農(nóng)作物組織培養(yǎng)ppt課件

1、第八章 主要農(nóng)作物的組織培育 以有性雜交為作為指點進展育種，這種方法局限性很大，而且周期長植物組織培育已廣泛運用于植物育種，在單倍體育種、胚培育、體細胞雜交、細胞突變體挑選、遺傳轉(zhuǎn)化等方面離體無性系的快速繁衍培育無病毒種苗 新種類的選育人工種子和種質(zhì)的保管。第一節(jié) 農(nóng)作物組織培育的意義、方法與運用 對繁衍系數(shù)低的“名、優(yōu)、新、奇、特植物種類的推行，蘭花、安祖花、馬蹄蓮、甘薯、草莓、香蕉、甘蔗、桉樹、非洲菊等經(jīng)濟植物已開場工廠化消費植物脫毒苗木培育 脫毒后的馬鈴薯、甘薯、甘蔗、香蕉等植物可大幅度提高產(chǎn)量，改善質(zhì)量，蘭花、水仙、大麗花等欣賞植物脫毒后植株生長勢強，花朵變大，產(chǎn)花量上升，色澤艷麗植物

2、新種類培育 基因工程育種抗蟲棉、抗除草劑大豆、玉米，單倍體育種-煙草單育1號、水稻“中花8號、小麥“京花1號，遠緣雜交幼胚早期培育，原生質(zhì)體交融技術(shù)，選擇細胞突變體植物種質(zhì)資源的離體保管 超低溫離體保管植物種質(zhì)，可節(jié)約大量的人力、物力和土地，還可挽救那些瀕危物種 人工種子 為某些珍稀物種的繁衍以及轉(zhuǎn)基因植物、自交不親和植物、遠緣雜種的繁衍提供有效的手段第二節(jié)棉花組織培育一、大量元素20倍母液 (g/L)藥品摩爾濃度（M/L）質(zhì)量濃度（g/L）5L母液所需質(zhì)量（g）備注KNO30.3838190MgSO40.033.8/7.4(MgSO47H2O)19/37KH2PO40.0253.417CaC

3、l20.066.6/8.8(CaCl22 H2O)33/44單獨溶解，最后加入二、微量元素100倍母液 (g/L)藥品質(zhì)量濃度(g/L)備注5倍母液H3BO33.1加熱助溶MnSO44H2O（或MnSO4H2O）11.15（或8.45）ZnSO47H2O4.320倍母液CoCl26H2O0.05CuSO45H2O0.05單獨溶解，最后加入KI1.66NaMO42H2O0.5微量元素二級母液即我們平常配培育基時運用的微量：取上述母液200ml，母液50ml，加蒸餾水定容至1L。鐵鹽母液配制所用試劑均為國藥產(chǎn)品B5有機物配制 所用試劑均為sigma產(chǎn)品藥品摩爾濃度（M/L）質(zhì)量濃度（g/L）備注F

4、eSO47H2O0.012.78Na2EDTA0.013.73加熱助溶藥品100ml所需質(zhì)量（g）500ml所需質(zhì)量（g）備注VB1（硫胺素）15VB6（鹽酸吡哆醇）0.10.5NaOH助溶VB3（煙酸）0.10.5NaOH助溶加入VB6和VB1后加部分水，再加入VB3，再次加水，容量瓶定容各種激素配制所用試劑均為sigma產(chǎn)品質(zhì)量濃度（g/L）備注2,4-D0.1無水乙醇助溶6-BA1NAA1L-Gly（甘氨酸）2國藥產(chǎn)品肌醇10IAA0.5IBA0.5NaOH助溶KT0.5NaOH助溶/鹽酸助溶*NH4NO3165國藥產(chǎn)品愈傷組織的誘導(dǎo) 0.5-1cm的下胚軸切段接種于誘導(dǎo)培育基上，一個皿

5、放25-30段下胚軸。一個月后挑選兩端膨大，生長正常的下胚軸繼代到新的IBA培育基上非胚性愈傷組織的增殖 由于愈傷組織的進一步膨大，一個皿中以20段下胚軸為宜愈傷組織的分化 愈傷組織經(jīng)繼代一個月繼代一次幾次后，有的愈傷組織轉(zhuǎn)成米粒狀顆粒，將其轉(zhuǎn)入分化培育基上，進一步分化成胚狀體成苗生根培育 將分化出的小苗繼代到1/2MS培育基中成苗生長培育基上煉苗移栽 將生根良好的小苗揭開三角瓶封口膜，煉苗2-3天，然后移栽到小土缽中，遮蔭緩苗一周左右移栽大田棉花下胚軸組織培育過程棉花下胚軸誘導(dǎo)愈傷過程中胚性愈傷組織的腺體處發(fā)生和外發(fā)生A1：下胚軸外植體；A2-A4：胚性愈傷組織在腺體處發(fā)生；B1：愈傷組織外

