瓊脂糖電泳槽單芯垂直板電泳槽

1、瓊脂糖電泳槽單芯垂直板電泳槽第一章 概 述一、生物化學實驗技術開展簡史 在20世紀，生物科學迅猛開展，其中生物化學與分子生物學的進展尤為迅速。作為一門最具活力和生氣的實驗科學，在21世紀必將成為帶頭的學科，這主要有賴于生物化學與分子生物學實驗技術的不斷開展和完善。 20年代： 1、微量分析技術導致了維生素、激素和輔酶等的發(fā)現(xiàn)。2、瑞典著名的化學家T.Svedberg奠基了“超離心技術，1924年制成了第一臺5000g5000 r/min8000 r/min相對離心力的超離心機，開創(chuàng)了生化物質離心別離的先河，并準確測定了血紅蛋白等復雜蛋白質的分子量，獲得了1926年的諾貝爾化學獎。 30年代：

2、電子顯微鏡技術翻開了微觀世界，使我們能夠看到細胞內的構造和生物大分子的內部構造。 40年代： 1、英國科學家Martin和Synge創(chuàng)造了分配色譜層析，他們獲得了1952年的諾貝爾化學獎。由此，層析技術成為別離生化物質的關鍵技術。2、 瑞典的著名科學家Tisellius建立了“電泳技術，從而開創(chuàng)了電泳技術的新時代，他因此獲得了1948年的諾貝爾化學獎。 50年代： 自1935年Schoenheimer和Rittenberg首次將放射性同位素示蹤用于碳水化合物及類脂物質的中間代謝的研究以后，“放射性同位素示蹤技術在50年代有了大的開展，為各種生物化學代謝過程的說明起了決定性的作用。 60年代：

3、1、各種儀器分析方法用于生物化學研究，取得了很大的開展，如HPLC技術、紅外、紫外、圓二色等光譜技術、NMR核磁共振技術等。 2、1958年Stem，Moore和Spackman設計出氨基酸自動分析儀，大大加快了蛋白質的分析工作。 3、1967年Edman和Begg制成了多肽氨基酸序列分析儀。4、1973年Moore和Stein設計出氨基酸序列自動測定儀，又大大加快了對多肽一級構造的測定，十多年間氨基酸的自動測定工作得到了很大的開展和完善。 5、1962年，英國科學家Wilkins通過對DNA分子的X-射線衍射研究證實了Watson和Crick的DNA模型，與美國科學家Watson和英國科學家

4、Crick共同分享了當年的諾貝爾生理醫(yī)學獎，他們的研究成果開創(chuàng)了生物科學的歷史新紀元。 在X-射線衍射技術方面，英國物理學家Perutz對血紅蛋白的構造進展X-射線構造分析, Kendrew測定了肌紅蛋白的構造，成為研究生物大分子空間立體構造的先驅，他們同獲1962年諾貝爾化學獎。 在60年代，層析和電泳技術又有了重大的進展，在19681972年Anfinsen創(chuàng)立了親和層析技術，開辟了層析技術的新領域。 1969年Weber應用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳技術測定了蛋白質的分子量，使電泳技術取得了重大進展。 70年代：1、基因工程技術取得了突破性的進展，Arber，Smith和Nathans三

5、個小組發(fā)現(xiàn)并純化了限制性內切酶。2、1972年，美國斯坦福大學的Berg等人首次用限制性內切酶切割了DNA分子，并實現(xiàn)了DNA分子的重組。 1973年，又由美國斯坦福大學的Cohen等人第一次完成了DNA重組體的轉化技術，這一年被定為基因工程的誕生年，Cohen成為基因工程的創(chuàng)始人，從此，生物化學進入了一個新的大開展時期。與此同時，各種儀器分析手段進一步開展，制成了DNA序列測定儀、DNA合成儀等。 80至90年代： 基因工程技術進入輝煌開展的時期。1、1980年，英國劍橋大學的生物化學家Sanger和美國哈佛大學的Gilbert分別設計出兩種測定DNA分子內核苷酸序列的方法，而與Berg共獲

