明確菌種分類、鑒定天然培養(yǎng)基由天然成分配制而成，培養(yǎng)基成分不明確工業(yè)生產(chǎn)目的

3、用途鑒別培養(yǎng)基添加某種指示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類的微生物選擇培養(yǎng)基添加（或缺少）某種化學(xué)物質(zhì) 培養(yǎng)、分離出特定的微生物牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g瓊脂20.0g分析營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成？5. 配制原則目的明確：營(yíng)養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當(dāng)適宜的pH值：有機(jī)碳源異養(yǎng)型：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的選擇原料自養(yǎng)型：不加碳源加入緩沖劑細(xì)菌偏堿，真菌偏酸（CO2碳源）生產(chǎn)科研巴氏消毒法耐高溫需保持干燥的 物品，160170 12小時(shí)接種環(huán)、接種針等 金屬用具7075、30min

4、80、15min100、56min消毒滅菌定義方法較為溫和理化方法殺死部分有害菌體（不包括芽孢、孢子強(qiáng)烈的理化方法，殺死所有微生物煮沸消毒法化學(xué)藥劑紫外線灼燒滅菌干熱滅菌酒精、氯氣、石炭酸等高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基，100KPa、121、1530min二.無(wú)菌技術(shù)：防止外來(lái)雜菌的污染1.消毒與滅菌：請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。（1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管（3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手思考練習(xí):說出無(wú)菌技術(shù)及相應(yīng)的具體方法工作臺(tái)操作者的手、衣著培養(yǎng)基培養(yǎng)皿玻棒、試管接種環(huán)牛奶無(wú)菌水飲用水紗布涂布器2.無(wú)菌范圍：實(shí)驗(yàn)操作空間消毒操作

5、者的手、衣著消毒實(shí)驗(yàn)用具滅菌實(shí)驗(yàn)操作過程二.無(wú)菌技術(shù)：防止外來(lái)雜菌的污染1.消毒與滅菌：酒精燈旁操作超凈工作臺(tái)單個(gè)或少數(shù)菌體2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。3.功能：1.定義：三.菌落鑒定菌種的重要依據(jù)固體培養(yǎng)基上大量繁殖子細(xì)胞群體1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g瓊脂20.0g四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計(jì)算：培養(yǎng)基用量依配方計(jì)算各成分的用量2.稱量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙 、少量水加熱溶解取紙蛋白胨、NaCl瓊脂補(bǔ)水定容4.調(diào)

6、pH、分裝、封口：5.滅菌：6.倒平板：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿分散成單個(gè)細(xì)胞,形成單個(gè)菌落倒平板約50防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌：平板劃線法：菌種劃3個(gè)平板1個(gè)不劃線1.接種：接種環(huán)防止劃破培養(yǎng)基（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）（空白對(duì)照）問題討論為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時(shí)，菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)

7、菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。6支試管，分別加入9ml無(wú)菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：菌液微量 移液器稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：b.涂布平板：不超過0.1ml各梯度分別涂布3個(gè)平板1個(gè)不涂布作空白對(duì)照滴灼試涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍平板劃線法：四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌：1.接種：稀釋涂布平板法：2.培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基放入37恒溫箱中培養(yǎng)12h24h后，觀察并記錄五.菌種的保藏：1.臨時(shí)保藏：試管固體斜面培養(yǎng)基上42.長(zhǎng)期保存：菌種易被污染、變異甘油管藏1ml甘油1ml菌液20一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)1.基本成分：碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽2.特殊營(yíng)養(yǎng)：維生素、堿基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、氧氣的需求：4.種類：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有無(wú) 凝固