實驗室常用藥品試劑的配置與使用

1、實驗室常用藥品試劑的配置與使用實驗室常用藥品試劑的制備與使用（一）認(rèn)識藥品規(guī)格純度規(guī)格簡寫標(biāo)簽顏色級別特點實驗純L.R黃色四主成分含量高，純度較差，朵質(zhì)含量不做選擇化學(xué)純C.P藍(lán)佝主成分含量高、純度較高，存在干擾雜質(zhì)A.R紅色主成分含量很高、純度較高，干擾雜屬很低優(yōu)級純GR主成分含量很高、純度很高，有的可柞為基準(zhǔn)物底1甲基綠（DNA綠色）和吡羅紅（RNA紅色）染色劑配制：a）A液：取甲基綠2g溶于98mL蒸餾水中，取吡羅紅G5g溶于95mL蒸餾水中。取6mL甲基綠溶液和2mL吡羅紅溶液加入到16mL蒸餾水中，置于棕色瓶中備用。b）B液：是一種緩沖液，由乙酸鈉和乙酸混合而成。先取乙酸鈉16.4g

2、,用蒸餾水溶解至1000mL備用；再取乙酸12mL，用蒸餾水稀釋至1000mL備用。取配好的乙酸鈉溶液30mL和稀釋的乙酸20mL,加蒸餾水50mL，配成pH為4.8的B液（緩沖液）。c）取A液20mL和B液80mL混合，就是實驗中所用的吡羅紅甲基綠染色劑。應(yīng)該注意的是該試劑應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。2.I2-K溶液（淀粉一藍(lán)紫色，蛋白質(zhì)一黃色）配制：將碘化鉀3g溶于蒸餾水中，待全部溶解后加入碘1g，振蕩使其溶解，將此液保存在棕色玻璃瓶內(nèi)。3蘇丹川或蘇丹IV（木栓化、角質(zhì)化細(xì)胞壁一紅色，脂肪、揮發(fā)油、樹脂等一紅色或淡紅色）配制：蘇丹川或蘇丹IV干粉0.1g與95%乙醇10mL混合，過濾后再加入10mL甘油。

3、4.1%醋酸洋紅染料（染色體一紫紅色）配制：將洋紅1g與45%醋酸100mL煮沸2h左右，并隨時注意補充加入蒸餾水到原含量。冷卻后過濾，加入4%鐵明礬溶液12滴，放入棕色瓶中備用。5.龍膽紫酸性染料（染色質(zhì)一紫色）配制：取龍膽紫1g，溶于少量2%醋酸溶液中，滴加2%醋酸溶液，直至溶液不呈深紫色為止。6卡寶染色劑（染色體一紅色，著色深，保存性好）又名苯酚-品紅染色劑配制：a）原液A:將3g堿性品紅溶于100mL70%的乙醇中。b）原液B：取原液A10mL加入到90mL5%苯酸水溶液中。（兩周內(nèi)有效）c）原液C：取原液B55mL，加入6mL福爾馬林和6mL冰醋酸。d）染色劑：取原液C1020mL，

4、加45%冰醋酸8090mL，加山梨醇1.8g，將其配制成10%20%的苯酚-品紅溶液，放置兩周后，效果顯著。7本尼迪克溶液（醛糖或醛一黃紅色沉淀）又稱班氏試劑配制：a）硫酸銅溶液：在50mL加熱的蒸餾水中溶解8.5g硫酸銅；b）檸檬酸鈉-碳酸鈉溶液：在400mL蒸餾水中溶解85g檸檬酸鈉和50g無水碳酸鈉；c）將硫酸銅溶液緩緩倒入檸檬酸鈉-碳酸鈉溶液中，邊加邊攪拌并過濾沉淀物。8斐林試劑（醛糖一磚紅色沉淀）配制：a）甲液（0.1g/mLNaOH）:將125g氫氧化鉀（鈉）和173g酒石酸鉀鈉溶解在500mL蒸餾水中。b）乙液（0.05g/mLCuSO4）:將34.5g硫酸銅溶于500mL蒸餾水