6、諾貝爾化學獎，從此，DNA序列分析法成為生物化學與分子生物學最重要的研究手段之一。他們3人在DNA重組和RNA構造研究方面都作出了出色的奉獻。 2、1981年由Jorgenson和Lukacs首先提出的高效毛細管電泳技術HPCE，由于其高效、快速、經濟，尤其適用于生物大分子的分析，因此受到生命科學、醫(yī)學和化學等學科的科學工作者的極大重視，開展極為迅速，是生化實驗技術和儀器分析領域的重大突破，意義深遠?，F(xiàn)今，由于HPCE技術的異軍突起，HPLC技術的開展重點己轉到制備和下游技術。 2、1984年德國科學家Kohler、美國科學家Milstein和丹麥科學家Jerne由于開展了單克隆抗體技術，完善

7、了極微量蛋白質的檢測技術而共享了諾貝爾生理醫(yī)學獎。 3、1985年美國加利福尼亞州Cetus公司的Mullis等創(chuàng)造了PCR技術Polymerase Chain Reaction即聚合酶鏈式反響的DNA擴增技術，對于生物化學和分子生物學的研究工作具有劃時代的意義，因而與第一個設計基因定點突變的Smith共享1993年的諾貝爾化學獎。 4、美國哈佛大學的Folin教授和中國的吳憲教授對生物化學常用的各種分析方法血糖分析、蛋白質含量分析、氨基酸測定等的建立作出了歷史性的奉獻。 5、1988年，美國遺傳學家McClintock由于在二十世紀五十年代提出并發(fā)現(xiàn)了可移動的遺傳因子而獲得諾貝爾生理醫(yī)學獎。

8、1989年，美國科學家Altman和Cech由于發(fā)現(xiàn)某些RNA具有酶的功能稱為核酶而共享諾貝爾化學獎。 1993年，美國科學家Roberts和Sharp由于在斷裂基因方面的工作而榮獲諾貝爾生理醫(yī)學獎。 1994年，美國科學家Gilman和Rodbell由于發(fā)現(xiàn)了G蛋白在細胞內信息傳導中的作用而分享諾貝爾生理醫(yī)學獎。 1995年，美國科學家Lewis、德國科學家Nusslein-Volhard和美國科學家Wieschaus由于在20世紀4070年代先后獨立鑒定了控制果蠅體節(jié)發(fā)育基因而共享諾貝爾生理醫(yī)學獎。 由近百年來生物化學及其實驗技術的開展史可以看出，該學科的開展與實驗技術的開展密切相關，每一

9、種新的生化物質的發(fā)現(xiàn)與研究都離不開實驗技術，實驗技術每一次新的創(chuàng)造都大大推動了生物化學研究的進展，因而對于每一位現(xiàn)代生物科學工作者，尤其是生物化學工作者，學習并掌握各種生物化學實驗技術就是極為重要的。 二、實驗室規(guī)那么1、不得缺席、遲到、早退。2、認真預習實驗指導，明確實驗目的，了解實驗原理、方法和步驟，充分做好準備工作。3、進實驗室應穿白大衣。4、保持實驗室的安靜和整潔，不隨地亂丟紙屑雜物。5、遵守操作規(guī)程，如實記錄實驗數(shù)據，不得抄襲他人的實驗記錄或報告。 6、 不亂動與本實驗無關的儀器設備，不亂用他組人的儀器和材料。7、實驗室內各種儀器設備，未經同意不得擅自帶出室外。不熟悉儀器性能時，切勿

