實(shí)驗(yàn)三紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測定及白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)上課用

1、 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測定及白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)精選ppt紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（一）原理用等滲稀釋液將血液稀釋并充入計(jì)數(shù)池后，于顯微鏡下計(jì)數(shù)。（二）試劑與器材Hayem液（氯化高汞、氯化鈉、結(jié)晶硫酸鈉）血細(xì)胞計(jì)數(shù)板精選ppt（三）操作 2ml稀釋液+10ul血液，洗滌，振蕩，混勻，充池，高倍鏡計(jì)數(shù)中央大方格周圍四個(gè)及中央五個(gè)中方格內(nèi)細(xì)胞總數(shù)。精選ppt精選ppt（四）計(jì)算細(xì)胞數(shù)/525 10 200 106 =細(xì)胞數(shù)/100 1012/L（五）質(zhì)量保證1.取血部位不當(dāng); 2.稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)3.血液凝固; 4.混合不均勻，充液不當(dāng)5.白細(xì)胞的影響6.血漿自身凝集素或球蛋白過高，紅細(xì)胞易聚集。精選ppt（六）臨床意

2、義1、增多（1）相對(duì)性增多（2）絕對(duì)性增多（3）真性紅細(xì)胞增多癥2、減少（1）造血物質(zhì)減少 （2）紅細(xì)胞破壞過多（3）紅細(xì)胞丟失過多（4）骨髓造血功能衰竭3、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定的關(guān)系精選ppt二、血紅蛋白測定（HiCN法）（一）原理血細(xì)胞經(jīng)血紅蛋白轉(zhuǎn)化液溶血后，除SHb外，其他血紅蛋白均被高鐵氰化鉀氧化成Hi，與CN結(jié)合生成穩(wěn)定的氰化高鐵血紅蛋白。它的最大吸收峰在540nm，測定A，得血紅蛋白濃度。（二）試劑、器材文齊氏液、721分光光度計(jì)精選ppt（三）操作5ml血紅蛋白轉(zhuǎn)化液+20ul血液，振蕩，混勻，5min后721分光光度計(jì)上測定。波長540nm。轉(zhuǎn)化液調(diào)零，1cm比色杯。精選p

3、pt（四）結(jié)果報(bào)告1. A/44 /1 64458/1000 251=A 367.7（g/L）2.標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定參考標(biāo)準(zhǔn)品的A值，以Hb濃度為橫坐標(biāo)，A值為縱坐標(biāo)，繪制通過零點(diǎn)的曲線，查表。3. K值法: K=Hb總和 /A值總和 Hb濃度= A K精選ppt（五）質(zhì)量保證1.丙球蛋白異常，白細(xì)胞異常增多，SHb疾病時(shí)，測定液體發(fā)生渾濁，可增加NaCl，消除影響。2.廢液的處理每升加次氯酸鈉35ml，敞開過夜。CN-氧化成CO2和N2，或水解CO32-和NH4+。3、對(duì)分光光度計(jì)相關(guān)參數(shù)的校正。精選ppt（六）方法學(xué)評(píng)價(jià)該方法結(jié)果穩(wěn)定可靠，操作簡便，為標(biāo)準(zhǔn)方法，但有一定毒性。除了該方法外，還有

4、SDS-Hb法和沙利氏法等，但SDS本身質(zhì)量差異大，摩爾消光系數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)液有待研究，為次選方法。沙利氏法誤差大，已經(jīng)被基本淘汰。精選ppt精選ppt血涂片制備、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)精選ppt血涂片制備實(shí)驗(yàn)原理： 使用推片將血液在載玻片上制成血膜。實(shí)驗(yàn)步驟：1、采血：直接用潔凈的玻片蘸一滴血（使用毛細(xì)血管采血的方法）。2、推片：左手平置載玻片，右手持推片從后方或前方接近血滴，使血液沿推片的邊緣展開適當(dāng)?shù)膶挾龋⒓磳⑼破c載玻片呈30-45度角，輕壓推片邊緣將血液推制成厚薄適當(dāng)?shù)难科科瑧?yīng)呈舌狀，頭、體、尾清晰可見。3、干燥：將推好的血涂片在空氣中晃動(dòng)，使其迅速干燥。4、標(biāo)記：在載玻片的一端用記號(hào)筆