5、中。c）上述兩種溶液應(yīng)分別保存。在檢測葡萄糖時，使他們等量混合，加入待測物的試管內(nèi)，加熱到沸騰。如果有葡萄糖，會形成紅色的氧化亞銅沉淀物。9米倫試劑（含有Tyr的蛋白質(zhì)一紅色沉淀）配制：在60mL濃硝酸（比重1.42）中溶解40g汞（水浴加溫可助溶），溶解后加入兩倍體積的蒸餾水稀釋，靜置澄清后，取其上層的清液備用。中性紅溶液（活細(xì)胞一紅色）配制：將0.1g中性紅溶于100mL蒸餾水。使用時，再稀釋10倍左右。曙紅丫乙醇（細(xì)胞質(zhì)一淺紅色）配制：將0.25g曙紅溶于100mL95%乙醇。釕紅染色劑（胞間層一紅色）配制：將510mg釕紅與蒸餾水2550mL混合?，F(xiàn)配現(xiàn)用。苯胺藍(lán)溶液（纖維素細(xì)胞壁、鞭

6、毛等一藍(lán)色）配制：將苯胺藍(lán)1g溶于0100mL35%或95%的乙醇中。14間苯三酚溶液（木質(zhì)素一紅色）配制：將間苯三酚5g溶于100mL95%乙醇。溶液呈黃褐色即失效。番紅染色劑（細(xì)胞壁、花粉外壁和染色質(zhì)一紅色）配制：a）番紅水溶液：將1g番紅溶解到100mL蒸餾水中。b）番紅乙醇：將1g番紅溶解到100mL50%或95%乙醇中。c）苯胺番紅乙醇染色液：甲液：番紅5g+95%乙醇50mL乙液：苯胺20mL+蒸餾水450mL將甲、乙兩種溶液混合后，充分搖均，再過濾。固綠溶液（細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞壁一亮綠色）配制：a）固綠乙醇溶液：將1g固綠加入100mL95%的乙醇中。b）苯胺固綠乙醇溶液：將1g固綠加

7、入40mL95%乙醇中，再加入10mL苯胺。充分搖勻后過濾。鐵礬蘇木精染液（細(xì)胞分裂時染色體一藍(lán)黑色）又稱海登漢氏蘇木精染色液甲液（媒染劑）：硫酸鐵銨（鐵礬）24g+蒸餾水100mL（現(xiàn)配現(xiàn)用）乙液（染色劑）：蘇木精0.51g+95%乙醇10mL+蒸餾水90mL乙液配制：（1）蘇木精的成熟：將蘇木精溶于乙醇中，瓶口用雙層紗布包扎，使其充分氧化（通常在室內(nèi)放置兩個月后方可使用）。（2）加入蒸餾水，塞緊瓶口，置冰箱中可長期保存。染色步驟：切片需先經(jīng)甲液媒染，并充分水洗后才能以乙液染色，染色后稍經(jīng)水洗再用另一瓶甲液分色至適度。（甲液與乙液在任何情況下決不能混合）美藍(lán)染液（細(xì)菌、活體細(xì)胞藍(lán)色）又稱亞甲

8、基藍(lán)染液配制：取0.5g美藍(lán)，溶于30mL95%乙醇中D100mL0.01%氫氧化鉀溶液，保存在棕色瓶內(nèi)。伊紅染液（細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞間質(zhì)粉紅色）配制：1）伊紅水溶液：取1g伊紅，溶于99mL蒸餾水中，即成1%伊紅水溶液。2）伊紅乙醇溶液：取1g伊紅，溶于99mL70%乙醇中，即成1%伊紅-乙醇溶液。革蘭氏染液（革蘭氏陽性菌一紫色，革蘭氏陰性菌一紅色）配制：1）甲液（結(jié)晶紫液）：a）結(jié)晶紫2g+20mL95%乙醇b）草酸銨0.8g+80mL蒸餾水c）將a）與b）混合，靜置48小時后使用。2）乙液（碘液）：將2g碘化鉀溶于少量蒸餾水中，然后加入1g碘，待碘全部溶解后，加水稀釋至300mL。3）丙液：9

9、5%乙醇溶液。4）丁液（番紅花紅液）：10mL2.5%番紅花紅乙醇溶液+100mL蒸餾水5）先用甲液染色，再加乙液固定，后用丙液處理，最后用丁液復(fù)染。硼砂洋紅染液（細(xì)胞核、糊粉粒紅色）配制：取4g硼砂，溶于96mL蒸餾水中。再加入2g洋紅，加熱溶解后煮沸30min，靜置3d，用100mL70%乙醇沖淡，放置24h后過濾。席夫試劑（醛類化合物紫色）又稱品紅亞硫酸試劑配制：稱取0.5g堿性品紅，加到100mL煮沸的蒸餾水中，再微微加熱5min，不斷攪拌，使它溶解。溶液冷卻至IJ50C時過濾，濾液中加入10mL1mol鹽酸。再冷卻到25C時加入0.5g偏重亞硫酸鈉（Na2S2O5）或無水亞硫酸氫鈉（