10、隨意動手。凡損壞儀器者，應立即報告指導教師，查明原因，并視情節(jié)賠償處理。8、 在實驗操作中要注意平安，聽從教師的指導如發(fā)生事故要立即采取平安措施，并及時報告指導教師。9、 要節(jié)約水、電、藥品試劑和材料。10、 實驗完畢時，要認真整理好室內儀器設備，清點好各類用具，做好清潔整理工作，關好門、窗、水、電，經指導教師檢查合格方可離開實驗室。11、 實驗完畢，應按實驗要求寫好實驗報告交給指導教師。 三、實驗室常識1、凡揮發(fā)性、有煙霧、有毒和有異味氣體的實驗，均應在通風柜內進展，試劑用后嚴密風口。盡量縮短操作時間，減少外泄，操作者最好戴手套、口罩。2、凡使用有機試劑需注意： 1遠離火源：如乙醚、丙酮、乙

11、醇、苯等易燃試劑。 2最大限度減少與有機溶劑的接觸。3、見光易變質的試劑，用棕色瓶貯存或黑紙包裝，并每次少量配制。4、容量瓶是量器，不能用作容器。5、稱量試劑應用硫酸紙，不可用濾紙。 6、標簽紙大小應與容器相稱，寫明物質的名稱、規(guī)格、濃度、配制日期及配制人。7、取用試劑后需將瓶塞塞嚴，放回原處。未用完的試劑勿倒回瓶內。8、配完試劑后，用過的器皿應及時用自來水浸泡以便清洗和減少對器皿的侵蝕。9、洗凈器皿應倒置架上自然枯燥或烤干。10、貴重儀器要熟知使用方法，嚴格遵守操作規(guī)程，如濺污應及時擦拭。11、挪動干凈玻璃儀器時，勿使手指接觸儀器內部。四、實驗室平安1、熟悉實驗室環(huán)境，了解水、電閥門位置及開

12、關方法。2、不要用濕的手、物接觸電源。水、電一經使用完畢，就立即關閉水龍頭、電源及開關。點燃的火柴用后立即熄滅，不得亂扔。3、嚴禁在實驗室內飲食、吸煙，或把食具帶進實驗室。實驗完畢，必須洗凈雙手。4、絕對不允許隨意混合各種化學藥品，以免發(fā)生意外事故。5、一些有機溶劑使用時必須遠離明火、熱源，用畢立即蓋緊瓶塞。6、傾注藥劑或加熱液體時，不要俯視容器。濃酸、濃堿具有強腐蝕性，切勿使其濺在皮膚或衣服上。稀釋濃硫酸時，應將其慢慢倒入水中，而不能相反進展，以防止迸濺。給試管加熱時，切記不要使試管口向著自己或別人。7、不要俯向容器去嗅放出的氣味。能產生有刺激性或有毒氣體如H2S、HF、Cl2、CO、NO2

13、、SO2、Br2等的實驗必須在通風櫥內進展。8、有毒藥品特別是氰化物不得進入口內或接觸傷口。剩余的廢液也不能隨便倒入下水道，應倒入廢液缸或教師制定的容器里。9、金屬汞易揮發(fā)，并通過呼吸道而進入人體內，逐漸積累會引起慢性中毒。做金屬汞的實驗應特別小心，不得把金屬汞灑落在桌上或地上。一旦灑落，必須盡可能收集起來，并用硫磺粉蓋在灑落的地方，使金屬汞轉變成不揮發(fā)的硫化汞。10、實驗室所有藥品不得攜出室外。 五、實驗室急救1、創(chuàng)傷：假設是玻璃創(chuàng)傷，應先把碎玻璃從傷處挑出。輕傷可涂以紫藥水或紅汞、碘酒，必要時撒些消炎粉或敷些消炎膏，用繃帶包扎。2、燙傷：傷處皮膚未破時，可涂擦飽和碳酸氫鈉溶液或用碳酸氫鈉粉

