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1、bo bardxera巴德生物科技有限公司1.目的規(guī)范單克隆抗體標記熒光PE （快速標記法）標準操作程序適用范圍適用于本公司抗體標記熒光PE （快速標記法）操作術(shù)語和定義藻紅蛋白，簡稱“PE”。相對分子質(zhì)量較大，約為240kD，最大吸收峰為564nm。職責和權(quán)限實驗員負責實施本規(guī)范，主管負責人監(jiān)督執(zhí)行。實驗試劑.5.1溶液配制0.01mol/L PBS溶液配制0.01mol/L Phosphate Buffered Saline， pH 7.40試劑名稱配方量批號用量Water1Lbo巴德生物科技有限公司NaCl (MW 58.44)0.799gKH2PO4(MW 136.09)0.2gKCl

2、 (MW 74.55)0.2gNa2HPO4 - 12H2O (MW 358.14)2.89g調(diào)節(jié)pH 7.40后，加水定容至1.0L，再調(diào)節(jié)pH至7.40，過濾備用。Storage Buffer，pH 7.40試劑名稱配方量批號用量0.01mol/L PBS/BSA0.5%NaN30.1%調(diào)節(jié)pH 7.40后，加水定容至1.0L，再調(diào)節(jié)至pH 7.40。5.2其他試劑bo巴德生物科技有限公司試劑名稱廠家批號活化液（modifier）淬滅劑（quencher）PE熒光素6.操作流程6.1抗體活化將抗體用0.01mol/L PBS稀釋為1mg/mL，加入 mL活化液（體積比為抗體溶液：反應活化液

3、=10:1）,旋渦振蕩器混勻后，室溫避光反應10min。6.2與PE反應形成共軛物將抗體混合液（步驟6.1）加入 mg PE熒光素中（加入量：抗體與熒光素質(zhì)量比為1:1），在室溫條件下避光反應3小時，反應開始時間： 至結(jié)束時間 ：；（或2-8度條件下避光過夜）。6.3熒光淬滅向共軛物（步驟6.2）中加入 mL淬滅劑（淬滅劑添加量按抗體體積：淬滅劑體積=10:1添加）。混勻后，室溫孵育30分鐘，去除游離的熒光素的熒光效應。淬滅開始時間：至結(jié)束時間：。6.4層析將共軛物（步驟6.3）層析柱分離，進一步去除游離的熒光素或抗體。bo bardxera巴德生物科技有限公司6.5保存收集得到的標記抗體（步驟6.4

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