病毒標(biāo)本采集和核酸檢測技術(shù)指南10-18-16

1、病毒標(biāo)本采集和核酸檢測技術(shù)指南為指導(dǎo)各級醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)和其他相關(guān)機(jī)構(gòu)規(guī)范開展肺炎標(biāo)本 采集與實驗室檢測工作，確保檢測質(zhì)量，提高檢測效率，特 制定本指南。一、標(biāo)本采集（一）采集對象。肺炎病例、可疑感染人員和其他需要進(jìn)行檢測的人員，以及 可能被污染的環(huán)境或物品等。（二）采樣人員基本要求。從事標(biāo)本采集的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)經(jīng)過生物安全和實驗室檢測技 術(shù)培訓(xùn)，熟練掌握標(biāo)本采集方法和操作流程，考核合格后方可上 崗。采樣時，應(yīng)做好標(biāo)本信息記錄，嚴(yán)格遵守操作流程，確保標(biāo) 本質(zhì)量符合要求、標(biāo)本及相關(guān)信息可追溯。（三）標(biāo)本采集基本要求。.住院病例的標(biāo)本由所在醫(yī)院的醫(yī)護(hù)人員采集，密切接觸者標(biāo) 本由當(dāng)?shù)刂付ǖ募部貦C(jī)構(gòu)、醫(yī)療機(jī)

2、構(gòu)負(fù)責(zé)采集。采集標(biāo)本時， 要根據(jù)不同采集對象設(shè)置不同的采樣區(qū)域，發(fā)熱患者前往發(fā)熱門 診就診和采樣。.確診病例、無癥狀感染者、入境人員、密切接觸者和密接（一）檢測人員要求。實驗室檢測人員應(yīng)當(dāng)具有實驗室工 作經(jīng)歷以及相關(guān)專業(yè)技術(shù)技能，接受過病毒相關(guān)檢驗檢測技能 培訓(xùn)。檢測機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)按照所開展檢測項目及標(biāo)本量配備實驗室 檢測人員，以保證及時、高效完成檢測和結(jié)果報告。（二）實驗室檢測。1.實時熒光RT-PCR方法檢測病毒核酸。（1）核酸檢測實驗室。核酸檢測實驗室按功能區(qū)布置位置 的不同，可分為集中布置形式和分散布置形式。開展病毒核酸檢測的實驗室應(yīng)當(dāng)設(shè)置以下區(qū)域：試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo) 本制備區(qū)、擴(kuò)增和產(chǎn)物

3、分析區(qū)。根據(jù)使用儀器的功能，區(qū)域 可適當(dāng)合并。如采用標(biāo)本加樣、核酸提取及擴(kuò)增檢測為一體的 自動化分析儀，標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)可合并。集中 布置形式的實驗室設(shè)置應(yīng)遵循“各區(qū)獨立，單向流動（注意風(fēng) 向，壓力梯度走向），因地制宜，方便工作”的原則。各區(qū)的 功能如下：試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)：用于分裝、儲存試劑、制備擴(kuò)增反 應(yīng)混合液，以及儲存和準(zhǔn)備實驗耗材。該區(qū)應(yīng)配備冰箱或冰柜、離 心機(jī)、試驗臺、渦旋振蕩器、微量加樣器等。為防止污染， 該區(qū)宜保持正壓狀態(tài)。標(biāo)本制備區(qū)：標(biāo)本轉(zhuǎn)運桶的開啟、標(biāo)本滅活（必要時）、 核酸提取及模板加入至擴(kuò)增反應(yīng)管等。該區(qū)應(yīng)配備冰箱或冰柜、生 物安全柜、離心機(jī)、試驗臺、微量加樣器