14、調成糊狀敷于傷處，也可抹獾油或燙傷膏；如果傷處皮膚已破，可涂些紫藥水或1%高錳酸鉀溶液。3、受酸腐蝕致傷：先用大量水沖洗，再用飽和碳酸氫鈉溶液或稀氨水、肥皂水洗，最后再用水沖洗。如果酸液濺入眼內，用大量水沖洗后，到醫(yī)院診治。 4、受堿腐蝕致傷：先用大量水沖洗，再用2%醋酸溶液或飽和硼酸溶液洗，最后再用水沖洗。如果堿濺入眼中，用硼酸溶液洗。5、吸入刺激性或有毒氣體：吸入氯氣、氯化氫氣體時，可吸入少量酒精和乙醚的混合蒸氣使之解毒。吸入硫化氫或一氧化碳氣體而感不適時，應立即到室外呼吸新鮮空氣。但應注意氯氣、溴中毒不可進展人工呼吸，一氧化碳中毒不可施用興奮劑。8、毒物進入口內：將510ml稀硫酸銅溶液

15、參加一杯溫水中，內服后，用手指伸入咽喉部，促使嘔吐，吐出毒物，然后立即送醫(yī)院。9、觸電：首先切斷電源，然后在必要時進展人工呼吸。10、起火： 六、玻璃儀器的清洗及各種溶液的配制 一洗滌方法：洗滌程序：泡洗泡沖漱1、新儀器的洗滌： 12%的鹽酸浸泡數(shù)小時 2自來水沖凈 3洗滌劑溶液中浸泡過夜 4用試管刷擦洗容器內外壁 5自來水沖10遍 6蒸餾水漱洗內壁3遍 7枯燥備用 2、使用過的玻璃儀器的清洗 1自來水洗刷至無污物。 2用適宜的毛刷沾去污劑粉洗刷，或浸泡在0.5的清洗劑中超聲清洗比色皿決不可超聲 3用自來水徹底洗凈去污劑。 4用無離子水洗兩次，烘干備用計量儀器不可烘干。1非定量敞口儀器的洗滌試

16、管、燒杯等： 1洗滌劑溶液或清水中浸泡過夜。 2試管刷蘸肥皂、洗衣粉擦洗容器內外壁。 3自來水沖10遍。 4蒸餾水漱洗內壁3遍。 5枯燥備用。注意：檢查毛刷頂部是否裸露，洗刷時用力不可過猛，以免戳破玻璃儀器。 2窄口儀器的洗滌容量瓶、試劑瓶： 1洗滌劑溶液或清水中浸泡過夜。 2)洗滌劑溶液倒入容器內約1/4。 3)小心轉動或搖動儀器。 4)自來水沖10遍。 5) 蒸餾水涮洗內壁3遍。 6)枯燥備用。3 石英和玻璃比色皿的清洗1用1 2的去污劑浸泡。 2用自來水沖洗，可使用一支綢布包裹的小棒或棉花球棒刷洗。 3蒸餾水涮洗內壁3遍。 清洗干凈的比色皿也應內外壁不掛水珠。 決不可用強堿清洗，因為強堿

17、會浸蝕拋光的比色皿。 4、刻度吸管的洗滌： 1)使用后立即用大量自來水沖洗。 2)枯燥后放入鉻酸洗液中浸泡過夜。 3)取出后用自來水沖洗30分鐘。 4蒸餾水涮洗內壁3遍。 5枯燥備用。5其它： 具有傳染性的容器應先高壓再清洗。二判斷洗凈的標準： 洗凈的玻璃儀器管壁光潔、清亮，無污漬； 被水濕潤后，管壁呈現(xiàn)均勻水膜，無掛水珠。三枯燥方法 1、晾干：自然晾干。 2、烘干：放入烘箱烘干。普通儀器用80-100，容量分析儀器用37-40。 3、有機溶劑枯燥：體積小的容器急需枯燥時，可用此法。四洗滌劑的種類和配制方法：1、鉻酸洗液：配制：稱取10g工業(yè)純K2Cr2O7置于400ml燒杯中，加少量水溶解后

