山茱萸總苷分離純化工藝研究

1、山茱萸總苷分散純化工藝研究李小娜呂立勛周潔徐海燕陳蘋蘋【摘要】目的應(yīng)用大孔吸附樹脂對(duì)山茱萸中環(huán)烯醚萜苷類身分舉行分散純化，觀察大孔樹脂純化山茱萸總苷的工藝參數(shù)。要領(lǐng)觀察上樣量、洗脫劑濃度、洗脫體積、上樣濃度等因素對(duì)HPD-100大孔吸附樹脂純化山茱萸環(huán)烯醚萜苷的影響。以洗脫液中莫諾苷和馬錢苷含量作為觀察指標(biāo)，用HPL法測(cè)定其含量，確定最正確工藝參數(shù)。結(jié)果洗脫溶劑應(yīng)為50%乙醇，大孔樹脂每利用兩次必要再生1次，最正確上樣濃度為0.25g/l，洗脫溶劑的用量為8倍的吸附原液體積，吸附容量為10l。結(jié)論接納大孔樹脂分散純化的山茱萸總苷可用于制備環(huán)烯醚萜苷制劑?！娟P(guān)鍵詞】山茱萸總苷；大孔吸附樹脂；高效

2、液相色譜法；純化Abstrat：bjetiveTstudythetehnlgialparaetersfpurifiatinfttalglysidefrrnusffiinalisitharprusresin.ethdsThesaplevlue,elutinnentratin,vlueandsaplenentratinerebservedandparediththseelutinslvents.ThepurifiatinfirididglysidesasevaluatedithntentsfrrnisideandlganinbyHPLethdsResultsElutingslventas50%et

3、hanl,thearprusresinusedtienededtbereneed,thebestsaplenentratinas0.25g/l,thevluefelutingslventasEighttiesthefvluefsapleslutin,theabsrptinapaityas10l.nlusinIrididglysideanbepurifiedbyarprusItisafeasibleethdtprduepreparatinKeyrds：Ttalglysidesfrusffiinalis;arprusresin;HPL;Purifiatin山茱萸總苷(Ttalglusidesfrr

4、nusffiinalis，TG)為中藥山茱萸的重要藥效部位，包羅馬錢苷lganin、莫諾苷rrniside、獐牙菜苷、馬鞭草苷、山茱萸新苷等十余種環(huán)烯醚萜苷，已經(jīng)證明可以或許落血糖并對(duì)糖尿病心臟和腎病病變有必然的庇護(hù)作用13，有抗炎、免疫按捺作用46，對(duì)阿爾采末病和腦堵塞有治療作用78。大孔吸附樹脂對(duì)單味中藥提取物中苷類、黃酮、生物堿的分散純化結(jié)果精良9，10。本工藝應(yīng)用大孔吸附樹脂對(duì)山茱萸中環(huán)烯醚萜苷類身分舉行分散純化，并觀察大孔樹脂純化山茱萸總苷的參數(shù)。1儀器與試藥1.1儀器Agilent1100Series高效液相色譜儀安捷倫科技；KD-16H高速型離心機(jī)科大創(chuàng)新股份中佳分公司；BT12

5、5D十萬分之一天平塞多利斯細(xì)密科學(xué)儀器；Heidlph2旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。1.2藥品與試劑山茱萸藥材購(gòu)于唐山市醫(yī)藥藥材公司；馬錢苷、莫諾苷比較品自提娶精制，經(jīng)1H-NR和13-NR確定為馬錢苷和莫諾苷，歸一化法測(cè)定含量大于99.3%；HPD-100大孔樹脂滄州寶恩化工；甲醇為色譜純FisherheAlert，別的試劑均為闡發(fā)純，水為重蒸餾水。2要領(lǐng)與結(jié)果2.1山茱萸吸附原液的制備稱取山茱萸粉40目200g，加8倍量30乙醇浸泡留宿，回流提取2次，1h/次，過濾，歸并濾液，濾液接納乙醇，濃縮制成每毫升相稱于0.25g生藥的溶液，靜置，濾過，即得山茱萸吸附原液，4保存?zhèn)溆谩?.2大孔吸附樹脂預(yù)處置懲罰與

6、再生大孔吸附樹脂一樣平常含有未聚合的單體及殘留溶劑，利用前須先行撤除。樹脂用95%乙醇浸泡24h，傾去上浮物后濕法裝柱，用乙醇洗至流出液與水混淆不出現(xiàn)白色乳濁征象即可，然后以大量蒸餾水洗凈柱中乙醇，水浸泡備用；再生時(shí)用90乙醇洗脫至流出液無色，以大量水洗去乙醇即可。假設(shè)樹脂顏色較深，用0.1l/L氫氧化鈉溶液浸泡2h，用水洗至中性，再加0.1l/L鹽酸溶液浸泡2h，用水洗至中性，末了用95%乙醇洗至洗脫液與等體積水混淆不污濁，用蒸餾水洗至無醇，備用。2.3山茱萸總苷中莫諾苷和馬錢苷的含量測(cè)定色譜柱為Diansil18色譜柱2504.6，5；活動(dòng)相為甲醇-水溶液梯度洗脫，洗脫劑甲醇在08in為3