6、表的胚性細胞；B2-B4：愈傷組織外表構(gòu)成胚性組織棉花體細胞胚的單細胞來源和外表發(fā)生A：單細胞原胚、二細胞原胚和四細胞原胚(箭頭所指)；B：具胚柄的多細胞原胚(箭頭所指)；C：具胚柄的體胚；D-G：與愈傷組織粘連的體胚；H-I：游離的體胚棉花單個胚性細胞團培育中體細胞胚的發(fā)生和發(fā)育A：培育當(dāng)天；B1-B2：培育7 d；C1-C3：培育14 d；D1-D3：培育21 d后出現(xiàn)球形胚；E1-E3：心形胚階段；F1-F3：魚雷形胚階段；G1-G3：子葉胚階段棉花體細胞胚發(fā)育過程中的極性建立和組織分化A：球形胚表皮原構(gòu)成； B：球形胚內(nèi)層細胞分裂構(gòu)成根底和維管組織；C：內(nèi)部等軸細胞軸向延伸構(gòu)成的心形胚

7、；D-E：極性的逐漸建立和原構(gòu)成細胞層的分化；F-G：具有清楚的前構(gòu)成細胞層和極性的魚雷形胚；H：具有子葉原基，芽頂端分生組織、前構(gòu)成層和根頂端分生組織的魚雷形胚；I：具有Y形微管組織的子葉胚棉花單個胚性細胞團培育中不同發(fā)育階段的體細胞胚A1-A6：球形胚；B1-B6：心形胚；C1-C6：魚雷形胚；D1-D6：子葉胚第三節(jié) 水稻花藥和花粉培育目錄研討進展研討過程研討意義前景展望一 研討進展1.水稻單倍體獲得途徑 花藥培育、花粉培育 胚珠或子房培育未受精概念： 單倍體育種：經(jīng)過花藥、花粉培育獲得單倍體，然后進展染色體加倍，經(jīng)過選擇、鑒定選育出新種類的途徑。 花藥培育：是將花粉發(fā)育至一定階段的花藥

8、接種到人工培育基上進展培育，以構(gòu)成花粉胚或愈傷組織進而分化成植株的技術(shù)。 花粉培育：是將花粉從花藥中分別出來,接種到人工培育基上進展培育，以構(gòu)成花粉胚或愈傷組織進而分化成植株的過程。水稻花培歷史： 1968年，日本人新關(guān)和大野初次經(jīng)過水稻花藥培育獲得單倍體植株； 1970年，我國正式開展水稻花藥培育技術(shù)研討，并獲得良好進展； 截至目前，已有多個種類經(jīng)過花培途徑獲得。代表成果：天津農(nóng)科院選育的花育“花育1號、“花育2號；中國農(nóng)科院選育的中花系列；黑龍江農(nóng)科院水稻所選育的龍粳系列種類。截至目前，經(jīng)過花培選育出了很多粳稻種類并大面積的推行運用。1975-1998共審定26個種類。秈稻花藥培育難度較大

9、。至20世紀(jì)末，共有5個種類經(jīng)過花培選育。二 研討過程1.培育流程2.培育方法3.影響要素4.檢測方法1.培育流程花藥和花粉培育根本流程：預(yù)處置花藥物理或生理逆境搜集具胚性小孢子的花藥，或離心搜集胚性小孢子培育充足的營養(yǎng)、適宜的溫光、或條件培育構(gòu)成胚狀體胚狀體轉(zhuǎn)移至固化培育基上萌生構(gòu)成小植株。選擇適宜的供體植株倍性鑒定或染色體加倍2.培育方法花藥培育 1、取材 鏡檢，根據(jù)花粉的發(fā)育時期，選取大小適宜的花蕾。 2、消毒 70酒精擦洗花蕾外表，或70酒精浸泡30-60s后在1次氯酸鈉溶液中浸泡10-20min或在0.1的氯化汞溶液中消毒3-10min，無菌水沖洗3-5次。 3、培育 固體或液體培育