4、，可根據(jù)實際工作10 需要選配自動化核酸提取儀等。標(biāo)本轉(zhuǎn)運桶的開啟、分裝應(yīng)在 生物安全柜內(nèi)完成。為防止污染，該區(qū)宜保持負(fù)壓狀態(tài)。為操 作方便，標(biāo)本的分裝以及核酸提取也可以在獨立的生物安全二 級(BSL-2)實驗室進(jìn)行，提取的核酸可以轉(zhuǎn)運至該區(qū)加至擴(kuò)增 反應(yīng)液中。核酸擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)：進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)和產(chǎn)物分析。 該區(qū)應(yīng)配備實時熒光定量PCR儀。為防止擴(kuò)增產(chǎn)物污染環(huán)境， 該區(qū)宜保持負(fù)壓狀態(tài)，壓力等于或低于標(biāo)本制備區(qū)。(2)病毒核酸的熒光定量RT-PCR檢測。實驗室應(yīng)當(dāng)制定 標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP),并嚴(yán)格按照SOP進(jìn)行操作。接到標(biāo)本后, 應(yīng)當(dāng)在生物安全柜內(nèi)對標(biāo)本進(jìn)行清點核對，并依據(jù)SOP進(jìn)行試 劑

5、準(zhǔn)備、標(biāo)本前處理、核酸提取、核酸擴(kuò)增、結(jié)果分析及報告。 實驗室應(yīng)當(dāng)建立可疑標(biāo)本復(fù)檢的流程。試劑準(zhǔn)備。應(yīng)當(dāng)選擇國家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)的試劑， 建議根據(jù)核酸提取試劑及擴(kuò)增體系的要求選擇配套的標(biāo)本采樣 管，不建議免提取核酸直接進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)。標(biāo)本處理。使用含胭鹽等滅活型采樣液的標(biāo)本無需進(jìn)行 滅活處理，可直接進(jìn)行核酸提取，而使用非滅活型采樣液的標(biāo) 本，按照核酸提取試劑盒的說明，取適量標(biāo)本加至核酸提取裂 解液中充分混勻作用一定的時間則可以有效滅活病毒。選用熱 滅活時可采用95T加熱15分鐘，不推薦采用56T孵育30分鐘 的處理方式滅活病毒，該條件不能保障充分滅活病毒。11污水水樣標(biāo)本處理可參考污水中

6、富集濃縮和核酸檢測方 法標(biāo)準(zhǔn)(WS/T 799-2022)推薦的方法；污水拭子標(biāo)本處理可 參考農(nóng)貿(mào)(集貿(mào))市場環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范(WS/T776-2021) 推薦的方法。核酸提取。將滅活后的標(biāo)本取出，在生物安全柜內(nèi)打開 標(biāo)本采集管加樣，或按照核酸提取試劑盒的說明，將標(biāo)本與裂 解液作用足夠時間后繼續(xù)核酸提取步驟，核酸提取完成后立即 封蓋。取適量核酸加至PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中。核酸擴(kuò)增。將擴(kuò)增體系放入熒光定量PCR儀，按照試劑 盒說明書設(shè)置擴(kuò)增程序，啟動擴(kuò)增程序。擴(kuò)增完成后反應(yīng)管不 可開蓋，直接放于垃圾袋中，封好袋口，不可高壓，按一般醫(yī) 療廢物轉(zhuǎn)移出實驗室處理。檢測機(jī)構(gòu)所選用的病毒核酸檢測試劑應(yīng)針對病

7、毒基因組中開放讀碼框 lab (open reading frame lab, ORF lab) 和核衣殼蛋白(nucleocapsid protein, N)基因，人體標(biāo)本檢 測原則上選擇含內(nèi)源性內(nèi)參的核酸檢測試劑。陽性標(biāo)本的確認(rèn)。實驗室確認(rèn)陽性病例需滿足以下兩個條件中的一個：條件一：同一份標(biāo)本中病毒2個靶標(biāo)(ORFlab. N)實時熒 光RT-PCR檢測結(jié)果均為陽性。如果出現(xiàn)單個靶標(biāo)陽性的檢測結(jié) 果，則需要重新檢測或重新采樣復(fù)核。條件二：兩種標(biāo)本實時熒光RT-PCR同時出現(xiàn)單靶標(biāo)陽性，12 或同種類型標(biāo)本兩次采樣檢測中均出現(xiàn)單個靶標(biāo)陽性的檢測結(jié) 果，可判定為陽性。環(huán)境與生物材料核酸檢測陽性