18、，慢慢參加200毫升粗硫酸工業(yè)純，邊加邊攪。配制好的溶液應呈深紅色。待溶液冷卻后轉入玻璃瓶中備用。注意： 1因濃硫酸易吸水，應用磨口塞子塞好。 2使用鉻酸洗液時應特別小心，注意平安。3使用洗液前，必須先將儀器用自來水和毛刷洗刷，空干水分。4用過的洗液不能隨意亂倒，應倒回原瓶，以備下次再用。5當洗液變綠而失效時，絕對不能倒入下水道，只能倒回廢液缸內，另行處理；6用洗液洗滌后的儀器，應先用自來水沖凈，再用蒸餾水潤洗內壁23次。2、濃鹽酸 :洗去水垢或某些無機鹽沉淀3、5%草酸溶液：洗去高錳酸鉀痕跡4、5%-10%磷酸三鈉溶液：洗滌有污物5、5%-10%乙二胺四乙酸二鈉：加熱煮沸可洗脫玻璃儀器內壁的

19、白色沉淀6、尿素洗滌液：洗滌蛋白質貧或血樣容器 七、常用實驗設備及其使用方法一天平1、天平的選擇 天平的種類有很多，根據所稱量目的物的不同或精細度不同，應選用不同的天平。 常用的天平： 托盤天平 電子天平 電光天平架盤藥物天平托盤天平電子天平電光分析天平扭力天平按精度分可分為兩類粗天平：感量十分之一0.1g 感量百分之一0.01g 粗天平主要用來稱取較多樣品或用于配制濃度要求不高的試劑稱量。分析天平： 感量 千分之一 0.001g 萬分之一0.1mg 十萬分之一0.01mg 分析天平那么用于基準物的稱量和配制標準溶液及少量樣品的稱量。2、托盤天平的使用1 零點調整：使用托盤天平前需使游碼放在刻

20、度尺的零處。托盤中未放物體時，如指針不在刻度零點，可用零點調節(jié)螺絲調節(jié)。 2稱量：稱量時，稱量物放在左盤，砝碼放在右盤。添加砝碼時應從大到小。在添加刻度標尺以內的質量時例如 10 g 或 5 g可移動標尺上的游碼，直至指針指示的位置與零點相符偏差不超過 1 格記下砝碼質量，此即稱量物的質量。注意： 稱量物不能直接放在天平盤上稱量，而應放在質量的紙或外表皿上。 潮濕的或具腐蝕性的藥品應放在玻璃容器內。 托盤天平不能稱熱的物質。 3稱量完畢：應把砝碼放回盒內，把游標尺的游碼移到刻度“0處，將托盤天平清掃干凈。 3、電子天平的使用 優(yōu)點：1稱量準確、操作簡單、便于使用。2)電子天平到達平衡時間短，使

21、稱量更加快速。電子天平一般均具有自動調零，自動校準，自動去皮和自動顯示稱量結果等功能。1電子天平使用方法 核實天平是否處于水平狀態(tài)； 開機預熱； 取稱量紙一張，對折前方天平稱量臺上； 按去皿鍵，使天平顯示值為0.00g； 輕輕叩打試劑瓶，徐徐倒入試劑； 取除過量的試劑棄掉； 關閉電源； 清理稱量臺及天平周圍。 2使用電子天平幾個本卷須知：天平應置于穩(wěn)定的工作臺上，防止振動、氣流及陽光照射。在使用前調整水平儀氣泡至中間位置。按說明書的要求進展預熱。稱量易揮發(fā)和具有腐蝕性的物品時，要盛放在密閉的容器中，以免腐蝕和損壞電子天平。操作天平不可過載使用以免損壞天平。如果電子天平出現(xiàn)故障應及時檢修，不可帶

22、“病工作。經常對電子天平進展自?；蚨ㄆ谕庑?，保證其處于最正確狀態(tài)。假設長期不用電子天平時應暫時收藏為好。 二分光光度計見第二章三離心機見第三章四恒溫箱 1、水浴恒溫箱 通過調節(jié)使箱內液體保持所需的溫度，將樣品放置其中維持溫度環(huán)境。相介質是水，故稱為“水浴箱。 水浴式恒溫箱多用于37，12小時保溫(如酶切反響等)，不適宜過夜等長時間連續(xù)使用 。 (二)空氣恒溫箱 箱內空氣的溫度可以調節(jié)，樣品放置在一定溫度的空氣中因溫度傳導介質為空氣。 樣品到達設定溫度所需時間較長，所以樣品需要短時間恒溫時，不宜使用此型恒溫箱。但因樣品的周圍為空氣，可用于需恒溫振搖的樣品。如大腸菌培養(yǎng)。(三)固相恒溫箱 嚴格地講

