病原微生物及免疫學融合實驗：Detecting T cell subsets of mouse splenocytes by Immunofluorescence_第1頁
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文檔簡介

1、Detecting T cell subsets of mouse splenocytes by ImmunofluorescenceImmunological labeling techniques Definition: Ag-Ab reactions are combined with labeling techniques. Known Ag or Ab is labeled with radioisotope, enzyme or fluorescein and unknown Ab or Ag are indirectly detected by labeled molecules

2、. Classification:Radioimmunoassay(RIA): 131I，32PImmunofluorescence technique: FITC，PEEnzyme Immunoassay: HRP，APImmunofluorescence technique：mouseFITC-anti-mouse-CD3 Ab PE-anti-mouse-CD4 AbRBC lysis：Tris -NH4ClMaterialsPreparation of spleen cellsSacrifice the mouse by cervical dislocationharvest the

3、spleenAdd 5ml Hanks solution, Grind the spleen, (preparation of single-cell suspension)Centrifuge at 2000rpm for 5min discard the supernatant Add 5 ml TRIS-NH4CL, mix incubate 5 min(lyse the RBC) Centrifuge at 2000rpm for 5min discard the supernatantAdd 5ml Hanks solution to wash the spleen cells Ce

4、ntrifuge at 2000rpm for 5min, discard the supernatant Add 1 ml Hanks solution, Count the cells, dilute to 1107/ml100l（1106 cells）Add FITC-anti-mouse-CD3 AbOR PE-anti-mouse-CD4 AbMix, incubate in dark, 30minAdd 400l PBS，MixPut on a cover slide and observe under the microscopeImmunofluorescencePreparation of spleen cel

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