DB22- 146-2020 利用共寄生繁育赤眼蜂生產(chǎn)技術規(guī)程

1、ICS65.020CCSB15吉林省地方標準DB22/TXXXXXXXXX利用共寄生繁育赤眼蜂生產(chǎn)技術規(guī)程CodeofpracticeforTrichogrammabreedingbysynparasitism（點擊此處添加與國際標準一致性程度的標識）（本草案完成時間：2020.8.24）XXXX-XX-XX實施XXXX-XX-XX發(fā)布吉林省市場監(jiān)督管理廳發(fā)布DB22/TXXXXXXXXX I本文件按照GB/T1.12020標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構和起草規(guī)則的規(guī)定起草。請注意本文件中的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由吉林省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本文

2、件由吉林省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳歸口。本文件起草單位：吉林農(nóng)業(yè)大學本文件主要起草人：張雪、張俊杰、阮長春、杜文梅DB22/TXXXXXXXXX 利用共寄生繁育赤眼蜂生產(chǎn)技術規(guī)程范圍本文件確立了利用共寄生繁育赤眼蜂生產(chǎn)技術程序，生產(chǎn)計劃制定、廠房及設備、常用藥品及材料、蜂種準備、柞蠶繭準備、工廠化生產(chǎn)流程等階段的操作指示，描述了過程記錄等追溯方法。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T1166-2006生物防治用赤眼蜂DB22/T1025-2

3、018柞蠶良種繁育技術規(guī)程術語和定義NY/T1166-2006界定的以及下列術語和定義適用于本文件。3.1共寄生synparasitism以柞蠶卵為中間寄主，將螟黃赤眼蜂和松毛蟲赤眼蜂同時寄生在一粒柞蠶卵內(nèi)。3.2蜂種founderpopulation從自然界原寄主采集的螟黃赤眼蜂和松毛蟲赤眼蜂。3.3幼蟲中期middlelarva在柞蠶卵內(nèi)，（251）C發(fā)育約50個小時，出現(xiàn)口鉤，赤眼蜂即發(fā)育到幼蟲中期。3.4誘導滯育diapauseinduction將發(fā)育至幼蟲中期的赤眼蜂置于較低溫度下，使其發(fā)育速率極大減緩，停留在預蛹時期。3.5種蜂breedingpopulation人工復壯擴繁用于工

4、廠化繁殖的螟黃赤眼蜂和松毛蟲赤眼蜂。3.6柞蠶卵Antheraeapernyieggs供工廠化繁蜂用的柞蠶蛾剖腹卵。3.7接蜂inoculation將種蜂引接到中間寄主卵上的生產(chǎn)環(huán)節(jié)來源：NY/T1166-2006,2.4接蜂利用共寄生繁育赤眼蜂生產(chǎn)技術程序生產(chǎn)技術程序包括2個階段，其中，生產(chǎn)準備階段細分為6個步驟；工廠化生產(chǎn)階段細分為8個步驟。程序流程圖如圖1所示。圖1共寄生繁育赤眼蜂生產(chǎn)程序利用共寄生繁育赤眼蜂準備階段生產(chǎn)計劃制定每年的1112月份，制定生產(chǎn)計劃，并根據(jù)蟲情預測預報信息和實際情況，及時調(diào)整，主要內(nèi)容包括：所需廠房、設備；蜂種、蠶繭等生產(chǎn)資料；用工數(shù)量和時間；組織生產(chǎn)及應急保

