兩種血小板制品細菌培養(yǎng)結(jié)果分析

1、兩種血小板制品細菌培養(yǎng)結(jié)果分析林棟崔四平蘇婉蘭陳寶嬋葉柱江Summary目的 探討單采血小板與混合血小板在血液采集制備過程中細菌污染 的危險程度，為血小板的采集制備過程中改良工藝，提高輸血平安性提供可靠 數(shù)據(jù)。方法 采用生物梅里埃公司生產(chǎn)的BaeT/Alert 3D全自動細菌培養(yǎng)儀及 應(yīng)用需氧瓶(BPA Culture Bottle)、厭氧瓶(BPN Culture Bottle)對 5210 例單采血小板，1653例混合血小板進行了細菌培養(yǎng)，細菌培養(yǎng)陽性者轉(zhuǎn)種，轉(zhuǎn) 種陽性者進行細菌鑒定。結(jié)果 在5210例單采血小板細菌培養(yǎng)經(jīng)確定陽性6 例，陽性率為1.15%)；例53例混合血小板中細菌培養(yǎng)經(jīng)

2、確定陽性10例,陽性 率6. 05%。結(jié)論混合血小板細菌培養(yǎng)陽性率(6.05%。)高于單采血小板(1. 15%o),兩者比擬差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；血小板細菌污染情況仍 然嚴峻，應(yīng)引起注意。Key單采血小板；濃縮血小板；混合血小板；細菌污染；細菌培養(yǎng)R446, 5 B 2095-0616 (2014) 11-119-037朱立葦，徐健.血小板成分細菌污染和預(yù)防J.國外醫(yī)學(xué)輸血及血液學(xué)分冊,2006, 29 (3) ： 270-272.8朱立葦，徐健，王擁軍，等.單采血小板獻血者已獻血次數(shù)對血小板細菌污 染的影響J,中國輸血雜志,2010, 23 (10) : 828-829.9秦艷蘭，

3、劉景春，劉赴平，等.全自動微生物培養(yǎng)系統(tǒng)在單采血小板細菌培 養(yǎng)中假陽性結(jié)果的質(zhì)量控制J.中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)科學(xué)版)，2009, 30(A4) ： 246-248.10巫貢曉，蘭竹，陳永超，等機采血小板細菌培養(yǎng)的假陽性結(jié)果分析及控 制J 南海醫(yī)學(xué),2010, 21 (9) ： 6-7.11陳金鳳，梁兵，李姍丹，等.東莞市2009-2011年血小板細菌培養(yǎng)情況分 析J.蛇志,2013, 25 (2) ： 140-142.12張兆晴，莫海英機采血小板采集過程細菌污染控制方法及意義J.現(xiàn)代 醫(yī)院,2013, 13 (6) ： 68-70.13林棟，葉柱江，劉仁強，等.混合血小板在濾白前后的質(zhì)量比擬J.

4、臨床 血液學(xué)雜志(輸血與檢驗版)，2012, 25 (12) ： 805-806.一全文完一Analysis of bacterial culture results of two types of platelet productsLIN Dongl CUI Sipingl SU Wanlanl CHEN Baochan2 YE Zhujiangl1. Dongguan Central Blood Station,Dongguan 523930,China；2. Department of Blood Transfusion,Dongguan Donghua Hospital, Donggu

5、an 523110,China Abstract Objective To investigate the criticality of bacterial pollution in the blood collection and preparation process of single donor platelets and mixed platelets in order to provide reliable data for improving the technology in the collection and preparation process of platelets

6、 and improving the blood transfusion safety.Methods The BaeT/Alert 3D Full-Automatic Bacterial Culture System produced by BioM e rieux and the BPA Culture Bottle and BPN Culture Bottle were used for the bacterial culture of 5210 cases of single donor platelets and 1653 cases of mixed platelets. The

7、samples showing g positive bacterial culture results received subcultivation and the subcultivated sample showing positive results received bacterial identification. Results Of the 5210 cases of single donor platelets,bacterial culture confirmed 6 positive cases,with the positive rate of 1. 15%o. Of

8、 the 1653 cases of mixed platelets,bacterial culture confirmed 10 positive cases,with the positive rate of 6. O5%o. Conclusion The positive bacterial culture rate of mixed platelets (6. 05%o) is higher than that of the single donor platelets (1. 15%o), with statistically significant difference(P 0.