10、基均可。先進展脫分化培育，至小孢子大量分裂構(gòu)成胚或愈傷，并突破花藥壁外表，構(gòu)成突出物2-3周；后轉(zhuǎn)入分化培育基培育，構(gòu)成小植株。水稻花藥培育由接種至長出愈傷圖花粉培育 與花藥不同，花粉培育需進展花粉的分別與純化及特殊的花粉誘導(dǎo)培育。分別和純化方法1、自然散落法(漂浮培育散落小孢子搜集法) 將花藥接種在預(yù)處置液或液體培育基上，待花粉自動散落后，搜集培育。2、擠壓法 在燒杯或研缽中擠壓花藥，將花粉擠出后搜集培育。3、機械游離 1磁攪拌法 用磁力攪拌器攪拌培育液中的花藥，使花粉游離出來； 2超速旋切法 經(jīng)過攪拌器中的高速旋轉(zhuǎn)刀具破碎花蕾、穗子、花藥，使小孢子游離出來此法運用最廣。4、小孢子純化 對上

11、述方法獲得的小孢子混合物進展分級過篩、梯度離心處置純化小孢子小孢子梯度離心前后比較 梯度離心前小孢子形狀、活力不一致 30%蔗糖梯度離心后獲得均一的小孢子群體花粉培育方式1、平板培育 花粉置瓊脂固化培育基上培育。2、液體培育 花粉懸浮在液體培育基中培育，需震蕩，以利通氣。3、雙層培育 花粉置固體-液體雙層培育基上培育。培育基制造方法：先鋪一層瓊脂固體培育基，凝固后，在外表參與少量液體培育基。 4、看護培育 利用花藥或花藥愈傷組織釋放出的活性物質(zhì)促進花粉小孢子發(fā)育。5、微室培育 利用小的蓋玻片和凹穴載玻片構(gòu)成微室進展花粉培育6、條件培育基培育 利用培育過花藥的液體培育基或含失活花藥提取物的培育基

12、上培育?；ㄋ帡l件培育基、子房條件培育等。3.影響要素1基因型 植物基因型是影響雄核發(fā)育的最重要的要素之一。同一物種中的不同基因型對小孢子離體誘導(dǎo)反響差別較大。 如在水稻中，秈稻花粉培育力遠低于糯稻，且在同一亞種范圍內(nèi)，不同種類間也存在很大差別。2培育基和激素配比選擇 運用于水稻花培的根本培育基種類較多， 如N6、 馬鈴薯培育基、 L8、 SK3、 土豆培育基、Miller、 合5、 通用、 LS、 White、 MS、 M8和改良M8等。同一資料用不同的培育基培育， 表現(xiàn)出不同的花培效果。 培育基 三明市農(nóng)科所生物技術(shù)中心以M8、 N6和NB培育基， 進展了不同水稻種類資料花培察看比較實驗，

13、結(jié)果從出愈率、 綠苗分化率兩者比較， 還是M8 培育基較適宜。 馮雙華等用M8、 合5和改良M8做根本培育基， 以秈型雜交稻兩優(yōu)培九、 培兩優(yōu)288、 P88S/0293為資料， 得出改良M8培育基表現(xiàn)出對不同的基因型資料有較廣的順應(yīng)性和較強的綠苗誘導(dǎo)作用。激素配比 生長素類普通有2,4-D、 NAA、 IAA等， 細胞分裂素普通有6-BA、 KT等。運用傾向：復(fù)合激素 馮雙華等提出秈型資料用1.5 mg/L 2,4-D+1.5 mg/LNAA誘導(dǎo)效果較好， 2.0 mg/L 6-BA+0.25 mg/L NAA+0.25 mg/L IAA分化效果較好。 郭書巧等提出對秈粳交資料2 mg/L

14、2,4-D+1 mg/L NAA+0.2 mg/L KT為最正確的激素誘導(dǎo)配比， 2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT分化效果較好。 結(jié)論：基因型不同，最適激素配比不同。普通以為，對秈型水稻采用復(fù)合激素較好。3田間取樣與預(yù)處置 取樣時間：晴天8:0010:00， 或16:0018:00 取穗規(guī)范： 穗苞大而不破，劍葉與下一葉的 葉枕距為510 cm為宜 低溫處置：普通以為58度條件下， 低溫預(yù)處置810d較好 此外，還有其它處置方法：化學(xué)物質(zhì)、射線、離心等。4培育條件 溫度、光照、密度4.檢測方法1、染色體直接計數(shù)法 通常取根尖、莖尖等分生組織區(qū)進展制片，直接計數(shù)染色體數(shù)目。2、

