第五節(jié)溫敏突變株

1、一、溫敏突變株的特性二、溫敏突變株的篩選方法 誘變 篩選 三、溫敏突變株在工業(yè)中的應用 第四節(jié) 溫敏突變株的篩選1 1、溫度敏感突變株（temperature-sensitive mutant,TS突變株） 在誘變處理后的菌群中能分離到這樣一類突變株：在許可溫度下能正常生長，其表型和野生型沒有區(qū)別，在非許可的溫度下不能生長或微弱生長，表型與野生型不同，這屬條件致死型突變株。一、溫敏突變株的特性2必需基因突變：非許可溫度下不生長。非必需基因突變：添加某些生長因子生長。2、誘變機制CM（非許可溫度下培養(yǎng)）MM（非許可溫度下培養(yǎng)）MM（許可溫度下培養(yǎng)）必需基因突變非必需基因突變3酶的活力、菌體生長和

2、代謝正常酶的活力喪失、菌體生長停止許可溫度下非許可溫度下發(fā)酵產物積累和分泌 這是因為在許可溫度下所合成的酶在轉入非許可溫度下的一段時間仍然保持一定的濃度并具有活性，另外在非許可溫度下培養(yǎng)時，仍能合成少量酶。3、發(fā)酵生理性能41、誘變突變株主要是基因錯義所致采用的誘變劑，要選擇易于引起堿基置換的亞硝基類、磺酸酯類化合物，或亞硝酸、紫外線方法同常規(guī)育種相同。二、溫敏突變株的篩選方法5（1）抗生素法（2）過濾或離心法（3）H3前體法（富集大分子合成缺損TS）2、富集離心加抗生素非許可溫度下培養(yǎng)分離過濾或離心非許可溫度下培養(yǎng)分離非許可溫度下培養(yǎng)分離加入H3尿嘧啶6非必需基因突變必需基因突變3、分離篩選

3、（1）常規(guī)法誘變后的菌懸液分離CM（許可溫度下培養(yǎng)）MM（30許可） CM MM（40不許可） 影印誘變后的菌懸液分離CM（許可溫度下培養(yǎng)）誘變后的菌懸液分離CM（許可溫度下培養(yǎng)）標記MM（30許可）非許可溫度7三、溫敏突變株在發(fā)酵工業(yè)中的應用1、在谷氨酸發(fā)酵中的應用加入青霉素和表面活性劑生物素缺陷型油酸或甘油缺陷型溫敏型突變株：30培養(yǎng)菌體大量繁殖37培養(yǎng)十幾個小時細胞膜的合成結構發(fā)生障礙82、在絲氨酸發(fā)酵中的應用原料甲醇絲氨酸甘氨酸磷酸烯醇式丙酮酸C4二羧酸絲氨酸羥甲基酶8-羥基圭林、2,2-聯(lián)吡啶、Co2+或Ni2+93、微生物單細胞蛋白的生產 作為生產單細胞蛋白的微生物菌種，除本身應富

4、含蛋白質外，還要生長速度快，底物利用率高；細胞壁易破碎，容易自溶和絮凝。DNA復制缺損酵母26生長正常37細胞形態(tài)發(fā)生變化，凝聚成叢狀2生長正常37自溶10第五節(jié) 抗噬菌體菌株的選育一、烈性噬菌體及其效價的測定三、抗噬菌體菌株的選育二、溫和噬菌體及溶源菌四、抗噬菌體菌株的特性研究 11 噬菌體的生活史： 效價：每毫升試樣中所含有的侵染性的噬菌體粒子數(shù)。 1、重層瓊脂法 2、單層平板法 3、快速測定法 4、斑點試驗法一、烈性噬菌體及其效價的測定吸附侵入增殖成熟裂解噬菌體濃度12含噬菌體樣品敏感菌瓊脂培養(yǎng)基瓊脂培養(yǎng)基涂布噬菌體重層瓊脂法單層平板法快速測定法斑點試驗法13二、溫和噬菌體及溶源菌1、溫

5、和噬菌體（temperate phage ）： 如果侵入宿主后，噬菌體的DNA只整合在宿主的核染色體組上，并長期隨宿主DNA的復制而復制，在一般情況下不進行增殖和引起宿主細胞裂解。142、溫和噬菌體存在的形式（1）具有完整的顆粒形態(tài)，對細胞具有感染力的游離狀態(tài)；（2）侵入細胞后，DNA與宿主染色體結合，成為原噬菌體；（3）脫離寄主染色體，在細胞內成為具有獨立繁殖能力的營養(yǎng)期噬菌體。侵入原噬菌體溶源菌153、溶源菌的顯著特性（1）自發(fā)裂解（2）誘導（3）復愈（4）免疫性（immunity）（5）溶源轉變（lysogenic conversion）存在于細菌中放線菌中 篩選時要注意區(qū)分真正的抗性菌

6、株和溶源菌。溶源菌檢測： 少量溶源菌和大量敏感指示菌混合培養(yǎng)，形成中央有小的溶源菌落，四周有透明圈的特殊噬菌斑16三、抗噬菌體菌株選育噬菌體的危害1、專一性噬菌體獲得和純化噬菌斑蛋白胨培養(yǎng)液重層瓊脂法純化172、高效價噬菌體原液的制備重層瓊脂法純化對數(shù)期敏感菌10h離心 10h對數(shù)期敏感菌過濾器 183、噬菌體原液效價測定用 含1的 蛋白胨稀釋，然后涂布重層瓊脂效價=平均每皿噬菌斑稀釋倍數(shù)取樣值194、菌株誘發(fā)突變和分離誘變劑噬菌體含噬菌體平板205、液體搖瓶振蕩培養(yǎng)培養(yǎng)至對數(shù)期高效價噬菌體新培養(yǎng)基高效價噬菌體高效價噬菌體高效價噬菌體酶活力抗性都高的菌株21選育流程1、專一性噬菌體獲得和純化2、高效價噬菌體原液的制備3、噬菌體原液效價測定4、菌株誘發(fā)突變和分離5、液體搖瓶振蕩培養(yǎng)6、進一步考查抗噬菌體菌株對周圍環(huán)境中存在的各種噬菌體的抗性22重層瓊脂法多次分離敏感菌離心上清為高效價噬菌體效價