9、01). The bacterial pollution situation of platelets is still severe and needs attention.Key words Single donor platelets；Concentrated platelet；Mixed platelet；Bacterial pollution；Bacterial culture血液制品是細菌生長的天然培養(yǎng)基，尤其是血小板制品是在(222) t條件下 水平振蕩保存5d,如果血小板采集制備過程中有少數(shù)細菌污染，它也能夠快速 在血小板制品中繁殖并造成血液污染。隨著社會的開展，醫(yī)療水平的提高

10、，臨 床輸血平安也受到重視。目前雖然嚴格進行獻血者的篩選，提高了酶免的檢測 水平，增加了核酸檢測技術(shù)的應(yīng)用，但血液(特別是血小板)的細菌污染問題 依然存在，因此國內(nèi)局部血站對血小板制品進行細菌培養(yǎng)，以減少細菌污染的 血液用于臨床。本血站于2003年以來就對血小板制品進行細菌培養(yǎng)，現(xiàn)對我站 20112012年血小板制品細菌培養(yǎng)結(jié)果進行分析，報道如下。1材料與方法1. 1標本來源2011年1月2012年12月，東莞市無償捐獻的單采血小板5210例；利用全血 制備的混合血小板1653例。留取單采血小板的細菌培養(yǎng)標本 根據(jù)獻血者健康檢查要求的血小 板采集要求，對無償獻血者進行體格檢查、血常規(guī)、乙肝外表

11、抗原、轉(zhuǎn)氨酶等 工程快速檢查合格后，用血細胞別離機進行血小板采集，將最先采集的15mL血 液流進標本小袋，采集完畢后血小板放于（222）七水平振蕩條件下保存24h 后，留取812mL培養(yǎng)樣本。1. 1. 2留取混合血小板的細菌培養(yǎng)標本用一次性三聯(lián)采血袋（300mL、 400mL）采集的全血，在采集后6h內(nèi)用富含血小板血漿法（PRP）制備濃縮血小 板，制備完畢后血小板放于（222） 條件下水平振蕩保存24h。將各項檢驗 結(jié)果合格的57袋血型相同的濃縮血小板，使用無菌接駁機進行接駁，制備成 一個治療量的混合血小板，留?。?12） mL培養(yǎng)樣本。主要儀器與試劑BaeT/Alert 3D全自動細菌培養(yǎng)

12、儀、需氧瓶、厭氧瓶（美國生物梅里埃公司），生物平安柜（造鑫企業(yè)有公司），Cryofuge6000i離心機（德國 Heraeus） , XHZ-IB血小板恒溫振蕩保存箱（蘇州市醫(yī)用儀器廠），Msc+血細 胞別離機，Amicus血細胞別離機，Trima Accel血細胞別離機，Compomat G4 血液成分別離機（德國費森尤斯），LMB血液成分別離機（德國），TSCD無菌 接駁機（日本泰爾茂），配套使用一次性全封閉管道系統(tǒng)（血小板耗材），一 次性使用注射器等。方法將單采血小板及混合血小板留取的培養(yǎng)標本在生物平安柜上進行細菌培養(yǎng)，嚴 格執(zhí)行無菌操作，先接種厭氧瓶，后接種需氧瓶，每個培養(yǎng)瓶分別接種4

13、mL標 本，放進BacT/Alert 3D全自動細菌培養(yǎng)儀進行細菌培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中，如 有陽性報警顯示時，抽取陽性瓶培養(yǎng)液8mL進行轉(zhuǎn)種培養(yǎng)，仍為陽性者，進行 細菌種類鑒定，細菌鑒定由東莞市虎門醫(yī)院檢驗科完成；假設(shè)培養(yǎng)至第7天還沒 有陽性報警顯示那么為陰性。統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS17.3統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料用率表示，采用x2檢驗，P 0. 05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果2.1匯集血小板與單采血小板細菌培養(yǎng)結(jié)果5210例單采血小板細菌培養(yǎng)經(jīng)確定陽性6例，陽性率為1. 15%0；在1653例混 合血小板中細菌培養(yǎng)經(jīng)確定陽性10例，陽性率6.05%。混合血小板的細菌培 養(yǎng)陽性率高于單

14、采血小板，兩者比擬差異有統(tǒng)計學(xué)意義（PV0.01）。見表1。表1匯集血小板與單采血小板細菌培養(yǎng)結(jié)果血小板制品類型n陽性數(shù)（n）陽性率（。）單采血小板5210 6 1. 15混合血小板1653 10 6. 05注：x2=10.84, P72h 2 12. 50合計 16 100. 00 3討論 一個治療量的混合血小板由57袋的濃縮血小板通過無菌接駁機匯集在同一血 袋而成；一個治療量的單采血小板是使用血細胞別離機在全封閉的條件下自動 將獻血者血液中的血小板別離并懸浮一定量血漿內(nèi)的單采成分血。從表1我們 可以看出，混合血小板的細菌培養(yǎng)陽性率高于單采血小板，兩者比擬差異有統(tǒng) 計學(xué)意義（P0.01）,混