23、，應稱為恒溫臺，通常是用導熱性很好的金屬(如鋁)制成，臺上有不同直徑的孔穴，盛有樣品的試管可直接插入孔穴中，通過金屬塊向樣品傳導熱。 溫度調節(jié)所需時間很短，便于使用。但因臺上孔穴是固定的，故樣品試管應與其匹配。如稍有縫隙，可充填少量液狀石蠟，以增加孔穴內壁與樣品管壁的接觸。 五振搖器(shaker) 又稱為床式振搖器或搖床。 用途：充分混勻兩種或幾種試劑，或增加反響 分子間接觸時間。 分為：空氣搖床或水浴搖床。 振搖器的種類：1、旋轉式搖振器： 在水平面上旋轉振搖，多用于三角瓶內細菌培養(yǎng)臺時，其內樣品快速旋轉，從而被攪拌混勻。 2、水浴往復式搖振器：在水平面上往返振搖，多用于在試管內增菌或混勻

24、。 3、蹺板式振搖器： 如同蹺板兩側上下移動，多用于電泳凝膠的染色與脫色等。4、水平式振搖器： 板面做水平運動，主要用來混合液體或脫色。5、旋流振勻器： 由一強力小型馬達帶動橡膠制圓形平臺以600rmin的高速做很小半徑的旋轉運動，主要用來混勻小試管內的液體。六刻度吸管及微量移液器1、刻度吸管1作用：用于準確移取一定體積的溶液。2規(guī)格ml： 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、 5.0、10.0 3本卷須知：1使用前觀察吸管有無破損，污漬。2吸管的選擇：所用吸管的規(guī)格應等于或近似等于所要吸取的溶液體積。 3吸管的握法：拇指和中指夾住吸管，食指游離。4) 取液：將吸管垂直插入溶液 ，入液深度

25、適中。用洗耳球吸取溶液高于所需高度2-3cm ，用食指按緊吸管上口，將刻度吸管提離液面，觀察液內無氣泡，并用濾紙擦凈管壁。 5)放液至刻度：將刻度吸管垂直，眼睛與刻度線平行，輕輕松開食指轉動刻度吸管，使液面緩慢降低，直至最低點與刻度線相切。6)放液至容器：將刻度吸管垂直置于45傾斜的容器內壁上，使溶液自然流入容器，注意吹與不吹有“吹字，說明刻度到尖端，放液后需將尖端的溶液吹出，否那么不吹。 7)一根吸管只吸取一種試劑，用后立即浸入水中。 2、微量移液器(micro-pipetter) 實驗室中最常用的精細儀器之一。 根本構造和原理： 通過按動芯軸排出空氣，將前端安裝的吸頭置入液體試劑中，放松對

26、芯軸的按壓，靠內裝彈簧機械力，芯軸復原，形成負壓，吸引液體。 微量移液器的握法： 手掌握住器液器，拇指按壓。微量移液器的使用：1設定容量 ： 連續(xù)按壓數(shù)次，以調節(jié)空氣。 調節(jié)體積至所需的刻度。不允許超出額定范圍調整 接上Tip頭，注意密封。讀數(shù)顯示05555l100 l155l155200 l550l0551000 l個位十位2吸液:按下控制鈕至第一檔；將移液器吸嘴垂直進入液面下 1-6mm 視移液器容量大小而定；為使測量準確可將吸嘴預洗 3 次，即反復吸排液體 3 次。使控制鈕緩慢滑回原位；移液器移出液面前略等待 1-3 秒；緩慢取出吸嘴，確保吸嘴外壁無液體。 3排液 : Tip頭貼住容器內