8、要排除疫苗接種物殘留污染 的影響。核酸檢測結(jié)果假陰性的可能原因包括：標(biāo)本質(zhì)量差； 標(biāo)本采集時間過早或過晚；標(biāo)本保存、運輸和處理不當(dāng)；其他 原因如病毒變異、PCR抑制等。質(zhì)控。由上級疾控部門對下級疾控實驗室進(jìn)行核酸檢測 質(zhì)控考核，中國疾控中心每年至少開展一次對省級疾控機(jī)構(gòu)實 驗室的質(zhì)控考核，并同時提供全國病毒實驗室檢測質(zhì)控方案， 省級針對地市級實驗室的質(zhì)控考核每年不少于兩次。各檢測機(jī) 構(gòu)應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)核酸檢測質(zhì)量控制，選用擴(kuò)增檢測試劑盒指定的核 酸提取試劑和擴(kuò)增儀。性能驗證。臨床標(biāo)本檢測前，實驗室應(yīng)對核酸提取試劑、 提取儀、擴(kuò)增試劑、擴(kuò)增儀等組成的檢測系統(tǒng)進(jìn)行必要的性能 驗證，性能指標(biāo)包括但不限于精密

9、度（至少要有重復(fù)性）和最 低檢測限。室內(nèi)質(zhì)控。實驗室可按照國家衛(wèi)生健康委辦公廳關(guān)于醫(yī) 療機(jī)構(gòu)開展核酸檢測有關(guān)要求的通知（國衛(wèi)辦醫(yī)函（2020） 53號）要求規(guī)范開展室內(nèi)質(zhì)控。每批檢測至少有1份弱陽性質(zhì) 控品（第三方質(zhì)控品，通常為檢出限的1.5-3倍）、3份陰性質(zhì)控品（生理鹽水）。質(zhì)控品隨機(jī)放在臨床標(biāo) 本中，參與從提取到擴(kuò)增的全過程。大規(guī)模人群篩查時，一旦13 出現(xiàn)陽性結(jié)果，應(yīng)對陽性標(biāo)本采用另外一到兩種更為靈敏的核 酸檢測試劑對原始標(biāo)本進(jìn)行復(fù)核檢測，復(fù)核陽性方可報出。物品和環(huán)境標(biāo)本的采集檢測，還需在采樣前及采樣過程中 至少設(shè)一個現(xiàn)場空白標(biāo)本及一個運輸空白標(biāo)本，以進(jìn)行過程中 的質(zhì)量控制。室間質(zhì)評。

10、實驗室應(yīng)常態(tài)化參加國家級或省級疾控機(jī)構(gòu)組 織的室間質(zhì)評。對檢測量大以及承擔(dān)重點人群篩查等任務(wù)的實 驗室，可適當(dāng)增加室間質(zhì)評頻率。不按要求參加室間質(zhì)評的， 或室間質(zhì)評結(jié)果不合格的，應(yīng)通報批評并上報國家衛(wèi)健委，待 室間質(zhì)評通過后方可開展核酸檢測。核酸檢測實驗室質(zhì)控詳細(xì)內(nèi)容參見國家衛(wèi)生健康委辦公 廳關(guān)于加強(qiáng)疾控機(jī)構(gòu)病毒核酸檢測實驗室質(zhì)量控制的通知 （國衛(wèi)辦疾控函2021） 548號）疾控機(jī)構(gòu)病毒核酸檢測質(zhì) 量控制方案。.病毒全基因組測序。病毒全基因組測序可以監(jiān)測病毒基 因組突變，為病毒核酸檢測試劑、疫苗研發(fā)策略的改變提供實 驗數(shù)據(jù)，同時也為流調(diào)溯源工作提供支持。（1）測序標(biāo)本選取原則。結(jié)合流調(diào)信息和

11、病例傳播鏈關(guān)系， 優(yōu)先選擇以下標(biāo)本開展測序：核酸檢測Ct值W32的本土疫情 中的首發(fā)或早期病例、與早期病例有流行病學(xué)關(guān)聯(lián)的關(guān)鍵病例、感 染來源不明的本土病例、境外輸入病例、入境物品及相關(guān)環(huán) 境陽性標(biāo)本、疫苗接種后核酸檢測陽性者標(biāo)本等。測序結(jié)果應(yīng)14 與本地近一個月的輸入病例和本土病例序列進(jìn)行比對。對同一 傳播鏈或流行病學(xué)關(guān)系明確的病例無需全部測序。（2）測序要求。測序單位和流程。以省、自治區(qū)、直轄市為單位確定開 展病毒全基因組測序的機(jī)構(gòu)，包括省級疾控機(jī)構(gòu)和科研機(jī)構(gòu)； 具備測序條件的省份要在接收標(biāo)本后24小時內(nèi)開展測序工作。 不具備測序條件的省份要及時將標(biāo)本送至病毒病所，病毒病所 收到標(biāo)本后及時