15、間接鑒定1掃描細胞光度儀鑒定流式細胞儀 主要測定葉片單個細胞中DNA的含量確定細胞的倍性，資料的運用量可少到1cm2。2細胞形狀學(xué)鑒定法 葉片捍衛(wèi)細胞大小、單位面積上的氣孔數(shù)及捍衛(wèi)細胞中葉綠體的大小和數(shù)目與倍性具有高度的相關(guān)性。3植株形狀學(xué)鑒定法 單倍體植株瘦弱，葉片窄小，花小柱頭長，花粉粒小，不結(jié)實。4雜交鑒定法 自交或測交鑒定，看后代分別情況確定二倍體植株是來自小孢子還是體細胞。5分子標(biāo)志鑒定包括生化標(biāo)志好像工酶標(biāo)志和分子標(biāo)志如RFLP、RAPD、AFLP等三.研討意義 1.縮短育種周期：常規(guī)育種需4-6年獲得純系，而花培僅需一年。供體植株小孢子n花培花粉植株n雄核發(fā)育自然加倍人工加倍純合

16、植株DH2n一年內(nèi)獲得純系2.提高了目的基因型的選擇效率例子： 二倍體供體植株基因型為AaBb，假設(shè)要從后代中選擇基由于AAbb的純合單株 常規(guī)方法： AAbb出現(xiàn)的概率為1/16，并且不能將AAbb與Aabb、aAbb區(qū)分開。ABaBAbabABAABBAaBBAABbAaBbaBaABBaaBBaABbaaBbAbAabBAabBAAbbAabbabaAbBaabBaAbbaabb2.提高了目的基因型的選擇效率例子： 二倍體供體植株基因型為AaBb，假設(shè)要從后代中選擇基由于AAbb的純合單株 單倍體方法： AAbb出現(xiàn)的概率為1/4。 單倍體 二倍體AB- - AABBaB- aaBBAb

17、- AAbbab- - aabb供體親本AaBb花培3.有利于隱性基因控制性狀的選擇4.與生物工程技術(shù)結(jié)合，對育種學(xué)及遺傳根底研討都有很重要的意義。四.前景展望1.供體植物生長條件的進一步提高和離體培育方法的改良，有能夠最終消除或大大減少花培藥養(yǎng)基因型的限制。2.花藥或小孢子培育體系做為基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的靶組織，可以實現(xiàn)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化，外源基因在后代中不易喪失或發(fā)生致命的突變，是很有出路的研討領(lǐng)域。 1999，美國洛克菲勒基金會的Toneeson在Science 撰文指出，現(xiàn)代生物技術(shù)育種的兩大支柱是基因工程育種和與分子標(biāo)志相結(jié)合的加倍單倍體育種DH育種，后者效率高，本錢低，特別適宜于開展中國家的國情。第

18、四節(jié) 玉米組織培育主要內(nèi)容：植物組織培育的意義. 玉米組織培育的目的. 研討進展.目前玉米組織培育的主要方法. 植物組織培育的意義植物組織培育可以消費大量的優(yōu)良無性系. 細胞交融可突破種屬間的界限，抑制遠緣雜交不親和性妨礙. 可獲得單倍體、三倍體及其它多倍體、非整倍體.組織培育的植物細胞也成為在細胞程度上分析研討的理想資料.玉米組織培育的目的玉米組織培育的目的是讓外植體可以高頻率地誘導(dǎo)出愈傷組織，建立高效 的體細胞再生體系 ，為玉米遺傳轉(zhuǎn)化和細胞工程研討發(fā)明有利條件 。玉米組織培育的研討回想Larue在 1949年用甜玉米的胚乳作外植體，初次誘出玉米愈傷組織，但未獲得再生植株 。1975年，G

