無(wú)菌保證基本原理與實(shí)際應(yīng)用課件

1、無(wú)菌保證基本原理與實(shí)際應(yīng)用馬濤人員要求足夠的數(shù)量、適當(dāng)資質(zhì)、實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)書(shū)面的崗位工作職責(zé)崗位職責(zé)不得遺漏、交叉的職責(zé)應(yīng)有明確規(guī)定個(gè)人承擔(dān)的職責(zé)不應(yīng)當(dāng)過(guò)多 所有人員必須經(jīng)過(guò)培訓(xùn)并考核職責(zé)委托人員衛(wèi)生-3-前言基本概念藥典和GMP對(duì)無(wú)菌保證水平的定義系指無(wú)菌藥品中存在活微生物的概率最終滅菌產(chǎn)品：無(wú)菌保證水平不超過(guò)一百萬(wàn)分之一非最終滅菌產(chǎn)品：以培養(yǎng)基灌裝零污染為目標(biāo)，實(shí)際污染率低于1/5000-4-藥品達(dá)到法定標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)鍵三個(gè)關(guān)鍵方面能充分殺滅污染微生物已滅菌的產(chǎn)品不被再污染消除帶菌產(chǎn)品混入已滅菌產(chǎn)品的風(fēng)險(xiǎn)三個(gè)核心問(wèn)題產(chǎn)品和滅菌工藝設(shè)計(jì)達(dá)標(biāo)的基礎(chǔ)工程設(shè)計(jì)和建設(shè)實(shí)現(xiàn)設(shè)計(jì)目標(biāo)的硬件日常的運(yùn)作管理實(shí)現(xiàn)設(shè)計(jì)目標(biāo)

2、的軟件-5-解決問(wèn)題的鑰匙知識(shí)無(wú)菌保證的理論技能應(yīng)用知識(shí)解決問(wèn)題的能力消除威脅無(wú)菌保證的潛在風(fēng)險(xiǎn)因素-6-7-第一部分無(wú)菌保證基本原理-8-微生物基礎(chǔ)常見(jiàn)微生物種類(lèi)基本特點(diǎn)細(xì)菌0.5 5 m，生長(zhǎng)態(tài)時(shí)不耐熱，部分能形成耐熱芽孢真菌5 m 50 m，形成芽孢隨空氣擴(kuò)散，不耐熱病毒小于0.1 m，一般不耐熱-9-微生物分布特點(diǎn)氣源性微生物革蘭氏陽(yáng)性菌較多它們可形成芽孢水源性則革蘭氏陰性菌居多不會(huì)形成芽孢，耐熱性差但會(huì)產(chǎn)生細(xì)菌內(nèi)毒素G+G-10-芽孢及其特點(diǎn)（一）當(dāng)某些細(xì)菌遇到不良生存環(huán)境條件時(shí)，為保護(hù)自身，在細(xì)胞內(nèi)形成一外壁厚而堅(jiān)硬的休眠體，該休眠體即稱(chēng)芽孢（Spore）或孢子。對(duì)不良環(huán)境如熱、化

3、學(xué)消毒劑的耐受性遠(yuǎn)高于生長(zhǎng)態(tài)細(xì)胞環(huán)境條件適宜，恢復(fù)生長(zhǎng)和繁殖-11-芽孢及其特點(diǎn)（二）耐熱80 下長(zhǎng)期存活100 下有相當(dāng)高的存活率100 以上死亡過(guò)程符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程影響芽孢耐熱性的因素芽孢存在的介質(zhì)受熱時(shí)的濕度-12-熱對(duì)微生物的作用當(dāng)高溫破壞了細(xì)胞中起生命作用的蛋白質(zhì)、酶及核酸時(shí)，細(xì)胞死亡。實(shí)驗(yàn)證明微生物受熱死亡速度符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，簡(jiǎn)稱(chēng)對(duì)數(shù)規(guī)則-13-微生物存活數(shù)與滅菌時(shí)間關(guān)系圖 半對(duì)數(shù)座標(biāo)Y軸：活微生物數(shù)量的對(duì)數(shù)X軸：時(shí)間為10進(jìn)制普通座標(biāo)tlgN102030123-14-芽孢的耐熱參數(shù)：D值指一定溫度下將微生物殺滅90 或下降一個(gè)對(duì)數(shù)單位所需要的時(shí)間。lgNt1234t1t2D

4、D=t2-t1單位：分鐘-15-滅菌溫度對(duì)D值的影響 滅菌溫度低時(shí)，達(dá)到同一滅菌效果的時(shí)間就長(zhǎng)115121125lgNtlgN=1D125D121D115-16-F0值：達(dá)到同一滅菌效果的概念 F0值即標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間指產(chǎn)品在滅菌過(guò)程中獲得的與標(biāo)準(zhǔn)參照條件（121）相同滅菌效果的曝?zé)釙r(shí)間lgNtLgNoLgNt121117LgNFot1t2-17-不同滅菌溫度下的滅菌率滅菌溫度 滅菌率L1000.0081050.0251120.1261150.2511160.3161180.5011200.7941211.0001221.251231.59滅菌率：為達(dá)到與某一溫度下滅菌1分鐘相同的滅菌效果，在12