12、啟動序列測定工作。結(jié)果報告與反饋。各省份要建立本省輸入、本土病例病 毒基因組數(shù)據(jù)庫，及時進(jìn)行序列比對分析，逐步提高自主分析 能力。獲得的全部測序數(shù)據(jù)都必須上報中國疾控中心病毒病所 用于我國病毒溯源數(shù)據(jù)庫的更新與維護(hù)。對本土疫情的指示或 首發(fā)病例、本土疫情中由不同基因型的毒株導(dǎo)致的新傳播鏈的 指示或首發(fā)病例，測序完成后應(yīng)于24小時內(nèi)將數(shù)據(jù)報送病毒病 所，病毒病所確認(rèn)數(shù)據(jù)完整無誤后于48小時之內(nèi)反饋結(jié)果；對 本土疫情中歸屬已知傳播鏈的病例、境外輸入病例、環(huán)境標(biāo)本 （非指示或首發(fā)病例相關(guān)），測序數(shù)據(jù)于每周周一上午集中上 報，病毒病所確認(rèn)數(shù)據(jù)完整無誤后于一周之內(nèi)反饋結(jié)果。.血清抗體檢測。血清抗體檢測用

13、作病毒核酸檢測的 補(bǔ)充檢測，也用于評估疫苗接種后誘發(fā)的免疫反應(yīng)。應(yīng)采用中 國藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的試劑進(jìn)行檢測，采集急性期（發(fā)病715 天內(nèi)）和恢復(fù)期（3-4周后）雙份血清進(jìn)行檢測，也可根據(jù)臨 床需要確定采集時間，疑似病毒感染者抗體檢測陽性時應(yīng)排除 疫苗接種因素的影響。.病毒分離培養(yǎng)。（1）病毒分離培養(yǎng)對象。對核酸檢測Ct值W30的所有境 外輸入病例的標(biāo)本、本土疫情中的首發(fā)或早期病例、與早期病例 有流行病學(xué)關(guān)聯(lián)的關(guān)鍵病例、感染來源不明的本土病例以及疫苗 接種后核酸陽性者標(biāo)本開展病毒分離培養(yǎng)。（2）毒株報送與結(jié)果反饋。具有病毒分離、培養(yǎng)資質(zhì)的省 級疾控機(jī)構(gòu)應(yīng)開展病毒分離培養(yǎng)工作，收到關(guān)鍵標(biāo)本后96

14、小 時內(nèi)開展相關(guān)工作，在獲得分離毒株后96小時內(nèi)將毒株送病毒 病所保存?zhèn)浒福⒍局晷蛄械认嚓P(guān)信息報送病毒病所。不具 備病毒分離條件的省份，要在病例報告后48小時內(nèi)啟動送樣流 程，將標(biāo)本送達(dá)病毒病所，病毒病所收到標(biāo)本后應(yīng)在96小時 內(nèi)啟動病毒分離工作，獲得毒株后96小時內(nèi)反饋分析結(jié)果。.抗原檢測。不具備開展核酸檢測條件的基層醫(yī)療衛(wèi)生機(jī) 構(gòu)、隔離觀察人員和有抗原自我檢測需求的社區(qū)居民可以進(jìn)行 抗原檢測?？乖瓩z測不作為確診病例或無癥狀感染者診斷的依 據(jù)，僅用作核酸檢測方法的補(bǔ)充，實現(xiàn)“快篩快檢”，提高感 染者發(fā)現(xiàn)的及時性。具體實施流程及要求參照病毒抗原檢測 應(yīng)用方案（試行）（聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制綜發(fā)（20