5、編號(hào)。精選ppt精選ppt精選ppt血涂片制備注意事項(xiàng)：1、要制備良好的血涂片，玻片必須干凈。2、最好使用非抗凝血制備，也可以EDTA抗凝血制備。3、血膜應(yīng)厚薄適當(dāng)，頭尾及兩側(cè)應(yīng)有一定的空隙。4、血涂片必須充分干燥后方可固定染色，否則細(xì)胞尚未牢固地吸附在玻片上，在染色過程中容易脫落。5、蘸在玻片上的血液量要適度，過多或過少均會(huì)影響涂片的結(jié)果。精選ppt血涂片染色實(shí)驗(yàn)原理： 不同種類的細(xì)胞及細(xì)胞的不同成分對(duì)酸性或堿性染料的親和力不同，因而瑞氏染色后各種血細(xì)胞顯示出各自的染色特征。實(shí)驗(yàn)步驟：1、待血涂片干燥后，用蠟筆在兩端劃線，以防染色時(shí)染液外溢。將玻片平置于染色架上，滴加染液3-5滴，使其迅速蓋

6、滿血涂片，約0.5-1 min后，滴加等量的或稍多的緩沖液，用吸耳球?qū)?zhǔn)血片吹氣，使染液充分混合。2、沖洗：室溫染色5-10min后用流水沖去染液，待干。3、觀察結(jié)果：將干燥后的血片置顯微鏡下觀察。用低倍鏡觀察血涂片體尾交界處血細(xì)胞平鋪的部分。精選ppt血涂片染色注意事項(xiàng)：1、未干透的血膜不能染色，否則細(xì)胞容易脫落。2、染液的量應(yīng)適度，過少易揮發(fā)沉淀。3、染色時(shí)間的長短與染液濃度、染色時(shí)溫度及血細(xì)胞的多少有關(guān)。4、沖洗時(shí)不能先倒掉染液，應(yīng)以流水沖洗以防染料沉著在血涂片上。5、染色過淡，可以復(fù)染，復(fù)染時(shí)應(yīng)先加緩沖液，創(chuàng)造良好環(huán)境，而后加染液，或加染液與緩沖液的混合液而不能先加染液。6、血細(xì)胞中的

7、各種有機(jī)物質(zhì)特別是蛋白質(zhì)對(duì)染色環(huán)境中氫離子濃度十分敏感。染色環(huán)境偏酸，增強(qiáng)伊紅著色，紅細(xì)胞和嗜酸粒細(xì)胞偏紅，細(xì)胞核呈淡藍(lán)或不著色，染色環(huán)境偏堿，增強(qiáng)天青著色，所有細(xì)胞呈灰藍(lán)色，顆粒深藍(lán)。精選ppt白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)原理： 血細(xì)胞經(jīng)涂片、固定和染色后，根據(jù)不同的形態(tài)和染色特征可將各種白細(xì)胞區(qū)分開來，計(jì)數(shù)一定數(shù)量的白細(xì)胞并進(jìn)行分類、匯總，可計(jì)算出各種白細(xì)胞所占的百分比。實(shí)驗(yàn)步驟：1、血涂片的制備與染色。2、鏡檢：使用低倍鏡瀏覽全片，觀察細(xì)胞的著色、分布情況。高倍鏡檢查有無異常或外來細(xì)胞。最后選擇血涂片體尾交界處染色良好、分布均勻的區(qū)域，滴香柏油一滴，在油鏡下按一定順序?qū)σ曇爸兴姷陌准?xì)胞進(jìn)行分類。要避免重復(fù)計(jì)數(shù)或漏計(jì)，不可主觀選擇視野。共計(jì)數(shù)100-200個(gè)白細(xì)胞。計(jì)數(shù)時(shí)還要觀察血細(xì)胞的形態(tài)、分布、染色情況，并注意有無寄生蟲及其他異常改變。3、結(jié)果匯總：統(tǒng)計(jì)各類白細(xì)胞所占百分率，并計(jì)算絕對(duì)值。精選ppt白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)注意事項(xiàng)：1、載玻片的質(zhì)量；2、血膜的質(zhì)量；3、染色；4、各種白細(xì)胞的觀察與識(shí)別；5、如染色過深，可用甲醇或乙醇適當(dāng)脫色；染色過淺時(shí)可用緩沖液將染液稀釋后復(fù)染。6、發(fā)現(xiàn)有核紅細(xì)胞時(shí)應(yīng)單獨(dú)計(jì)數(shù)，不計(jì)入100個(gè)白細(xì)胞內(nèi)，以分類100個(gè)白細(xì)胞同時(shí)見多少有核紅細(xì)胞來報(bào)告。精選ppt白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)臨床意