27、壁 平穩(wěn)地把按鈕壓至第一停點，1秒鐘后再壓至第二停點 將剩余液體排凈；松開控制鈕； 然后按壓彈射鍵彈射出吸嘴。 按鈕起始位置 0第一停點位置 1 第二停點位置 2IIIIIIIV4養(yǎng)護：如液體不小心進入活塞室應及時去除污染物移液器使用完畢后，把移液器量程調至最上線，垂直放置在移液器架上；根據使用頻率所有的移液器應定期用肥皂水清洗或用 60 的異丙醇消毒，再用雙蒸水清洗并晾干；防止放在溫度較高處以防變形致漏液或不準；發(fā)現(xiàn)問題及時找專業(yè)人員處理。 5本卷須知：垂直吸液、慢吸慢放；選擇適宜的量程范圍，不能超過量程使用；選擇與移液器匹配的槍頭，安裝槍頭時不要用力太猛；移液器每日用完后，應旋到最大刻度。

28、當移液器吸嘴有液體時切勿將移液器水平或倒置放置，以防液體流入活塞室腐蝕移液器活塞；需要高溫消毒的移液器應首先查閱所使用的移液器是否適合高溫消毒后再行處理。七pH值的測定及pH計 1、 pH值的測定1pH試紙：簡便，但較粗略 廣泛pH試紙：變色范圍是pH=114、914 精細pH試紙 ：變色范圍pH=1.43.0、0.55.0、測定的方法：是將試紙條剪成小塊，用鑷子夾一小塊試紙，用玻璃棒蘸少許溶液與試紙接觸，試紙變色后與色階板對照，估讀出所測pH值。注意：切不可將試紙直接放入溶液中，以免污染樣品溶液。試紙要存放在有蓋的容器中，以免受到實驗室內各種氣體的污染 。2p H 計(pHion meter

29、) 。pH計的使用程序： 1、接通電源。 2、將玻璃電極從防止電極枯燥的保護液中提出。 3、用洗液瓶盛裝新制備的蒸餾水，反復沖洗電極，再用濾紙將殘留的水珠吸干。 在此過程中，手指一定不能觸摸電極的中下段(即測定pH值時浸入溶液的局部)，此外，手接觸過的濾紙局部也不能拭吸殘留水滴用。 4、將電極浸入pH一6.86(2 0)的標準液中校正，待指針穩(wěn)定后旋轉調節(jié)旋鈕，使其指示的刻度與標準液的pH值相符(6.86)。 5、取出電極用蒸餾水沖洗，同(3)。 6、再用酸性標準液(pH4.01)或堿性標準液(pH9.18)進展校正。 7、重復(4)(6)至少兩次，以保證校正準確。 8、將沖洗后并拭干的電極浸

30、泡液到待測溶液中。 9、如需調整溶液至所需要的pH值，應加攪拌子在攪拌狀態(tài)下緩慢進展。 10、測定完畢，充分沖洗電極，拭吸干后，浸泡到防止電極枯燥的蒸餾水中。 本卷須知： 經常檢查電極內的4mol/L KCl溶液的液面，如液面過低那么應補充4mol/L KCl溶液。玻璃泡極易破碎，使用時必須極為小心。復合電極長期不用，可浸泡在2mol/L KCl溶液中，平時可浸泡在無離子水或緩沖溶液中，使用時取出，用洗并沖洗玻璃泡局部，然后用吸水紙吸干余水，將電極浸入待測溶液中，稍加攪拌，讀數(shù)時電極應靜止不動，以免數(shù)字跳動不穩(wěn)定。 使用時復合電極的玻璃泡和半透膜小孔要浸入到溶液中。使用前要用標準緩沖液校正電極