19、reen和Phillips初次用A188的幼胚作外植體，誘導(dǎo)出二倍 體 愈傷組織 ，并再生得 到第一株無性系植株。玉米組織培育的研討現(xiàn)狀如今曾經(jīng)能從多種外植體中誘導(dǎo)出愈傷組織，并再生出植株。例如：幼胚、花 藥、幼穗等，其中幼胚是最易誘導(dǎo)，也是目前最常用的外植體。玉米組織培育的主要方法簡介1、玉米花粉和花藥組織培育 玉米花粉和花藥的培育普通可獲取單倍體植物，有利于促進玉米遺傳育種任務(wù)的有效進展。2、 玉米莖尖和根尖離體培育 玉米植株的根尖和莖尖分生組織具有良好的分化性能。玉米莖尖和根尖離體培育有利于促進完好玉米植株的生長,并且在取材上不受季節(jié)限制。3、玉米幼胚的組織培育 玉米幼胚屬于二倍體， 且

20、分生才干較強。幼胚是最易誘導(dǎo)， 也是目前最常用的外植體， 但幼胚取材的時間遭到嚴(yán)厲的季節(jié)限制。玉米幼胚組織培育的全過程1、預(yù)備任務(wù)接種室消毒預(yù)備誘導(dǎo)培育基N6+肌醇+L-脯氨酸1.38g/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L+水解酪蛋白0.5g/L+2,4-D2mg/mL)滅菌2、外體消毒及挑幼胚 75%酒精擦玉米外層葉片 至超凈任務(wù)臺，用75%酒精擦玉米外層葉片，剝一層擦一層至完 用刀去掉1/3玉米籽粒 挑幼胚 接種到預(yù)備好的誘導(dǎo)培育基上暗培育3、繼代 預(yù)備繼代培育基(N6+水解酪蛋白0.1g/L+L-脯氨酸0.69g/L+甘露醇20g/L+蔗糖30g/L+瓊脂6.5g/L+2,4-D1mg/m

21、l)誘導(dǎo)兩次后，轉(zhuǎn)入繼代培育基每7天繼代一次，直至出透明、黃色、鞏固的愈傷組織，可用于轉(zhuǎn)化普通繼代三次4、轉(zhuǎn)化侵染培育22-25，暗培育3天恢復(fù)培育暗培育3天挑選培育分化培育生根培育壯苗5、移栽及管理移栽前，應(yīng)對移栽用的基質(zhì)進展滅菌。移栽前，可將培育物不開口移到自然 光照下鍛煉2-3天，然后再開口練苗1-2天，以順應(yīng)未來自然濕度的條件。玉米組培苗移栽時首先應(yīng)把根部的培育基清洗干凈，以免受細菌或真菌污染而影響幼苗生長。移栽玉米莖尖組織培育的全過程1、預(yù)備任務(wù)接種室消毒預(yù)備培育基MS+蔗糖30g/L+瓊脂6.5g/L)滅菌1、玉米種子消毒在500ml三角瓶中裝入200300粒玉米種子用75%酒精清

22、洗8min0.1%升汞5min無菌水洗2遍參與無菌水靜置8h0.1%升汞8min無菌水洗5遍裝入鈑盒28暗培育3天2、接種 取出培育三天后的種子，接種到MS固體培育基中，根向下伸入培育基中，芽向上，芽萌生得不太好的繼續(xù)放進飯盒中再培育。接種到MS固體培育基中的芽放回28暗培育3-4天。3、玉米莖尖轉(zhuǎn)化取出MS固體培育基中的芽放在無菌濾紙上切根鑷子夾胚軸，在莖尖處用刀尖切半邊。在莖尖生長點劃一小口。轉(zhuǎn)化后，接種于MS培育基中，進展暗培育。3、移栽及其管理 培育35天后，將其移栽至至花盆中，其 中本卷須知與前面的一樣。后期的管理也于前者相近。 濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院第五節(jié) 馬鈴薯的脫毒培育目的要求

23、: (1)掌握馬鈴薯脫毒培育的大致過程，了解馬鈴薯脫毒苗的鑒定方法; (2)掌握馬鈴薯的生物學(xué)習(xí)性： (3)熟習(xí)微型薯的消費過程濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院微型薯濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院 馬鈴薯是一種全球性的重要經(jīng)濟作物。順應(yīng)性廣，營養(yǎng)價值高，耐貯藏適運輸，既是一種重要的糧食作物也是一種調(diào)理市場供應(yīng)的重要蔬菜。馬鈴薯原產(chǎn)于拉丁美洲，當(dāng)被發(fā)現(xiàn)可以食用后，很快傳到世界各地，成為栽培很廣的一種作物。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院但是，當(dāng)發(fā)現(xiàn)從外地引種栽培12個周期后，明顯發(fā)現(xiàn)產(chǎn)量降低，植株變矮，并有卷葉的景象產(chǎn)生，經(jīng)檢測證明這是由于病毒引起的退化景象。 濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院 危害馬鈴薯的病毒