7、2%，在815in為32%36%，在1520in為36%；柱溫為室溫；流速1l/in；檢測(cè)波長(zhǎng)237n；進(jìn)樣量20l。配制莫諾苷和馬錢苷的系列比較品溶液，20l進(jìn)樣闡發(fā)。以莫諾苷和馬錢苷的峰面積Y為縱坐標(biāo)，莫諾苷和馬錢苷的濃度為橫坐標(biāo)，經(jīng)回歸處置懲罰得尺度曲線的回歸方程。此中莫諾苷為Y=25404+21.01r=0.9995，馬錢苷為Y=20518+25.36r=0.9993。莫諾苷和馬錢苷在0.01360.533g/l范疇內(nèi)線性精良。2.4HPD-100大孔樹脂純化山茱萸總苷工藝參數(shù)的研究取HPD-100大孔樹脂20g，濕法裝柱，預(yù)處置懲罰后備用。別離取0.25g/l的吸附原液5l，5支大孔

8、樹脂柱上樣，通過舉舉措態(tài)吸附。用水洗脫樹脂柱至洗脫液近無色，再用10%，30%，50%，70%，95%乙醇50l洗脫，網(wǎng)絡(luò)洗脫液，定容50l，測(cè)定莫諾苷和馬錢苷的含量。結(jié)果見表1。由表1可知山茱萸總苷最正確洗脫劑為50%乙醇。取差異濃度0.25，0.5，1，2g/l的山茱萸吸附原液5l，用50%乙醇50l洗脫，網(wǎng)絡(luò)洗脫液，定容50l，測(cè)定莫諾苷和馬錢苷的含量。結(jié)果見表2。由表2可知SPF-100大孔樹脂的最正確上樣濃度為0.25g/l的吸附原液。表2差異上樣濃度的含量測(cè)定結(jié)果略別離取0.25g/l的吸附原液5l，大孔樹脂柱上樣，用水洗脫樹脂柱至洗脫液近無色，再別離用50%乙醇30l(6倍，40

9、l(8倍，50l10倍洗脫，網(wǎng)絡(luò)洗脫液，定容50l，測(cè)定莫諾苷和馬錢苷的含量。結(jié)果見表3。由表3可知SPF-100大孔樹脂的洗脫溶劑的用量10倍的吸附原液體積，但綜合思量洗脫溶劑用量及接納溶劑等因素，可選8倍量的洗脫溶劑。表3差異洗脫溶劑用量的含量測(cè)定結(jié)果略別離取0.25g/l的吸附原液5，10，15，20l，大孔樹脂柱上樣，用水洗脫樹脂柱至洗脫液近無色，再別離用50%乙醇50l洗脫，網(wǎng)絡(luò)洗脫液，定容50l，測(cè)定莫諾苷和馬錢苷的含量。結(jié)果見表4。由表4可知SPF-100大孔樹脂在吸附原液為5l時(shí)吸附最完全，但綜合思量，吸附原液為10l時(shí)服從最高。表4差異吸附容量的含量測(cè)定結(jié)果略3討論大孔樹脂精

10、制苷類具有吸附容量大、洗脫服從高等長(zhǎng)處，使馬錢苷和莫諾苷的含量進(jìn)步，在預(yù)處置懲罰的條件下不失為一種提取苷類的精良吸附劑。中藥身分在樹脂上的吸附大概為放熱歷程，低溫有利于進(jìn)步中藥身分的比上柱量，因此上樣前將吸附原液放冰箱低溫處置懲罰可增大吸附量。吸附原液上柱前，必需舉行抽濾或離心等預(yù)處置懲罰以撤除沉淀和雜質(zhì)，上樣液愈澄清，山茱萸總苷的純化率愈高，亦能進(jìn)步樹脂的利用壽命。曾接納紫外法測(cè)定山茱萸總苷的含量，但是經(jīng)大孔樹脂富集后得到的總苷在237n擺布并沒有最大汲取峰，加上紫外法滋擾多，特殊是在中藥身分龐大的環(huán)境下很難確定其正確性，莫諾苷和馬錢苷是山茱萸總苷中含量最高的兩種環(huán)烯醚萜苷，約占總苷的85，

11、應(yīng)選用了HPL法同時(shí)測(cè)定莫諾苷和馬錢苷的要領(lǐng)確定山茱萸總苷的分散純化工藝。【參考文獻(xiàn)】1陳霞,沈愛寶,錢東生.山茱萸差異提取部位對(duì)小鼠血糖的影響J.南通醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2022,24(4):365.2時(shí)艷,許惠琴.山茱萸環(huán)烯醚萜總苷對(duì)實(shí)行性糖尿病心臟病變的庇護(hù)作用J.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2022,22(1):35.3XuHQ,HaHP,ZhangX,etal.rrnisideprtetsulturedhuanubilialvEinendthelialellsfrdaagebyhighabientgluseJ.AtaPharalgiaSinia,2022,25(4):412.4趙世萍,陳玉武,郭景珍.山茱萸總甙的抗炎免疫按捺作用J.中日友愛病院學(xué)報(bào),1996,10(4):295.5李建民,周勇,張麗,等.山茱萸總甙對(duì)HUVE表達(dá)IA-1、D44的影響J.中國(guó)免疫學(xué)雜志,2000,16(11):604.6孟晶，唐仕波，李辰，等.山茱萸總甙對(duì)大鼠角膜移植排擠反響免疫按捺作用機(jī)制研究J.中國(guó)病理生理雜志，2022，21(5):927.7褚燕琦，李瑋，張?zhí)m，等.山茱萸環(huán)烯醚萜苷對(duì)卵白磷酸酶按捺劑岡田酸擬阿爾采末病細(xì)胞模子的作用J.中國(guó)藥理學(xué)轉(zhuǎn)達(dá)，2022，22(8):96