5、障措施。廠房及設備廠房廠房配置如下：蜂種繁育室暖繭車間；剖腹取卵室洗卵室；消毒室；接種室；發(fā)育室；保鮮冷藏庫物品保存庫。設備主要包括：低溫生化培養(yǎng)箱；絞卵機；攪拌器；脫水機；烘干機；柞蠶卵色選機；包裝機；空調(diào)；排風機；電暖氣；加濕器；除濕器；溫濕度自控儀；發(fā)育盤架；手推運輸車等。常用藥品及材料主要包括：27克/升33克/升苯扎溴銨溶液(新潔爾滅消毒液)；孔徑尺寸0.150毫米的紗網(wǎng)；孔徑尺寸2毫米的紗網(wǎng)。蜂種準備蜂種采集在靶標害蟲產(chǎn)卵季節(jié)，于不同生境廣泛采集被赤眼蜂寄生的靶標害蟲卵，并做好標記，經(jīng)室內(nèi)培養(yǎng)，篩選出寄生率高、適應性強的蜂種。蜂種鑒定根據(jù)赤眼蜂雄性外生殖器的形態(tài)特征進行蜂種鑒定，詳

6、見附錄A。蜂種純化對采自不同靶標害蟲卵內(nèi)的赤眼蜂進行如下篩選純化：在試管(10毫米X70毫米)中投放米蛾卵(200粒)，再放入單頭雌蜂，用棉球或紗布封口后置于發(fā)育室；發(fā)育條件：光照16小時，(251)C、RH(755)%；黑暗8小時，(201)C、RH(755)%；將確定為螟黃赤眼蜂和松毛蟲赤眼蜂的單管分別合并，繼續(xù)繁殖。蜂種保存鑒定純化蜂種，經(jīng)數(shù)代篩選繁殖，建立起一定數(shù)量的種群后保存使用：將發(fā)育到幼蟲中期的蜂種，置入12C、RH(755)%的條件下，誘導滯育30天；置入(31)C、RH(755)%的條件下，進行解除滯育60天90天；經(jīng)10C24小時、15C24小時過渡后，按5.4.3b)變溫

7、發(fā)育至出蜂。柞蠶繭準備備繭備繭數(shù)量：按每繁70萬頭共寄生赤眼蜂用繭1kg計算。繭質(zhì)要求：健康雌繭率三90%；雄繭率W7；死傷繭率W3%；割口繭率W8%；發(fā)育蛹和嫩蛹率W5%;繭層率三10%，無薄皮繭、癟繭；柞蠶微抱子原蟲病檢率W8%;繭不潮、未接觸-3C以下或25C以上溫度。蠶繭保存蠶繭保存溫濕度為(31)C、RH(605)%；保存室適當通風換氣；防鼠海，避免發(fā)熱焙包,儲存時間不低于45天。滅菌消毒在生產(chǎn)前一周，將所有繁蜂車間及繁蜂工具，進行集中消毒。消毒方法按照DB22/T1025-2018中執(zhí)行。工廠化生產(chǎn)種蜂生產(chǎn)種蜂復壯根據(jù)生產(chǎn)計劃，定期對螟黃赤眼蜂和松毛蟲赤眼蜂種蜂以米蛾卵和柞蠶卵交替

8、繁育復壯螟黃赤眼蜂：接蜂比例：米蛾卵種蜂卵比為80：1，柞蠶卵種蜂卵比為1:2；接蜂時間：24小時48小時；發(fā)育條件：同5.4.3b)；復壯周期：3338天。松毛蟲赤眼蜂：接蜂比例：米蛾卵種蜂卵比為150:1，柞蠶卵種蜂卵比為1:2；接蜂時間：24小時48小時；發(fā)育條件：同5.4.3b)；復壯周期：33天38天。種蜂擴繁以柞蠶卵為中間寄主，將寄生于柞蠶卵的蜂種擴繁34代；接蜂比例：螟黃赤眼蜂種蜂卵與柞蠶卵比例為1:25，松毛蟲赤眼蜂種蜂卵與柞蠶卵比例為1:30；接蜂時間：24小時；接蜂條件：全黑暗，(251)C、RH(755)%；發(fā)育條件：同5.4.3b)；將末一代種蜂發(fā)育至幼蟲中后期置于(3