10、NaHSO3）。把溶液裝入棕色試劑瓶內(nèi)，搖蕩后，塞緊瓶塞，放在黑暗中24h。在溶液顏色退到淡黃色時，加入0.5g活性炭，用力蕩1min，過濾后把濾液貯在棕色試劑瓶內(nèi)，塞緊瓶塞，濾液應(yīng)該是無色的。在使用時勿讓溶液長時間暴露在空氣中和見光（瓶外用黑紙或暗盒遮光）。若溶液變成紅色，即失效。23詹納斯綠乙醇飽和溶液（線粒體細(xì)胞色素C氧化酶一藍(lán)綠色）又稱健那綠乙醇飽和溶液配制：1）詹納斯綠B乙醇飽和染液：取125mL詹納斯綠B,加入到62.5mL無水乙醇中，攪拌。2）取詹納斯綠B乙醇飽和染液，按1:30000比例加蒸水稀釋，用來染原生動物線粒體3）取詹納斯綠B乙醇飽和染液，按1:1000比例加蒸餾水稀釋

11、，用來染新鮮蛙血線粒體。24.黑色素液（莢膜一黑色）配制：10g水溶性黑素+100mL蒸餾水+0.5mL甲醛（福爾馬林）25.1%瑞氏染色液（細(xì)胞核一紫紅色，細(xì)胞質(zhì)一藍(lán)色）又稱伊紅美藍(lán)染料配制：稱取瑞氏染色粉6g,放研缽內(nèi)磨細(xì)，不斷滴加甲醇（共600mL）并繼續(xù)研磨使溶解。經(jīng)過濾后染液須貯存一年以上才可使用，保存時間愈久，則染色色澤愈佳。（三）脫水劑（各級乙醇）的配制所需配制乙醇含量（%）原有含量（張）蒸館水量乙醇+01（niL）3095655050+仝709525伽瓷85951085+10（四）常用固定液的配制FAA固定液（適用于一般根、莖、葉、花藥、子房組織切片，但對染色體的觀察效果較差）

12、配制：福爾馬林（38%甲醛溶液）5mL+冰醋酸5mL+70%乙醇90mL幼嫩材料用50%乙醇代替70%乙醇，可防止材料收縮；還可加入5mL甘油（丙三醇）以防蒸發(fā)和材料變硬。FPA固定液（同F(xiàn)AA,但效果更好）配制：福爾馬林（38%甲醛溶液）5mL+丙酸5mL+70%乙醇90mL3卡諾氏固定液（適用于一般植物組織和細(xì)胞的固定，常用于根尖、花藥壓片及子房石蠟切片等）配制：無水乙醇：冰醋酸（V:V）=3:3有極快的滲透力，根尖材料固定1520min即可，花藥則需1h左右，此液固定最多不超過24h，固定后用95%乙醇沖洗至不含冰醋酸為止；如果材料不馬上用，需轉(zhuǎn)入70%乙醇中保存4.10%中性緩沖福爾馬

13、林配制：磷酸二氫鈉4g+磷酸氫二鈉6.5g+37%甲醛100mL+蒸餾水900mL,充分混合，標(biāo)記pH和日期。5.Zenker液（核固定劑）配制：1）Zenker貯備液：氯化汞50g+重絡(luò)酸鉀25g+硫酸鈉10g+蒸餾水1000mL,充分混合。穩(wěn)定性2年。2）Zenker工作液：Zenker貯備液95mL+冰醋酸5mL。3）由于Zenker液中含氯化汞，固定后必須脫去汞色素。（魯哥氏碘液5min,水洗；5%硫代硫酸鈉5min,水洗并按照染色步驟要求進行染色）4）組織必須用流水沖洗去除重鉻酸鉀。（五）常用透明劑使材料清凈透明，增加組織折光。1二甲苯（必須脫浄水分，以免發(fā)生乳狀混濁）為了避免材料收縮，應(yīng)逐步從無水乙醇過渡到二甲苯中：無水乙醇T無水乙醇+二甲苯（V：V=1：1）T二甲苯2氯仿（會破壞染色）1/5氯仿（氯仿V1:無水乙醇V2=1:4）t2/5氯仿（V1:V2=2:3）t3/5氯仿（V1:V2=3:2）t4/5氯仿（V1:V2=4:1）t純氯仿（兩次）（六）解離液與離析液1解離液：a）鹽酸乙醇：（95%乙醇V1:濃鹽V2=1:1）