24、有17種之多，如X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A病毒、花葉病毒、紡錘形塊莖病毒等。由于馬鈴薯是無性繁衍作物，病毒逐代積累，日益嚴(yán)重，引起嚴(yán)重退化。馬鈴薯病毒可使塊莖產(chǎn)量減少50%80%。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院法國Morel和他的同事們，1955年從患病馬鈴薯植株中選取到了無病植株，為治療作物病毒開辟了新途徑。 濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院一、特性和生物學(xué)習(xí)性1、馬鈴薯的形狀特性根 馬鈴薯的根系由初生根和匍匐根兩部分組成。莖 馬鈴薯分地上部分和地下部分，地上主莖在構(gòu)成16片葉子后，由花芽封頂，并在花的下部發(fā)生兩個側(cè)枝，從而構(gòu)成馬鈴薯的主要同化系統(tǒng)。地下莖包括主莖的地下部分、匍匐莖和塊莖。濱 州 職

25、業(yè) 學(xué) 院3葉 馬鈴薯先出土的葉是初生葉，全緣，心臟形。以后發(fā)生的葉奇數(shù)羽狀全裂單葉，在葉柄基部與主莖相連處著生有托葉。4花 馬鈴薯的花為聚傘花序，第一或第二花序開放，恰是塊莖強盛膨大之時，此時是需求不斷澆水的形狀標(biāo)志。 (5) 果實、種子 馬鈴薯果實為球形或橢圓形漿果。種子小。扁平腎形。種子可用來繁衍，但后代性狀分別大。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院2、 生物學(xué)習(xí)性馬鈴薯性喜冷氣候，不耐高溫暖霜凍，解除休眠的塊莖4下發(fā)芽，發(fā)芽適溫為1218。地上莖葉生長溫度為1721，25以上時生長不良，葉變小，超越30和7以下莖葉停頓生長，-1時受凍。塊莖構(gòu)成要求晝溫1424，夜溫1214，土溫1618。土溫20

26、以上時塊莖構(gòu)成緩慢，而且容易引起退化，高溫下營養(yǎng)多用于芽和匍匐莖生長不易構(gòu)成塊莖，2530時曾經(jīng)長成的塊莖也變成細長莖，結(jié)薯期要求12h左右的短日照和疏松、潮濕、肥沃以及通氣良好的土壤條件。土壤板結(jié)，薯塊外表粗糙和薯形不整。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院馬鈴薯消費中普遍存在有種性退化問題，表現(xiàn)為植株長勢衰弱，株形矮化，分枝變少，薯塊變小，產(chǎn)量逐降低，呵斥退化的緣由和學(xué)說多種，綜合而言，主要是薯塊生長錐細胞發(fā)生階段性衰老而導(dǎo)致種性退化，而病毒和細菌病害的侵染，以及肥水、營養(yǎng)條件不良等都會加劇其退化程度。 濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院二、馬鈴薯脫毒技術(shù)馬鈴薯在營養(yǎng)繁衍時易受病毒的浸染，當(dāng)條件適宜時，病毒就會在植

27、株內(nèi)增殖，轉(zhuǎn)運和積累，隨著世代傳送，病毒危害逐年加重，普通可呵斥減產(chǎn)50以上。研討發(fā)現(xiàn)，有30多種病毒易感染馬鈴薯，并引起種類退化，嚴(yán)重影響馬鈴薯的消費。經(jīng)過微莖尖組織培育技術(shù)能從馬鈴薯體內(nèi)脫除PLRV、PVY、PVA、PAF、PVG、PVM、PSW等病毒。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院因此，采用組織培育技術(shù)，經(jīng)過一定良種繁衍體系，消費優(yōu)質(zhì)種薯，是保證馬鈴薯高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)的一項有效措施。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院全國現(xiàn)有馬鈴薯播種面積300多萬公頃，且有逐漸添加的趨勢，每年需合格種薯45億公斤，脫毒原種4億公斤，脫毒小薯或微型薯45億粒。因此，脫毒馬鈴薯推行具有寬廣的市場前景，對于添加農(nóng)民收入和開展馬鈴薯產(chǎn)業(yè)