15、22 ） 21號）執(zhí) 行。16三、實驗室活動Th物安全要求根據(jù)病毒傳播特性、致病性和臨床資料等信息，該病毒按照第二類病原微生物進(jìn)行管理，具體要 求如下：（一）實驗活動規(guī)范。病毒培養(yǎng)、動物感染實驗應(yīng)當(dāng)在生物安全三級及以上實驗室開展；未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料的操作 應(yīng)當(dāng)在生物安全二級及以上實驗室進(jìn)行，同時采用不低于生物安全三級實驗室的個人防護(hù)；滅活材料 的操作應(yīng)當(dāng)在生物安全二級及以上實驗室進(jìn)行；不涉及感染性材料的操作，可以在生物安全一級實驗 室進(jìn)行。（二）相關(guān)標(biāo)本處置。各省級衛(wèi)生健康行政部門要根據(jù)疫情防控需要和實驗室生物安全有關(guān)要求，及時研判提出病毒實 驗室檢測生物標(biāo)本處置意見。對確需保存的，應(yīng)當(dāng)盡快

16、指定具備保存條件的機(jī)構(gòu)按照相對集中原則進(jìn) 行保存，或送至國家級菌（毒）種保藏中心保藏；對無需保存的，由相關(guān)機(jī)構(gòu)按照生物安全有關(guān)要求 及時處理。（三）實驗室廢棄物處理及實驗室污染的處理。參考醫(yī)療機(jī)構(gòu)核酸檢測工作手冊（試行第二版）。的密接在住院、隔離觀察或健康監(jiān)測期間應(yīng)“單采單檢”，即單 獨采集個體的標(biāo)本，單管進(jìn)行核酸檢測，不得進(jìn)行混采混檢。.根據(jù)臨床及實驗室檢測工作的需要，可在住院、隔離期間多 次采樣，可同時采集呼吸道、血液、便等多種標(biāo)本。采樣人員應(yīng)嚴(yán) 格遵循采樣規(guī)范，保障所采集標(biāo)本質(zhì)量符合要求，同時應(yīng)詳細(xì)記 錄受檢者信息，可利用條形碼掃描等信息化手段采集相關(guān)信息。.人群篩查應(yīng)根據(jù)核酸提取、檢測

17、所用試劑的要求確定采樣管, 用于病毒分離的標(biāo)本應(yīng)放置于不含有病毒滅活劑的采樣管。.物品和環(huán)境監(jiān)測應(yīng)根據(jù)監(jiān)測目的和防控需求，確定采樣物品 位置與數(shù)量，采樣時應(yīng)嚴(yán)格遵循采樣規(guī)范。（四）采集標(biāo)本種類。每個病例必須采集呼吸道標(biāo)本（上呼吸道標(biāo)本或下呼吸道標(biāo) 本），重癥病例優(yōu)先采集下呼吸道標(biāo)本；根據(jù)臨床需要可留取便 標(biāo)本、全血標(biāo)本、血清標(biāo)本和尿標(biāo)本。物品和環(huán)境標(biāo)本根據(jù)監(jiān)測 需求采集。標(biāo)本種類如下：.上呼吸道標(biāo)本：包括鼻咽拭子、口咽拭子等。.下呼吸道標(biāo)本：深咳痰液、肺泡灌洗液、支氣管灌洗液、呼 吸道吸取物等。.便標(biāo)本/肛拭子：留取糞便標(biāo)本約10克（花生大?。?，如 果不便于留取便標(biāo)本，可采集肛拭子。.血液標(biāo)本

18、：抗凝血，采集量5ml,建議使用含有EDTA抗凝劑的真空采血管采集血液。血清標(biāo)本：盡量采集急性期、恢復(fù)期雙份血清。血清應(yīng)當(dāng)盡 早（最好在發(fā)病后7天內(nèi)）采集，第二份血清應(yīng)當(dāng)在發(fā)病后 第34周采集。采集量5ml,建議使用無抗凝劑的真空采血管。 血清標(biāo)本主要用于抗體的測定，不進(jìn)行核酸檢測。尿標(biāo)本：留取中段晨尿，采集量23nli。物體表面標(biāo)本：包括進(jìn)口冷鏈?zhǔn)称坊蜻M(jìn)口貨物的內(nèi)外包裝表 面，以及運輸儲藏工具等可能被污染的部位進(jìn)行涂抹采集的標(biāo)本。污水標(biāo)本：根據(jù)海運口岸大型進(jìn)口冷凍物品加工處理場所 排水系統(tǒng)分布情況，重點選取污水排水口、內(nèi)部管網(wǎng)匯集處、污 水 井、污水流向的下游或與市政管網(wǎng)的連接處等關(guān)鍵位置對