31、。電極的玻璃泡容易被污染。假設測定濃蛋白質溶液的pH值時，玻璃泡外表會覆蓋一層蛋白質膜，不易洗凈而干擾測定，此時可用0.1mol/L HCl 的1mg/mL胃蛋白酶溶液浸泡過夜。假設被油脂污染，可用丙酮浸泡。假設電極保存時間過長，校正數(shù)值不準時，可將電極放入2mol/L KCl 溶液中，40加熱一小時以上，進展電極活化。 八實驗室用純水生化實驗常用水：二次蒸餾水和無離子水。超純分析和特殊的生化實驗： 1518 M-cm高純無離子水 無熱源高純水 無菌水 亞沸蒸餾水 無二氧化碳蒸餾水等。 實驗用水的制備 1、離子交換法 通過離子交換樹脂使水中的離子化合物被吸附而使水純化。 2、蒸餾法 蒸餾法主要

32、是利用水在沸點(100)時變成蒸汽，遇冷時又重新凝結成液體水，水中不能被蒸發(fā)的物質殘留下來而被去除。通過幾次反復操作，那么可以得到高純度的純潔水， 3、超純法 超純法指通過數(shù)次高性能的離子交換樹脂處理后再經過微孔濾膜過濾，所得到的水的電導率可達1 8Mcm3，與理論純水的18.3 Mcm3很接近，故稱為超純水。 可用于分子克隆、DNA測序、細胞培養(yǎng)等各種精細實驗。 實驗工作中不應盲目追求水的純度，水的價格隨水質的提高而成倍地增長，因此要根據實際工作的需要，即所用水中應排除的干擾物質的類型，來選用水的種類，如：無離子水、普通蒸餾水、二次蒸餾水、亞沸蒸餾水及按特殊要求制備的高純水等。 所有的各種純

33、水，在貯存中都會被污染：塑料容器會產生有紫外吸收的有機物；玻璃和金屬容器會產生金屬離子的污染；長時間放置更會使水長菌，空氣中的二氧化碳會溶入水中，所以貯存高純水一定要隔絕空氣，密封蓋嚴，必要時貯存在冰箱的冷藏室中。 九消毒系統(tǒng) 生化實驗要進展生物培養(yǎng)和生物反響的操作，這些操作都必須排除其他生物因素的干擾，因此在做這些實驗之前，都必須對實驗中用到的、可能造成污染的材料、器械等進展消毒滅菌處理。 消毒滅菌的方法: 高熱高壓消毒(濕熱消毒) 干熱消毒 濾器濾膜除菌 紫外線照射 化學滅菌 火焰燃燒1、高壓高溫滅菌 高壓高溫滅菌也稱濕熱滅菌，通常是利用高壓滅菌鍋來完成，使用范圍廣，為一種最常用的滅菌方法

34、。 注意: 1、多數(shù)塑料制器具或不宜超過200的物品應選用其他滅菌方法(如干熱滅菌)。 2、液體試劑雖可用此方法滅菌，但因水蒸氣遇冷會形成水珠，故滅菌后需再次枯燥。 2、干熱滅菌 干熱滅菌通常是在溫度可達200以上的干熱消毒烤箱中進展。適用：玻璃器皿、金屬器皿及耐熱的樹脂類制品。滅菌的溫度和時間： 一般160，2小時即可到達滅菌效果。3、濾膜滅菌 適用：酶、血清及培養(yǎng)液1、Zeiss濾器滅菌2、一次性濾器配合一定孔徑的濾膜進展過濾滅菌。材料：樹脂 規(guī)格：數(shù)十毫升到數(shù)百毫升 0.22m孔徑濾膜過濾即可到達除菌滅菌目的。一次性濾器和濾膜均為滅菌包裝，使用方便，且滅菌效果可靠。 4、化學消毒法包括：1苯扎溴銨(新潔爾滅) 70乙醇 0.1% SDS 0.5過氧乙酸適用：無法用其他方法消毒的物品，如操作臺、實驗者的手臂皮膚。方法：擦拭5、紫外線滅菌優(yōu)點：紫外線直接照射滅菌法方便、效果好適用