15、合血小板細菌污染的危險程度高于單采血小板。筆者 認為原因有四：（1）供者的數(shù)量不同。我們從兩種血液制品的定義中可以看 出，混合血小板供者的數(shù)量5倍于單采血小板，供者越多污染機會越大。（2） 制備過程的不同。混合血小板從全血采集到別離成濃縮血小板，再匯集成一個 治療量的混合血小板，中間經(jīng)過屢次的離心與接駁，大大增加細菌污染的機 會。（3）采血的環(huán)境不同。全血的采集主要是在采血車上完成，由于采血車上 的環(huán)境衛(wèi)生與室內(nèi)采血室的環(huán)境衛(wèi)生差異，使混合血小板受污染的機會加大。（4）白細胞的殘留量不同。血細胞別離機的采集血小板時有自動去除白細胞的 功能，使單采血小板的白細胞殘留量到達一個比擬低的水平，減少被

16、污染的機 會。國外的一些研究說明單采血小板的細菌污染為1 ： 10001 ： 3000及手工混合血 小板。1 ： 3001 ： 1000的有關(guān)細菌污染的報道1-4；在國內(nèi)血小板細菌污染的問題 也引起很多輸血界專家們的關(guān)注，并對血小板采集制備過程中的關(guān)鍵控制點采 取一些預(yù)防措施5-8；而在細菌培養(yǎng)過程中造成假陽性的原因也進行分析與探 討9-H。2011年1月2012年12月，我站單采血小板細菌培養(yǎng)陽性率15%o,混合血小板細菌培養(yǎng)陽性率6. 05%o,血小板制品總細菌培養(yǎng)陽性率為33%o,相比2007年的報道的4. 7%。6下降了 一半,但比國外報道的相比也 高出很多，血小板制品細菌污染問題仍然

17、嚴峻，特別是混合血小板。國外相關(guān) 報道，血小板細菌污染鑒定出的微生物包括葡萄球菌屬(42%),大腸埃希菌(9%),棒桿菌屬(8%),沙門氏菌(9%),鏈球菌屬(12%),沙雷氏菌(8%),腸科細菌(7%)和其他微生物(4%)；國內(nèi)有關(guān)報道大約56%的細菌 經(jīng)鑒定為革蘭陽性菌，大多為需氧菌7。從表2可以得知，本站檢出的細菌以 革蘭陽性桿菌(50%)和葡萄球菌屬(25%)為主，還少量的單胞菌(12.5%)、 霉菌(6.12%)、革蘭陰性桿菌(6. 12%),這基本上與國內(nèi)外報道一致。血小 板制品細菌污染的來源既有內(nèi)源性的，也有外源性的。內(nèi)源性的污染主要來自 菌血病癥態(tài)的獻血者、采血時皮膚外表細菌或

18、帶有細菌的皮膚碎片進入血袋。 為防止內(nèi)源性的血小板細菌污染只能通過加強體格檢查(尤其是穿刺部位皮膚 檢查)、健康征詢等方式排除不合格的獻血者，減少細菌污染。而外源性的血 小板細菌污染可以從采血環(huán)境空氣消毒、工作人員個人衛(wèi)生、穿刺處皮膚消 毒、儀器耗材，去除最先采集的15mL血液，改良制備工藝等關(guān)鍵點來減少細菌 污染12 o從表3中顯示，血小板制品細菌培養(yǎng)在48h內(nèi)出現(xiàn)初篩反響性報警達80. 25%, 即大局部血小板制品細菌污染可以在48h內(nèi)被發(fā)現(xiàn)，這樣可以保證絕大局部細 菌污染的血小板不能發(fā)往臨床。一旦經(jīng)培養(yǎng)陽性的血小板發(fā)往臨床，只能緊急 通知臨床輸血科的收回血液制品方法來彌補，如果血小板已輸注，應(yīng)加強觀 察，提前使用抗菌藥，及時處理可能發(fā)生的細菌性輸血反響。綜上所述，混合血小板比單采血小板細菌污染危險程度高，但是隨著臨床上對 血小板需求日益增長，單采血小板因單采耗材昂貴、獻血者健康要求高、獻血 地點不夠靈活、獻血時間長等各種因素，以致臨床單采血小板的供應(yīng)比擬緊 張。混合血小板制備使用是對單采血小板在臨床上緊張供應(yīng)局面的有效補充， 大大有效緩解單采血小板供應(yīng)壓力13。但它的細菌污染問題也要引起注意， 建議有條件的血站應(yīng)對血小板制品進行細菌培養(yǎng)，減少細菌性輸血反響，保證 臨床用血平安。ReferenceKuehnert MJ,