28、化消費具有非常重要的意義。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院我國的馬鈴薯平均單產(chǎn)僅為13.60噸/公頃，是世界單產(chǎn)最高國這瑞士48.80噸/公頃的1/4。呵斥如此大的差別，最主要的要素就是種薯質(zhì)量差，種類規(guī)劃不合理。采用脫毒快繁技術(shù)，種用脫毒種薯，普通可增產(chǎn)30-50%，甚至成倍增產(chǎn)，充分發(fā)揚種類的潛能，提高馬鈴薯消費才干。假設(shè)我國現(xiàn)有馬鈴薯播種面積的1/3即114萬公頃用脫毒種薯，就可年增產(chǎn)糧食100多億公斤。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院我國在70年代用莖尖組織培育方法得到脫毒馬鈴薯試管苗，并勝利地獲得脫毒復(fù)壯的馬鈴薯，開場了脫毒種薯的消費和推行。八五期間，農(nóng)業(yè)部在全國范圍內(nèi)設(shè)立了6個馬鈴薯原原種基地建立和種

29、薯消費工程，初步構(gòu)成了脫毒草種薯消費體系。共推行脫毒種薯36.5-40萬公頃，獲經(jīng)濟效益近30.8億元。 濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院我國已有許多科研、推行單位開展了脫毒馬鈴薯的研討和消費，在消費上產(chǎn)生了一定的經(jīng)濟效益和增產(chǎn)效果，但由于長期以來各自為政，技術(shù)方法和脫毒規(guī)范不盡一致，未能發(fā)揚出脫毒種薯應(yīng)有的增產(chǎn)潛力。到目前為止，我國仍未建立國家級的脫毒種薯質(zhì)量監(jiān)視和病毒檢測制度。 濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院1脫毒種薯消費程序采用微莖尖組織培育的方法，誘導(dǎo)出苗，采用聯(lián)免疫吸附實驗法或指示植物方法鑒定馬鈴薯病毒和類病毒，經(jīng)鑒定后，無主要病毒及類病毒的試管苗可定為脫毒試管根底苗。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院試管根底苗

30、在無菌條件下，采用固體、液體培育基相結(jié)合的方法，進展擴繁根底苗，在防蟲網(wǎng)室栽植或封鎖溫室扦插，消費出原原種或稱脫毒小薯。用原原種在一定隔離條件下產(chǎn)生原種1代，以后逐級稱為原種2代、良種1代、良種2代。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院2莖尖培育脫毒1 取材和培育普通多采用在室內(nèi)發(fā)芽，芽經(jīng)熱處置382周。然后取頂芽或側(cè)芽1厘米的莖尖，在自來水下沖洗干凈，無菌條件下先用70的酒精浸潤組織15-20秒，再用2的次氯酸鈉溶液浸泡4-5min，然后用無菌水沖洗3次。 濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院把消毒好的芽放在解剖鏡下仔細剝離，逐層剝?nèi)ビ兹~，顯露圓滑的生長點，可以留1-2個葉原基，0.20.3毫米，

31、隨即接種于MS液體培育基上，每升加0.1mgNAA 、 0.2mgGA3、0.5mgBA，2%蔗糖，p H值5.8。培育條件：2125、2000-3000 lx、12h/d。2-3周愈傷，4-5周綠點，3-6月長成2-3厘米小芽，越慢越好，出芽很快的扔掉。2 繼代和生根培育勝利的馬鈴薯脫毒苗，經(jīng)ELISA試劑盒鑒定后試管苗應(yīng)每3月檢測一次，每年4次鑒定后，采用固體、液體培育基相結(jié)合方法擴繁。取試管苗單節(jié)切段扦插在或平放固體培育基上，每瓶可插20個左右莖段，經(jīng)20d左右發(fā)育成510cm高小植株，繼續(xù)進展切段繁衍，此法速度快，每月可繁衍58倍，試管苗多接種在液體培育基上，進展淺層靜止液體培育。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院培育基：MS+NAA0.2-0.5+D-泛酸鈣10，3%蔗糖，20-25度，3000-4000LX，14-16小光陰照，每3周繼代一次，單芽莖段約1厘米，可插也可平放，原那么試管苗用2年3年。 濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院(