9、1)C、RH(755)%條件下冷藏，冷藏時間螟黃赤眼蜂不超過10天，松毛蟲赤眼蜂不超過15天。柞蠶卵生產(chǎn)暖繭發(fā)蛾按全年商品蜂生產(chǎn)量制定用繭計劃，然后按計劃在18C22C、RH(755)%的條件下暖繭發(fā)蛾，2025天開始逐漸羽化出蛾。在柞蠶蛾羽化期內(nèi)，每天下午開始將羽化的雄蛾挑揀干凈，次日清晨人工收集雌蛾，用于當天繁蜂或儲存在(31)C的冷庫中備用。剖腹取卵用人工方法將柞蠶雌蛾腹部與頭胸部分離后，用特制的絞卵機將腹部破碎或人工擠出卵巢。洗卵及消毒用攪拌器將卵與蛾腹內(nèi)雜物攪拌分離，加入清水反復漂洗數(shù)次，出去雜物，留下蛾卵。將清洗干凈的新鮮卵用0.1%的苯扎溴銨溶液浸泡5分鐘，進行消毒。脫水晾卵消毒

10、后的新鮮卵用布袋裝好，用脫水機進行初步脫水，然后用烘干機烘干，溫度不超過28C。清除綠卵烘干的新鮮卵用色選機剔除綠卵，使綠卵率低于4%。商品代接蜂松毛蟲赤眼蜂種蜂卵、螟黃赤眼蜂種蜂卵與新鮮柞蠶卵比例為3:7:21，當蜂種羽化率達15%20%時，將兩種赤眼蜂種蜂卵均勻撒在接蜂盤上，鋪上2毫米孔徑的紗網(wǎng)，再將定量的新鮮柞蠶卵平鋪到紗網(wǎng)上，送入(251)C、RH(755)%的暗室內(nèi)，48小時后，逐盤去除種蜂，標明日期送入發(fā)育室發(fā)育。培養(yǎng)發(fā)育接蜂后的寄主卵分批次送入(251)C、RH(755)%，自然光照條件下的發(fā)育室，繼續(xù)發(fā)育24小時至幼蟲后期。寄生卵冷藏將發(fā)育至幼蟲后期的螟黃赤眼蜂和松毛蟲赤眼蜂的

11、共寄生卵，平鋪到卵盤中置于冷庫內(nèi)貨架上冷藏：鋪卵厚度34厘米；冷庫溫度(31)C、RH(755)%，全黑暗；冷藏時間控制在30天以內(nèi)。寄生卵第一次加溫根據(jù)害蟲發(fā)生時間將共寄生卵從冷庫取出，加溫促進發(fā)育：在(151)C、RH(755)%，全暗條件下加溫24小時；按5.4.3b)變溫發(fā)育至預蛹期；寄生卵精選對發(fā)育至預蛹的赤眼蜂寄生卵，用柞蠶卵色選機除去未寄生卵、劣質(zhì)卵、綠卵及其他雜質(zhì)。寄生卵第二次加溫將精選后的寄生卵，置于發(fā)育室按5.4.3b)變溫發(fā)育至蛹后期，再按6.5的方法冷藏，冷藏時間不超過5天。過程記錄建立共寄生繁育松毛蟲赤眼蜂和螟黃赤眼蜂工廠化生產(chǎn)檔案，對整個生產(chǎn)過程進行詳實記錄，保存兩年以上，做到可追溯，記錄并保持以下內(nèi)容：執(zhí)行各個階段程序的人員姓名；時間；地點；執(zhí)行的具體操作內(nèi)容；記錄執(zhí)行的結(jié)果或觀察到的現(xiàn)象；其它。附錄A（資料性）螟黃赤眼蜂及松毛蟲赤眼蜂形態(tài)學鑒定方法A.1制作鑒定玻片將用濃度75%95%酒精浸泡的雄性赤眼蜂標本按下列方法制作為玻片：a）在5%的KOH溶液中浸泡815小時，并用水清洗干凈，置于載玻片上;b）在解剖鏡下，用昆蟲針挑取雄蜂的外生殖器，清除其他組織，蓋好蓋玻片；A.2觀察