19、未經(jīng)消殺 處理的污水進(jìn)行采樣。其它：已有唾液等標(biāo)本用于病毒檢測的報告。（五）標(biāo)本采集和處理。.鼻咽拭子：采樣人員一手輕扶被采集人員的頭部，一手執(zhí)拭 子，拭子貼鼻孔進(jìn)入，沿下鼻道的底部向后緩緩深入，由于鼻道呈弧 形，不可用力過猛，以免發(fā)生外傷出血。待拭子頂端到達(dá)鼻咽腔 后壁時，輕輕旋轉(zhuǎn)一周（如遇反射性咳嗽，應(yīng)停留片刻），然后 緩緩取出拭子，將拭子頭浸入含23ml病毒保存液（也可使 用等滲鹽溶液、組織培養(yǎng)液或磷酸鹽緩沖液）的管中，尾部棄去，旋 緊管蓋。. 口咽拭子：被采集人員頭部微仰，嘴張大，露出兩側(cè)扁桃 體，采樣人員將拭子越過舌根，在被采集者兩側(cè)扁桃體稍微用力 來回擦拭至少3次，然后再在咽后壁上

20、下擦拭至少3次，將拭子 頭浸入含23nli病毒保存液（也可使用等滲鹽溶液、組織培養(yǎng) 液或磷酸鹽緩沖液）的管中，尾部棄去，旋緊管蓋?？谘适米右部?與鼻咽拭子放置于同一管中。.鼻咽抽取物或呼吸道抽取物：用與負(fù)壓泵相連的收集器從鼻 咽部抽取粘液或從氣管抽取呼吸道分泌物。將收集器頭部插入鼻 腔或氣管，接通負(fù)壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出，收集抽取的 粘液，并用3ml采樣液沖洗收集器一次（亦可用小兒導(dǎo)尿管接 在50ml注射器上來替代收集器）。.深咳痰液：要求病人深咳后，將咳出的痰液收集于含3ml 采樣液的采樣管中。如果痰液未收集于采樣液中，可在檢測前 加入23nli采樣液，或加入痰液等體積的痰液消化液。痰

21、液 消化液儲存液配方見表lo使用時將儲存液用去離子水稀釋至 50ml,與痰液等體積混合使用，或者參照試劑說明進(jìn)行使用，也 可采用痰液等體積的含lg/L蛋白酶K的磷酸鹽緩沖液將痰液化。表1痰液消化液儲存液配方成分質(zhì)量/體積 TOC o 1-5 h z 二硫蘇糖醇0. 1g氯化鈉0.78g氯化磷0.02g磷酸氫二鈉0.112g磷酸二氫鉀0. 02g水PH 值 7. 40. 2 (25)7. 5ml.支氣管灌洗液：將收集器頭部從鼻孔或氣管插口處插入 氣管(約30cm深處)，注入5ml生理鹽水，接通負(fù)壓，旋轉(zhuǎn) 收集器頭部并緩慢退出，收集抽取的粘液，并用采樣液沖洗收集 器一次，也可用小兒導(dǎo)尿管接在50m

22、l注射器上來替代收集。.肺泡灌洗液：局部麻醉后將纖維支氣管鏡通過口或鼻經(jīng) 過咽部插入右肺中葉或左肺舌段的支氣管，將其頂端契入支氣 管分支開口，經(jīng)氣管活檢孔緩緩加入滅菌生理鹽水，每次30 50ml,總量100250ml,不應(yīng)超過300mlo.糞便標(biāo)本：取1ml標(biāo)本處理液，挑取黃豆粒大小的糞便 標(biāo)本加至管中，輕輕吹吸35次，室溫靜置10分鐘，以 8000rpm離心5分鐘，吸取上清液進(jìn)行檢測。糞便標(biāo)本處理液可自行配制，配方見表2O也可使用HANK S液或其它等滲鹽 溶液、組織培養(yǎng)液或磷酸鹽緩沖液溶解便標(biāo)本制備便懸液。如 患者出現(xiàn)腹瀉癥狀，則留取糞便標(biāo)本35ml,輕輕吹打混勻后, 以8000rpm離心