5、1下滅菌所需要的滅菌時(shí)100滅菌時(shí)1分鐘，相當(dāng)于121 滅菌0.008分鐘，即Fo值為0.008分鐘105滅菌40分鐘時(shí)，F(xiàn)o約為 1分鐘，能使D值為1分鐘的芽孢數(shù)量下降1個(gè)對(duì)數(shù)單位lgN2345-2-3-41-5-6-101234576891012分11-lgSAL F0/D lgN0SAL: 無(wú)菌保證水平N0:滅菌前微生物污染量無(wú)菌保證水平與F0、D值及帶菌量的關(guān)系-18-19-滅菌過(guò)程的Fo 示意-20-“無(wú)菌”的標(biāo)準(zhǔn)及理論“每批產(chǎn)品中，污染品概率不得超過(guò)一百萬(wàn)分之一”，無(wú)菌的這一量化標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)當(dāng)可以用試驗(yàn)來(lái)證明的。用無(wú)菌檢查法顯然是不可能的。然而，每瓶產(chǎn)品微生物存活的概率卻可計(jì)算的。這就需

6、要測(cè)試產(chǎn)品滅菌前微生物污染數(shù)、D值，使用對(duì)數(shù)規(guī)則，并用生物指示劑試驗(yàn)來(lái)證實(shí)。量化指標(biāo) + 計(jì)算 + 試驗(yàn)，使無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)成為工業(yè)界可執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn) -21-無(wú)菌保證水平舉例假定滅菌開(kāi)始時(shí)產(chǎn)品中的污染微生物總數(shù)（N0）為100cfu/瓶，污染微生物的耐熱參數(shù)（D）為1分鐘，要達(dá)到藥典規(guī)定的SAL的標(biāo)準(zhǔn)，滅菌F0值應(yīng)達(dá)到多少？相當(dāng)于121 和115 下滅菌多少分鐘？答：F0=（-lgSALlgN0）D =（6+ lg100）1= 8分鐘，需在121下滅菌8分鐘。 換算成115 下的滅菌時(shí)間是： F0 /L115=8/0.25=32分鐘。-22-某復(fù)方氨基酸注射液采用110，30分鐘的滅菌程序，起始污染微生

7、物仍為100cfu/瓶，D值為0.5分鐘，請(qǐng)計(jì)算無(wú)菌保證值和殘存微生物污染的概率。答：-lgSAL= F0/D - lgN0 = L110t /D - lg100 = 0.0830/0.5-2 = 2.8殘存微生物的概率SAL為10-2.80.00158通過(guò)無(wú)菌檢查的概率為(1-0.00158)20=0.969無(wú)菌保證水平舉例二-23-第二部分實(shí)際應(yīng)用滅菌工藝的選擇歐盟滅菌工藝決策樹(shù)-24-能否121，15分鐘 濕熱滅菌121，15分鐘濕熱滅菌是否能否采用F08的濕熱滅菌，以達(dá)到SAL10-6采用F08的濕熱滅菌，以達(dá)到SAL10-6是否能否對(duì)藥液除菌過(guò)濾藥液除菌過(guò)濾及無(wú)菌灌封無(wú)菌原料，無(wú)菌配

8、制無(wú)菌灌封是否-25-滅菌工藝與滅菌前微生物控制的關(guān)系滅菌工藝滅菌前微生物風(fēng)險(xiǎn)與控制要求類(lèi)別過(guò)度殺滅F012低，不必每批監(jiān)控污染菌最終滅菌工藝，無(wú)菌保證值6殘存概率F08高，應(yīng)每批監(jiān)控污染菌，盡量加入除菌過(guò)濾器，應(yīng)有原料微生物標(biāo)準(zhǔn)F01.0 滅菌設(shè)備的狀態(tài)和維護(hù)關(guān)鍵儀表的校驗(yàn)滅菌工藝再驗(yàn)證狀態(tài)設(shè)備工作日志、故障、修理、確認(rèn)設(shè)備變更管理設(shè)備預(yù)修計(jì)劃和實(shí)施防止二次污染系統(tǒng)的日常檢查方法與記錄-55-滅菌現(xiàn)場(chǎng)管理防止混淆的措施滅菌過(guò)程中設(shè)備故障中止滅菌程序的管理措施-56-57-總結(jié)細(xì)菌芽孢死亡規(guī)律符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程無(wú)菌檢查有明顯的局限性藥典規(guī)定最終滅菌產(chǎn)品的污染概率不超過(guò)百萬(wàn)分之一，即無(wú)菌保證水平SAL不超過(guò)10-6-lgSAL F0/D lgN0F0值標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間D值微生物耐熱參數(shù)N0滅菌開(kāi)始前微生