23、5分鐘，吸取上清液備用。表2糞便標(biāo)本處理液配方成分質(zhì)量/體積Tris1.211g氯化鈉8. 5g無水氯化鈣（或含結(jié)晶水的氯化鈣）1. 1g (1.47g)水800ml用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH為7. 5,以去離子水補(bǔ)充至1000ml.肛拭子：用消毒棉拭子輕輕插入肛門35cm,再輕輕旋 轉(zhuǎn)拔出，立即放入含有35nli病毒保存液的15ml外螺旋蓋采 樣管中，棄去尾部，旋緊管蓋。.血液標(biāo)本：建議使用含有EDTA抗凝劑的真空采血管采集 血液標(biāo)本5ml,根據(jù)所選用核酸提取試劑的類型確定以全血或 血漿進(jìn)行核酸提取。如需分離血漿，將全血1500-2000rpm離 心10分鐘，收集上清液于無菌螺口塑料管中。.血清標(biāo)本：

24、用真空負(fù)壓采血管采集血液標(biāo)本5ml,室溫 靜置30分鐘，1500-2000rpm離心10分鐘，收集血清于無菌 螺口塑料管中。.物體表面標(biāo)本：參考農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場環(huán)境監(jiān)測技術(shù) 規(guī)范（WS/T7762021）推薦的方法，采樣拭子充分浸潤病毒保存液后在表面重復(fù)涂抹，將拭子放回采樣管浸 潤，取出后再次涂抹采樣，重復(fù)3次以上。對表面較大的物體 進(jìn)行多點分布式采樣。.污水標(biāo)本：采集污水的水體標(biāo)本時，參考污水中富集 濃縮和核酸檢測方法標(biāo)準(zhǔn)（WS/T799-2022）,用無菌聚乙烯 瓶采集污水樣本，采樣體積為300mlo可根據(jù)現(xiàn)場條件和檢測 需求確定水樣采集方式，如瞬時水樣（采樣點位某一時間隨機(jī) 采集的樣本）

25、或混合水樣（同一采樣點位不同時間所采集的瞬 時水樣混合后的樣本）；如農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場內(nèi)排水溝內(nèi)無法 采集足夠體積水樣，可采集污水的拭子標(biāo)本，參考農(nóng)貿(mào)（集 貿(mào)）市場環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范（WS/T776-2021）推薦的方法，用拭子浸入吸附污水，將拭子 放回采樣管浸潤，取出后再次浸入污水，重復(fù)3次以上，對每 個污水采樣位置應(yīng)進(jìn)行多點分布式采樣。.其他材料：如唾液等標(biāo)本，依據(jù)檢測需求采集。（六）標(biāo)本包裝。標(biāo)本采集后應(yīng)在生物安全二級實驗室生 物安全柜內(nèi)分裝。.所有標(biāo)本應(yīng)當(dāng)放在大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有墊圈、耐冷 凍的標(biāo)本采集管里，擰緊。容器外注明標(biāo)本編號、種類、姓名 及采樣日期。.將密閉后的標(biāo)本裝入密封袋，每袋限一份標(biāo)本。標(biāo)本包 裝要求要符合危險品航空安全運輸技術(shù)細(xì)則相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)。.涉及外部標(biāo)本運輸?shù)?，?yīng)根據(jù)標(biāo)本類型，按照A類或B 類感染性物質(zhì)進(jìn)行三層包裝。（七）標(biāo)本保存。用于病毒分離和核酸檢測的標(biāo)本應(yīng)當(dāng)盡 快進(jìn)行檢測，可在24小時內(nèi)檢測的標(biāo)本置于4 （2-8） 保存；24小時內(nèi)無法檢測的標(biāo)本應(yīng)置于-7CTC或以下保存（如 無-7（TC保存條件，則于-2CTC冰箱暫存）。血清標(biāo)本可在4 存放3天，-2（TC以下可長期保存。境外高風(fēng)險區(qū)域人群以及肺 炎患者的密切接觸者等人員的核酸檢測標(biāo)本，檢測后，應(yīng)當(dāng)在-